【概要描述(shu)】兔(tu)臍(qi)靜脈內皮(pi)細(xi)胞(bao)的相關(guan)產(chan)品：hepG2-coGFP-PURO人肝(gan)癌細(xi)胞(bao)小鼠(shu)原(yuan)代鼻腔粘(zhan)膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代甲狀(zhuang)腺上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代肺巨噬(shi)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代視網膜微血管周(zhou)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代杏(xing)仁核神經元(yuan)細(xi)胞(bao)人原代Ⅱ型(xing)肺泡上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代結(jie)腸神經元(yuan)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)原(yuan)代腎上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代心室心肌細(xi)胞(bao)

兔(tu)臍(qi)靜脈內皮(pi)細(xi)胞(bao)

包(bao)被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含(han)FBS、生長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次(ci)

生長特性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 內皮(pi)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳(chuan)5代左(zuo)右(you)；3代以內(nei)狀態

消化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

兔(tu)臍(qi)靜脈內皮(pi)分(fen)離自(zi)臍(qi)帶(dai)組織；它(ta)是臍(qi)靜脈的重要結(jie)構(gou)組(zu)成(cheng)細(xi)胞(bao)之壹，在機體(ti)的正(zheng)常生理(li)過(guo)程中(zhong)發揮(hui)著重要作用(yong)。臍(qi)帶(dai)是哺乳類的連接胎(tai)兒和胎(tai)盤(pan)的(de)管狀(zhuang)結(jie)構(gou)，臍(qi)帶(dai)中(zhong)通過(guo)尿膜的血管即(ji)臍(qi)動脈和臍(qi)靜脈，卵黃(huang)囊(nang)的(de)血管即(ji)臍(qi)腸系膜動脈及(ji)臍(qi)腸系膜靜脈。在子宮中(zhong)，子宮動脈在胎(tai)盤(pan)的(de)母體(ti)部分(fen)出(chu)的毛細(xi)血管，與(yu)胎(tai)盤(pan)的(de)子體(ti)部胎(tai)兒毛細(xi)血管靠(kao)近(jin)，在此處母體(ti)和胎(tai)兒的血液間進(jin)行(xing)CO2和O2，代謝產(chan)物即代謝廢物和營養物質的交換(huan)。臍(qi)動脈將胎(tai)兒產(chan)生(sheng)的(de)廢物運送至胎(tai)盤(pan)，臍(qi)靜脈將O2和營養物質從(cong)胎(tai)盤(pan)運(yun)送給胎(tai)兒。
方法簡介：

公司實(shi)驗室分離的(de)兔(tu)臍(qi)靜脈內皮(pi)采用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)聯(lian)合消化(hua)法結(jie)合差(cha)速貼壁(bi)法、並通(tong)過內皮(pi)細(xi)胞(bao)專(zhuan)用(yong)培養基培養篩選(xuan)制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗室分離的(de)兔(tu)臍(qi)靜脈內皮(pi)經(jing)CD31免疫(yi)熒光鑒(jian)定(ding)，純度可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和真菌(jun)等。

壹、細(xi)胞(bao)培養

1取材(cai) 在無(wu)菌(jun)環(huan)境(jing)下(xia)從(cong)機體(ti)取出(chu)某種(zhong)組織細(xi)胞(bao)（視實驗目的而(er)定(ding)），經(jing)過壹定(ding)的(de)處理(li)（如消(xiao)化(hua)分(fen)散細(xi)胞(bao)、分離等）後(hou)接(jie)入培養器(qi)血中(zhong)，這壹(yi)過程稱(cheng)為(wei)取材。如是(shi)細(xi)胞(bao)株的(de)擴(kuo)大(da)培養則無(wu)取(qu)材(cai)這壹(yi)過程。機體(ti)取出(chu)的組織細(xi)胞(bao)的培養稱為(wei)原代培養。2培養 將取得(de)的(de)組(zu)織細(xi)胞(bao)接入培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養板(ban)中(zhong)的過(guo)程稱(cheng)為(wei)培養。3凍存及(ji)復(fu)蘇(su)（可參(can)閱後(hou)面有(you)關(guan)章節）為(wei)了保存細(xi)胞(bao)，特別(bie)是不易(yi)獲(huo)得(de)的(de)突(tu)變型(xing)細(xi)胞(bao)或細(xi)胞(bao)株，要將細(xi)胞(bao)凍存。凍(dong)存的(de)溫度(du)壹般(ban)用(yong)液氮(dan)的溫(wen)度－196℃，將細(xi)胞(bao)收集(ji)至凍(dong)存管中(zhong)加入含(han)保護(hu)劑(ji)（壹般(ban)為(wei)二甲亞碸(feng)或甘(gan)油）的培(pei)養基，以壹定(ding)的(de)冷卻速度凍(dong)存，最終(zhong)保存於(yu)液氮(dan)中(zhong)。在極低的(de)溫度下，細(xi)胞(bao)保存的(de)時間幾乎是無(wu)限的。復蘇壹般(ban)采用(yong)快(kuai)融方法，即從(cong)液氮(dan)中(zhong)取出(chu)凍存管後(hou)，立(li)即放(fang)入37℃水(shui)中(zhong)，使之(zhi)在壹分鐘(zhong)內(nei)迅速融解。然(ran)後將細(xi)胞(bao)轉(zhuan)入培養器(qi)皿中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

二、原(yuan)代細(xi)胞(bao)分離

凡是(shi)來源於(yu)胚(pei)胎(tai)、組織器(qi)官(guan)及(ji)外周血，經特(te)殊(shu)分離方(fang)法制備而(er)來的(de)原初培(pei)養的細(xi)胞(bao)稱之為(wei)原代細(xi)胞(bao)。1懸浮細(xi)胞(bao)的分離方(fang)法組織材料(liao)若(ruo)來自(zi)血液、羊(yang)水(shui)、胸(xiong)水(shui)或(huo)腹(fu)水(shui)的(de)懸液材(cai)料(liao)，的(de)方(fang)法是采用(yong)1000r/min的低速離心10分鐘(zhong)。經(jing)離心後由於(yu)各(ge)種(zhong)細(xi)胞(bao)的比重不同(tong)可(ke)在分層液中(zhong)形(xing)成(cheng)不(bu)同(tong)層，這樣(yang)可根據(ju)需(xu)要收獲目的(de)細(xi)胞(bao)。2實體(ti)組織材料(liao)的(de)分(fen)離方(fang)法對於(yu)實體(ti)組織材料(liao)，由於(yu)細(xi)胞(bao)間結(jie)合緊(jin)密，為(wei)了使組織中(zhong)的細(xi)胞(bao)充分分散，形(xing)成(cheng)細(xi)胞(bao)懸液，可(ke)采用(yong)機械(xie)分(fen)散法（物理(li)裂解）和消(xiao)化(hua)分(fen)離法。

三、細(xi)胞(bao)增殖(zhi)檢(jian)測(ce)技(ji)術(shu)

目前(qian)主(zhu)要有(you)兩(liang)種(zhong)用(yong)於檢(jian)測(ce)細(xi)胞(bao)增殖(zhi)能力(li)的方(fang)法。壹種(zhong)是直(zhi)接(jie)的方(fang)法，通過(guo)直接測(ce)定(ding)進(jin)行(xing)分裂

的細(xi)胞(bao)數來評(ping)價細(xi)胞(bao)的增殖(zhi)能力(li)。另(ling)壹(yi)種(zhong)是間接(jie)的(de)方法，即細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)（cell viability）檢(jian)測(ce)方法，通過(guo)檢(jian)測(ce)樣(yang)品中(zhong)健(jian)康(kang)細(xi)胞(bao)的數目(mu)來評(ping)價細(xi)胞(bao)的增殖(zhi)能力(li)。顯然(ran)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)法並不(bu)能最終(zhong)證(zheng)明檢(jian)測(ce)樣(yang)品中(zhong)的細(xi)胞(bao)是否在增殖(zhi)。如細(xi)胞(bao)在某壹培(pei)養條件下(xia)會(hui)自(zi)發(fa)啟動雕亡(wang)程序(xu)，但(dan)藥(yao)物的幹擾可(ke)抑(yi)制雕(diao)亡(wang)的(de)發生(sheng)；這時(shi)若(ruo)采用(yong)細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)法，顯然(ran)可以(yi)區(qu)分兩(liang)種(zhong)條件下(xia)的細(xi)胞(bao)數量(liang)，但我(wo)們並不(bu)能從(cong)藥(yao)物幹擾組(zu)細(xi)胞(bao)數大於(yu)對(dui)照(zhao)組的(de)事(shi)實說明藥(yao)物可促進(jin)細(xi)胞(bao)增殖(zhi)的(de)結(jie)論。所(suo)以最直接(jie)的證(zheng)據(ju)應(ying)該采用(yong)方法壹。

取材(cai)：首(shou)先，用(yong)培養液濕(shi)潤(run)所取的(de)組織材料(liao)，並(bing)用(yong)鋒利(li)的眼科(ke)剪(jian)去除(chu)附(fu)在其上(shang)的(de)脂(zhi)肪和結(jie)締組(zu)織。接著用(yong)平衡液（如PBS或(huo)Hanks液）漂(piao)洗，再用(yong)眼科(ke)彎剪將組織塊剪(jian)成小塊(kuai)。多(duo)次(ci)用(yong)PBS或Hanks液漂(piao)洗，直(zhi)到液體(ti)清亮(liang)、無(wu)油(you)滴(di)為(wei)止(zhi)。

接種(zhong)：用(yong)濕潤(run)的吸管吸(xi)取(qu)切碎(sui)的(de)組織塊，輕(qing)輕(qing)吹到培(pei)養瓶皿(min)中(zhong)，並按(an)壹(yi)定(ding)間距(ju)均勻(yun)放(fang)在培養瓶底(di)壁(bi)上(shang)。註(zhu)意不(bu)要過多(duo)，確(que)保組(zu)織塊切面(mian)貼(tie)在培養瓶底(di)壁(bi)上(shang)。

培養：將培養瓶翻轉(zhuan)，使瓶底(di)朝上(shang)，在種(zhong)植了組織塊壹(yi)側的對(dui)側(ce)面(mian)加足培養液，避(bi)免組(zu)織塊與(yu)培養液接(jie)觸(chu)，然(ran)後塞(sai)緊(jin)瓶塞(sai)。將種(zhong)植了組織塊的(de)壹側朝上(shang)，靜置於(yu)37℃培養箱中(zhong)。待組(zu)織塊貼(tie)壁1到3小(xiao)時(shi)後(hou)翻瓶，使(shi)貼(tie)壁的組(zu)織塊浸(jin)沒(mei)在培養液中(zhong)，繼續(xu)靜置。換(huan)液：每隔2到(dao)3天(tian)更換(huan)壹次(ci)培(pei)養液，或(huo)者(zhe)根據(ju)培(pei)養瓶種(zhong)顏色(se)的(de)變化確(que)定(ding)換(huan)液時(shi)間。

壹、原(yuan)代細(xi)胞(bao)計(ji)數

將血球計(ji)數板(ban)及(ji)蓋(gai)片用(yong)擦(ca)試幹(gan)凈，並將蓋(gai)片蓋(gai)在計(ji)數板(ban)上(shang)。

將細(xi)胞(bao)懸液吸(xi)出(chu)少許，滴(di)加在蓋(gai)片邊緣(yuan)，使(shi)懸液充滿(man)蓋(gai)片和計(ji)數板(ban)之(zhi)間。

靜置3分(fen)鐘(zhong)。

鏡下(xia)觀察，計(ji)算計(ji)數板(ban)四(si)大(da)格細(xi)胞(bao)總(zong)數，壓(ya)線(xian)細(xi)胞(bao)只(zhi)計(ji)左(zuo)側(ce)和上(shang)方(fang)的(de)。然(ran)後按(an)下(xia)式計(ji)算：

細(xi)胞(bao)數/ml＝4大格(ge)細(xi)胞(bao)總(zong)數/ 4×10000

註(zhu)意：鏡(jing)下偶見(jian)由兩(liang)個以上(shang)細(xi)胞(bao)組成的(de)細(xi)胞(bao)團，應按(an)單(dan)個細(xi)胞(bao)計(ji)算，若(ruo)細(xi)胞(bao)團占10%以(yi)上(shang)，說(shuo)明分散不(bu)好(hao)，需(xu)重新(xin)制備細(xi)胞(bao)懸液。

二、原(yuan)代細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)

將細(xi)胞(bao)懸液以(yi)0.5ml加入試管中(zhong)。

加入0.5ml 0.4%臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染液，染色(se)2壹(yi)3分鐘(zhong)。

吸取(qu)少許懸(xuan)液塗(tu)於(yu)載玻片上(shang)，加上(shang)蓋(gai)片。

鏡下(xia)取幾個任意視野分別(bie)計(ji)死細(xi)胞(bao)和活(huo)細(xi)胞(bao)數，計(ji)細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)。

死細(xi)胞(bao)能被臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染上(shang)色(se)，鏡(jing)下可(ke)見(jian)深蘭(lan)色(se)的(de)細(xi)胞(bao)，活(huo)細(xi)胞(bao)不被染色(se)，鏡(jing)下呈(cheng)無(wu)色(se)透明狀。

活(huo)力(li)測定(ding)可(ke)以和細(xi)胞(bao)計(ji)數合(he)起(qi)來進(jin)行(xing)，但要考慮到染液對(dui)原細(xi)胞(bao)懸液的(de)加倍稀(xi)釋作用(yong)。