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蛋(dan)白(bai)激酶(mei)受(shou)體(ti)B2抗體樣(yang)本(ben)的物種 應選擇(ze)物種相同或有(you)交叉反(fan)應的(de)抗體,抗體可(ke)能與(yu)不同(tong)物(wu)種的同種靶蛋(dan)白(bai)有(you)交叉反(fan)應,因(yin)其(qi)氨(an)基(ji)酸序(xu)列同源性較(jiao)高,如果樣(yang)本(ben)的種類未列入抗體說(shuo)明書(shu)上(shang)的(de)交叉反(fan)應種屬表(biao)中(zhong),並不意味(wei)著(zhe)該(gai)抗(kang)體(ti)不(bu)適(shi)用(yong)於(yu)檢(jian)測該(gai)物(wu)種的蛋(dan)白(bai),而只(zhi)是(shi)表(biao)示(shi)該(gai)物(wu)種尚(shang)未用(yong)此(ci)抗(kang)體(ti)檢(jian)測驗證(zheng)過,應(ying)通(tong)過(guo)序(xu)列比對的(de)方法(fa)來(lai)預(yu)測(ce)交叉反(fan)應,可(ke)應用(yong)Expasy 和 NCBI BLAST 來(lai)進行(xing)不同物(wu)種蛋(dan)白(bai)同源性(xing)比對。
蛋(dan)白(bai)激酶(mei)受(shou)體(ti)B2抗體壹抗宿(xiu)主物(wu)種的選擇(ze)壹般(ban)說(shuo)來(lai),在使用(yong)偶(ou)聯(lian)二抗結合無(wu)偶聯物(wu)的(de)壹抗時(shi),壹抗宿(xiu)主動(dong)物的(de)物(wu)種選擇(ze)較(jiao)為(wei)重要,對於(yu)免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)而言,盡可(ke)能選(xuan)擇(ze)與(yu)樣(yang)本(ben)不同種系物種的壹抗,從(cong)而(er)避(bi)免(mian)二抗與(yu)樣(yang)本(ben)內源性(xing)免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)產生(sheng)交叉反(fan)應,例(li)如:檢(jian)測小(xiao)鼠樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai),則不應(ying)選(xuan)擇(ze)小(xiao)鼠或大鼠(shu)源(yuan)的(de)壹抗,選(xuan)兔源(yuan)的(de)壹抗,則二抗則可(ke)選擇(ze)偶聯了(le)檢(jian)測分子(酶(mei)、熒(ying)光(guang)素、等)的抗兔IgG。
如(ru)果(guo)選(xuan)擇(ze)有(you)偶(ou)聯(lian)物(wu)的壹抗則不適(shi)用(yong)上(shang)述情(qing)況(kuang),除免疫(yi)組(zu)化(hua)外的(de)其(qi)它(ta)對不(bu)含(han)內源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)樣(yang)本(ben)的檢(jian)測方法(fa),則抗體(ti)宿(xiu)主物(wu)種的影響(xiang)不大(da),如(ru)對不(bu)含(han)IgG 的細(xi)胞裂解(jie)物樣(yang)本(ben)的western blotting檢(jian)測,盡(jin)管如(ru)此,含(han)有(you)血清(qing)的組(zu)織裂(lie)解(jie)物和組(zu)織培養(yang)上清(qing)中含(han)有(you)免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白(bai),還(hai)原變性(xing)樣(yang)本(ben)中含(han)IgG,在western blot 檢(jian)測中(zhong)則結合出現(xian)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕(qing)鏈條(tiao)帶。
二抗的(de)選擇(ze) 二抗應(ying)選用(yong)與(yu)使用(yong)的(de)壹抗相(xiang)同(tong)的物種來(lai)源,例(li)如:如果妳(ni)的(de)壹抗是(shi)小(xiao)鼠的單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti),二抗則選抗(kang)小(xiao)鼠的二抗anti-mouse secondary。建議檢(jian)查二抗說(shuo)明書(shu)確(que)保該(gai)抗(kang)體(ti)適(shi)用(yong)於(yu)妳(ni)的(de)檢(jian)測應(ying)用(yong), 二抗壹般(ban)連(lian)接(jie)熒(ying)光(guang)素FITC 或發(fa)光團。
上海谷研(yan)生(sheng)物科(ke)技有(you)限(xian)公(gong)司(si)特殊抗(kang)體(ti)的保存條(tiao)件(jian):
. 酶(mei)聯(lian)抗(kang)體(ti):永(yong)遠保存在4 度(du),避(bi)免(mian)凍(dong)起(qi)來(lai)。否則會導(dao)致酶(mei)活(huo)性(xing)的(de)下(xia)降(jiang)或者(zhe)喪(sang)失
2. 偶聯抗體(ti):所(suo)有(you)偶(ou)聯(lian)抗(kang)體都是在棕(zong)色(se)管中(zhong)或使用(yong)錫(xi)箔(bo)紙避(bi)光保存。尤(you)其(qi)是(shi)熒光(guang)抗(kang)體(ti),對
光(guang)極(ji)為(wei)敏感(gan),因此(ci)在所有(you)的(de)實(shi)驗階(jie)段(duan)也(ye)是(shi)要避(bi)光(guang)操(cao)作的!
3. IgG3 的(de)同(tong)型對照(zhao):永(yong)遠保存在4 度(du),避(bi)免(mian)凍(dong)起(qi)來(lai)。因為(wei)如果出現(xian)凍融(rong)過(guo)程(cheng),該(gai)抗(kang)體(ti)非(fei)常(chang)
容易形成(cheng)多聚(ju)體無(wu)論是保存還(hai)是運(yun)輸(shu),避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)!
反(fan)復凍融(rong)會導(dao)致抗體變性(xing),導(dao)致多聚(ju)體形成(cheng),從(cong)而(er)降(jiang)低抗(kang)體的結合能(neng)力(li)!
其(qi)它(ta)相關(guan)信(xin)息(xi):
Aloe-emodin 蘆薈大(da)黃(huang)素
Aluminum powder 鋁(lv)粉
Aluminum acetate, basic 堿(jian)式乙(yi)酸鋁(lv)
Aluminum ammonium sulfate, dodecahydrate 硫(liu)酸銨(an)鋁(lv)十(shi)二水
Aluminum chloride, anhydrous 無(wu)水三氯(lv)化(hua)鋁(lv)
Aluminum chloride, hexahydrate 氯(lv)化(hua)鋁(lv)
Aluminum distearate 堿(jian)式硬脂酸鋁(lv)堿(jian)
Aluminum stearate 硬脂酸鋁(lv)
Aluminum fluoride trihydrate 氟(fu)化(hua)鋁(lv)三水
Aluminum hydroxide
Aluminum isopropoxide 異丙醇(chun)鋁(lv)
Aluminum nitrate, nonahydrate 硝酸鋁(lv)九(jiu)水
Aluminum oxide, active 酸(suan)性氧化(hua)鋁(lv)
Aluminum oxide, active 中(zhong)性氧化(hua)鋁(lv)
Aluminon 玫紅(hong)三羧(suo)酸(suan)銨(an)
Amaranth 莧(xian)菜(cai)紅
3-Aminoisonicotinic acid 3-氨(an)基(ji)異
Aluminum oxide, active 堿性(xing)氧化(hua)鋁(lv)
Aluminum potassium sulfate docecahydrate 硫(liu)酸鋁(lv)鉀(jia)十(shi)二水
Aluminum silicate 矽(gui)酸鋁(lv)
關(guan)於加入甘(gan)油(you)保存:有(you)些人(ren)會加50%的甘(gan)油(you)到抗體(ti)中(zhong)來(lai)避免(mian)反(fan)復凍融(rong),甘(gan)油(you)在-20 度(du) 會降(jiang)低冰點(dian)。這對很(hen)多(duo)抗(kang)體(ti)可(ke)能是(shi)可(ke)行的(de)。但(dan)是(shi)abcam 僅(jin)對非(fei)常(chang)小(xiao)的壹部(bu)分抗體(ti)檢(jian)測過(guo)其(qi)在這種條件(jian)下(xia)的穩(wen)定性(xing);而(er)abcam 只(zhi)對按(an)照(zhao)條(tiao)件(jian)保存的(de)抗體(ti)提供(gong)質(zhi)量(liang)保證(zheng)!加入甘(gan)油(you)的(de)溶液不建議在-80 度(du)保存,因(yin)為(wei)這已經超過(guo)了甘(gan)油(you)的(de)冰點(dian)。如果您要(yao)加入甘(gan)油(you)來(lai)保存抗(kang)體的(de)話(hua),請(qing)謹(jin)慎(shen)註(zhu)意(yi)無(wu)菌操(cao)作,避免(mian)汙(wu)染!
關(guan)於(yu)蛋(dan)白(bai)保護劑(ji):
蛋(dan)白(bai)在高濃度(du)時(shi)更(geng)不容易降(jiang)解(jie)( mg/ml 或者(zhe)更高),這就是(shi)為(wei)什麽在抗體(ti)中加入BSA 之(zhi)類作為(wei)穩定劑的原因了;另(ling)壹方面(mian),加入的(de)蛋(dan)白(bai)也(ye)可(ke)以減少(shao)抗(kang)體(ti)由於(yu)管壁吸附(fu)所造(zao)成的(de)損(sun)失。但(dan)是(shi)如(ru)果(guo)抗體要用(yong)來(lai)標記(ji)的話(hua),則不能(neng)加入蛋(dan)白(bai)穩定劑(ji),因為(wei)這些穩(wen)定(ding)劑(ji)會和抗體壹起競(jing)爭(zheng)結合標記(ji)物。
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