【概(gai)要(yao)描述】豬脂肪細(xi)胞(bao)的相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin)：NCI-H1299/LUC (STR)人非小細(xi)胞(bao)兔原(yuan)代心臟微血管(guan)內皮細(xi)胞(bao)人原(yuan)代卵(luan)巢(chao)間質(zhi)細胞(bao)小鼠(shu)原(yuan)代股動(dong)脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)大鼠原(yuan)代主動(dong)脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)兔原(yuan)代胰腺(xian)導(dao)管上皮細(xi)胞(bao)人原(yuan)代腦微血管(guan)內皮細(xi)胞(bao)雞(ji)原(yuan)代脂肪幹(gan)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)原(yuan)代海綿(mian)體平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)原(yuan)代肺(fei)動(dong)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞(bao)

豬脂肪細(xi)胞(bao)

培養(yang)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天(tian)換液壹次(ci)

生長特(te)性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 梭(suo)形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳代特(te)性 屬(shu)於(yu)終(zhong)末(mo)分化細(xi)胞(bao)；屬(shu)於(yu)不增(zeng)殖(zhi)細胞(bao)群

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

豬脂肪分離自(zi)脂肪組(zu)織；脂肪組(zu)織主(zhu)要由(you)大量群集(ji)的脂肪細(xi)胞(bao)構成，聚(ju)集(ji)成團(tuan)的脂肪細(xi)胞(bao)由(you)薄(bo)層(ceng)疏(shu)松結締組(zu)織分隔(ge)成小(xiao)葉(ye)；貯(zhu)存的脂肪，在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)可迅(xun)速分解成甘(gan)油和脂肪酸(suan)，經血液(ye)輸送(song)到各組(zu)織以(yi)供利(li)用(yong)。它(ta)們(men)影響胰島(dao)素(su)敏(min)感(gan)性、血壓(ya)水平、內皮功(gong)能、纖(xian)溶活動(dong)及(ji)炎癥反(fan)應(ying)，參(can)與(yu)多(duo)種(zhong)重要病(bing)理(li)生理(li)過(guo)程；脂肪組(zu)織已(yi)由(you)過(guo)去(qu)單純作為能量儲存的器官(guan)而成為(wei)壹(yi)個極其重要的內分泌系(xi)統(tong)。脂肪細(xi)胞(bao)分為白(bai)色(se)脂肪細(xi)胞(bao)和褐色(se)（棕(zong)色(se)）脂肪細(xi)胞(bao)，常(chang)呈(cheng)白(bai)色(se)，在嬰幼兒期大量增殖(zhi)，到青(qing)春期數(shu)量達(da)到，此(ci)後數(shu)量壹般(ban)不(bu)再(zai)增(zeng)加。細胞(bao)內含有(you)大量富含脂肪的小泡，稱為脂質(zhi)泡，富含光面(mian)內質(zhi)網。此(ci)外，還有(you)壹種(zhong)褐色(se)脂肪細(xi)胞(bao)，在動(dong)物(wu)體內主要(yao)存在(zai)於肩胛骨間(jian)、頸(jing)背(bei)部(bu)、腋(ye)窩(wo)、縱(zong)隔(ge)及(ji)腎(shen)臟(zang)周圍，含有(you)高(gao)度團(tuan)縮的褐色(se)脂肪，作用(yong)是(shi)將脂質(zhi)分解產(chan)熱(re)，調(tiao)節(jie)體內脂質(zhi)比例。
方法(fa)簡介(jie)：

公司(si)實驗室分離的豬脂肪采(cai)用(yong)yi蛋白(bai)酶消(xiao)化(hua)法(fa)制備而來，細胞(bao)總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實驗室分離的豬脂肪經油紅O染色(se)檢測(ce)，純度(du)可達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

壹、細(xi)胞(bao)培養(yang)

1取材(cai) 在(zai)無菌環境(jing)下(xia)從機(ji)體取出(chu)某(mou)種(zhong)組織細(xi)胞(bao)（視(shi)實驗目的而定），經過(guo)壹(yi)定的處理(li)（如消(xiao)化(hua)分散細(xi)胞(bao)、分離等(deng)）後接入培養(yang)器血中，這壹(yi)過(guo)程稱為(wei)取材(cai)。如是(shi)細(xi)胞(bao)株的擴大培養(yang)則無(wu)取材(cai)這壹過(guo)程。機體取出(chu)的組織細(xi)胞(bao)的培養(yang)稱為(wei)原(yuan)代培養(yang)。2培養(yang) 將取得(de)的組織細(xi)胞(bao)接入(ru)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)板(ban)中的過(guo)程稱為(wei)培養(yang)。3凍存(cun)及(ji)復蘇（可(ke)參(can)閱後面有關(guan)章節(jie)）為了(le)保(bao)存細(xi)胞(bao)，特(te)別(bie)是(shi)不(bu)易獲得(de)的突變型細(xi)胞(bao)或細(xi)胞(bao)株，要(yao)將細胞(bao)凍存(cun)。凍存(cun)的溫(wen)度(du)壹(yi)般(ban)用(yong)液(ye)氮的溫(wen)度(du)－196℃，將細胞(bao)收(shou)集(ji)至凍存(cun)管(guan)中加入(ru)含(han)保(bao)護劑(ji)（壹般(ban)為(wei)二甲亞(ya)碸或(huo)甘(gan)油）的培養(yang)基，以(yi)壹(yi)定的冷卻速(su)度凍存(cun)，最(zui)終(zhong)保(bao)存於(yu)液氮中。在極(ji)低(di)的溫(wen)度(du)下(xia)，細(xi)胞(bao)保(bao)存的時(shi)間幾(ji)乎是(shi)無(wu)限(xian)的。復蘇壹(yi)般(ban)采(cai)用(yong)快(kuai)融(rong)方法(fa)，即從液(ye)氮中取出(chu)凍存(cun)管(guan)後，立即放入(ru)37℃水中，使之在(zai)壹分鐘內迅(xun)速融(rong)解(jie)。然後將細胞(bao)轉入(ru)培養(yang)器皿中進行培(pei)養(yang)。

二、原(yuan)代細胞(bao)分離

凡是(shi)來(lai)源(yuan)於(yu)胚(pei)胎(tai)、組織器官(guan)及(ji)外周血，經特(te)殊(shu)分離方法(fa)制備而來的原(yuan)初(chu)培(pei)養(yang)的細胞(bao)稱之為(wei)原(yuan)代細胞(bao)。1懸浮細(xi)胞(bao)的分離方法(fa)組織材(cai)料若來(lai)自(zi)血液(ye)、羊水、胸水或腹(fu)水的懸液材(cai)料，的方法(fa)是(shi)采(cai)用(yong)1000r/min的低(di)速離心10分鐘。經離心後由(you)於(yu)各種(zhong)細(xi)胞(bao)的比重不同(tong)可(ke)在分層(ceng)液(ye)中形(xing)成不(bu)同(tong)層(ceng)，這(zhe)樣可(ke)根據(ju)需(xu)要(yao)收(shou)獲目的細胞(bao)。2實體組織材(cai)料的分離方法(fa)對(dui)於(yu)實體組織材(cai)料，由(you)於(yu)細(xi)胞(bao)間結合(he)緊密(mi)，為了(le)使組織中的細胞(bao)充分分散，形(xing)成細(xi)胞(bao)懸液，可(ke)采(cai)用(yong)機(ji)械(xie)分散法(fa)（物理(li)裂(lie)解）和消(xiao)化(hua)分離法(fa)。

三(san)、細(xi)胞(bao)增殖(zhi)檢測(ce)技術

目前(qian)主(zhu)要有兩(liang)種(zhong)用(yong)於(yu)檢測細胞(bao)增殖(zhi)能力的方法(fa)。壹種(zhong)是(shi)直(zhi)接(jie)的方法(fa)，通過(guo)直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)進(jin)行分裂

的細胞(bao)數(shu)來(lai)評(ping)價(jia)細胞(bao)的增殖(zhi)能力。另壹(yi)種(zhong)是(shi)間(jian)接(jie)的方法(fa)，即細胞(bao)活力（cell viability）檢測(ce)方法(fa)，通過(guo)檢(jian)測樣品(pin)中健康(kang)細(xi)胞(bao)的數(shu)目來評(ping)價(jia)細胞(bao)的增殖(zhi)能力。顯然，細(xi)胞(bao)活力檢測(ce)法(fa)並(bing)不(bu)能最(zui)終(zhong)證(zheng)明檢(jian)測(ce)樣品(pin)中的細胞(bao)是(shi)否(fou)在(zai)增殖(zhi)。如細(xi)胞(bao)在某(mou)壹(yi)培養(yang)條(tiao)件下會自(zi)發(fa)啟動(dong)雕亡程序，但藥(yao)物(wu)的幹擾可抑(yi)制雕亡的發生；這時(shi)若采(cai)用(yong)細(xi)胞(bao)活力檢測(ce)法(fa)，顯然可(ke)以(yi)區(qu)分兩種(zhong)條(tiao)件下的細胞(bao)數(shu)量，但我(wo)們(men)並(bing)不(bu)能從藥(yao)物(wu)幹(gan)擾組細(xi)胞(bao)數(shu)大於對(dui)照組的事實說(shuo)明藥(yao)物(wu)可促(cu)進細胞(bao)增殖(zhi)的結論(lun)。所以(yi)最(zui)直(zhi)接(jie)的證據(ju)應(ying)該(gai)采(cai)用(yong)方法(fa)壹。

取材(cai)：首(shou)先，用(yong)培(pei)養(yang)液濕潤所取(qu)的組織材(cai)料，並(bing)用(yong)鋒(feng)利(li)的眼科(ke)剪(jian)去(qu)除(chu)附(fu)在(zai)其上的脂肪和(he)結締組(zu)織。接(jie)著(zhe)用(yong)平(ping)衡液（如PBS或(huo)Hanks液(ye)）漂(piao)洗(xi)，再用(yong)眼科(ke)彎剪將組織塊(kuai)剪(jian)成小(xiao)塊(kuai)。多(duo)次(ci)用(yong)PBS或(huo)Hanks液漂(piao)洗(xi)，直(zhi)到(dao)液(ye)體清亮(liang)、無(wu)油滴為止。

接種(zhong)：用(yong)濕潤的吸管(guan)吸取切碎(sui)的組織塊(kuai)，輕(qing)輕吹(chui)到(dao)培(pei)養(yang)瓶皿中，並(bing)按壹定(ding)間距(ju)均勻放在培養(yang)瓶底壁上。註(zhu)意(yi)不要過(guo)多(duo)，確(que)保(bao)組織塊(kuai)切面(mian)貼(tie)在培(pei)養(yang)瓶底壁上。

培養(yang)：將培養(yang)瓶翻(fan)轉(zhuan)，使瓶底朝(chao)上，在種(zhong)植了(le)組織塊(kuai)壹(yi)側(ce)的對(dui)側(ce)面(mian)加(jia)足培(pei)養(yang)液，避(bi)免組(zu)織塊(kuai)與(yu)培養(yang)液接(jie)觸，然後塞(sai)緊(jin)瓶(ping)塞(sai)。將種植(zhi)了(le)組(zu)織塊(kuai)的壹側(ce)朝(chao)上，靜(jing)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中。待組織塊(kuai)貼(tie)壁1到3小(xiao)時(shi)後翻(fan)瓶(ping)，使貼(tie)壁的組織塊(kuai)浸(jin)沒(mei)在培養(yang)液中，繼續靜(jing)置。換(huan)液(ye)：每(mei)隔(ge)2到(dao)3天(tian)更(geng)換壹次(ci)培養(yang)液，或(huo)者根據(ju)培(pei)養(yang)瓶種(zhong)顏色(se)的變化確(que)定換液(ye)時(shi)間。

壹、原(yuan)代細胞(bao)計數(shu)

將血球(qiu)計數(shu)板(ban)及蓋(gai)片用(yong)擦(ca)試幹凈(jing)，並(bing)將蓋(gai)片蓋(gai)在計數(shu)板(ban)上。

將細胞(bao)懸液吸(xi)出(chu)少許，滴加(jia)在(zai)蓋(gai)片邊緣，使(shi)懸液充滿蓋(gai)片和(he)計數(shu)板(ban)之間(jian)。

靜(jing)置3分鐘。

鏡(jing)下觀察(cha)，計算計數(shu)板(ban)四大格(ge)細胞(bao)總(zong)數(shu)，壓(ya)線(xian)細(xi)胞(bao)只計左(zuo)側(ce)和(he)上方的。然後按下式(shi)計算：

細胞(bao)數(shu)/ml＝4大格(ge)細胞(bao)總(zong)數(shu)/ 4×10000

註(zhu)意(yi)：鏡(jing)下偶(ou)見(jian)由(you)兩(liang)個(ge)以(yi)上細胞(bao)組成的細胞(bao)團(tuan)，應(ying)按單個細(xi)胞(bao)計算，若細(xi)胞(bao)團(tuan)占10%以(yi)上，說(shuo)明分散不(bu)好(hao)，需(xu)重新(xin)制備細胞(bao)懸液。

二、原(yuan)代細胞(bao)活力

將細胞(bao)懸液以(yi)0.5ml加(jia)入試管中。

加入(ru)0.5ml 0.4%臺(tai)盼(pan)蘭染(ran)液，染色(se)2壹3分鐘。

吸取(qu)少(shao)許懸液塗於(yu)載(zai)玻(bo)片(pian)上，加上蓋(gai)片。

鏡(jing)下取幾(ji)個(ge)任(ren)意(yi)視(shi)野(ye)分別(bie)計死(si)細胞(bao)和活(huo)細胞(bao)數(shu)，計細胞(bao)活力。

死(si)細胞(bao)能被臺(tai)盼(pan)蘭染(ran)上色(se)，鏡(jing)下可見(jian)深(shen)蘭色(se)的細胞(bao)，活細(xi)胞(bao)不被染色(se)，鏡(jing)下呈(cheng)無色(se)透明狀(zhuang)。

活力測定(ding)可(ke)以(yi)和(he)細胞(bao)計數(shu)合(he)起來(lai)進行，但要(yao)考(kao)慮(lv)到(dao)染(ran)液(ye)對(dui)原(yuan)細(xi)胞(bao)懸液的加倍(bei)稀(xi)釋(shi)作用(yong)。