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生(sheng)長(chang)終止(zhi)特異性(xing)同源(yuan)盒基因抗(kang)體樣(yang)本的(de)物(wu)種(zhong) 應(ying)選(xuan)擇物(wu)種(zhong)相(xiang)同或(huo)有交叉(cha)反應(ying)的(de)抗(kang)體,抗(kang)體可(ke)能與(yu)不同物(wu)種(zhong)的(de)同種(zhong)靶(ba)蛋白(bai)有交叉(cha)反應(ying),因其(qi)氨基酸序(xu)列(lie)同源(yuan)性(xing)較(jiao)高,如果樣(yang)本的(de)種(zhong)類未(wei)列(lie)入抗(kang)體說(shuo)明書上的(de)交叉(cha)反應(ying)種(zhong)屬表(biao)中(zhong),並不意味(wei)著該(gai)抗(kang)體不(bu)適用於檢(jian)測(ce)該(gai)物(wu)種(zhong)的(de)蛋(dan)白(bai),而(er)只(zhi)是表(biao)示(shi)該(gai)物(wu)種(zhong)尚未(wei)用此抗(kang)體檢(jian)測(ce)驗(yan)證過(guo),應(ying)通過序(xu)列(lie)比對(dui)的(de)方(fang)法(fa)來(lai)預測(ce)交叉(cha)反應(ying),可應(ying)用Expasy 和 NCBI BLAST 來進行(xing)不(bu)同物(wu)種(zhong)蛋(dan)白同源(yuan)性(xing)比對(dui)。
生(sheng)長(chang)終止(zhi)特異性(xing)同源(yuan)盒基因抗(kang)體壹抗(kang)宿(xiu)主(zhu)物(wu)種(zhong)的(de)選(xuan)擇壹般(ban)說(shuo)來(lai),在(zai)使(shi)用偶聯(lian)二抗結(jie)合(he)無偶(ou)聯物(wu)的(de)壹抗(kang)時(shi),壹抗(kang)宿(xiu)主(zhu)動物(wu)的(de)物(wu)種(zhong)選(xuan)擇較為(wei)重(zhong)要(yao),對(dui)於免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)而言(yan),盡(jin)可能選(xuan)擇與(yu)樣本(ben)不同種(zhong)系物(wu)種(zhong)的(de)壹抗(kang),從(cong)而避(bi)免(mian)二抗(kang)與(yu)樣本(ben)內源(yuan)性(xing)免(mian)疫球蛋(dan)白(bai)產(chan)生(sheng)交叉(cha)反應(ying),例如:檢(jian)測(ce)小鼠(shu)樣(yang)本(ben)蛋白(bai),則(ze)不(bu)應(ying)選(xuan)擇小鼠(shu)或(huo)大鼠源(yuan)的(de)壹抗(kang),選(xuan)兔源(yuan)的(de)壹抗(kang),則(ze)二抗(kang)則可(ke)選(xuan)擇偶聯(lian)了(le)檢(jian)測(ce)分子(酶、熒光素、等)的(de)抗(kang)兔IgG。
如果選(xuan)擇有偶聯(lian)物(wu)的(de)壹抗(kang)則(ze)不適用上述情況,除免疫(yi)組(zu)化(hua)外的(de)其(qi)它對(dui)不(bu)含內源(yuan)性(xing)免(mian)疫球蛋(dan)白(bai)樣本(ben)的(de)檢(jian)測(ce)方法(fa),則(ze)抗體宿(xiu)主(zhu)物(wu)種(zhong)的(de)影(ying)響(xiang)不大,如對(dui)不(bu)含IgG 的(de)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)物(wu)樣(yang)本(ben)的(de)western blotting檢(jian)測(ce),盡管(guan)如此,含(han)有血清(qing)的(de)組(zu)織(zhi)裂(lie)解(jie)物(wu)和組織(zhi)培養上清中(zhong)含有免疫(yi)球蛋(dan)白(bai),還(hai)原(yuan)變性(xing)樣(yang)本中含(han)IgG,在western blot 檢(jian)測(ce)中則(ze)結(jie)合(he)出(chu)現IgG 分子50 and 25 kDa 的(de)重(zhong)鏈和輕(qing)鏈條帶。
二(er)抗的(de)選(xuan)擇 二抗(kang)應選(xuan)用與(yu)使(shi)用的(de)壹抗(kang)相(xiang)同的(de)物(wu)種(zhong)來(lai)源(yuan),例如:如果妳(ni)的(de)壹抗(kang)是小鼠的(de)單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體,二(er)抗則(ze)選(xuan)抗(kang)小(xiao)鼠(shu)的(de)二(er)抗(kang)anti-mouse secondary。建(jian)議(yi)檢(jian)查(zha)二(er)抗(kang)說(shuo)明書確保(bao)該(gai)抗(kang)體適用於妳(ni)的(de)檢(jian)測(ce)應用, 二抗(kang)壹般(ban)連(lian)接熒光(guang)素FITC 或(huo)發光團(tuan)。
上海谷(gu)研生(sheng)物(wu)科(ke)技有限(xian)公(gong)司(si)特殊(shu)抗體的(de)保(bao)存(cun)條件:
. 酶聯抗體:永(yong)遠保(bao)存(cun)在(zai)4 度,避(bi)免(mian)凍(dong)起(qi)來。否則會(hui)導(dao)致酶活性(xing)的(de)下(xia)降(jiang)或(huo)者喪失(shi)
2. 偶(ou)聯(lian)抗(kang)體:所(suo)有偶聯(lian)抗(kang)體都(dou)是在棕色(se)管(guan)中或(huo)使(shi)用錫(xi)箔紙(zhi)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。尤其(qi)是熒光抗(kang)體,對(dui)
光(guang)極(ji)為(wei)敏(min)感,因此(ci)在(zai)所(suo)有的(de)實(shi)驗(yan)階(jie)段也是要(yao)避(bi)光(guang)操(cao)作的(de)!
3. IgG3 的(de)同型對(dui)照:永(yong)遠(yuan)保(bao)存(cun)在(zai)4 度,避(bi)免(mian)凍(dong)起(qi)來。因為(wei)如果出(chu)現凍(dong)融(rong)過程(cheng),該(gai)抗(kang)體非(fei)常
容(rong)易(yi)形(xing)成多(duo)聚體無論(lun)是保(bao)存(cun)還(hai)是運輸,避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)!
反復(fu)凍(dong)融(rong)會(hui)導(dao)致抗體變性(xing),導(dao)致多聚體形(xing)成,從(cong)而降(jiang)低(di)抗(kang)體的(de)結(jie)合(he)能(neng)力!
其(qi)它相(xiang)關(guan)信(xin)息:
DNase II, from Pocine Pancreas 脫(tuo)氧(yang)核糖(tang)核酸酶II
DNase II, from Pocine Pancreas 脫氧(yang)核糖(tang)核酸酶II
DNase II, from Pocine Pancreas 脫氧(yang)核糖(tang)核酸酶II
Docetaxel 多西; 多(duo)烯
-Dodecanol 正(zheng)十二(er)醇(chun)
Dodecenylsuccinic anhydrous ( DDSA) 十二(er)烯(xi)基丁二(er)酸酐
Dodecyldimethylbenzylammonium chloride 十二(er)烷(wan)基二甲基芐(bian)基氯(lv)化(hua)銨
Eriochrome blue black R 媒(mei)介黑 7
D-(?)-Erythrose 赤蘚糖(tang)
DNase & RNase-Be-Gone B 去核酸酶試劑
dNTP mixture (0mM) 0mM 溶液(ye)
Domiphen bromide
DTAB 十二(er)烷(wan)基-*基-
DTAB 十二(er)烷(wan)基-*基-
dNTP mixture (0mM) 0mM 溶液(ye)
dNTP mixture (25mM) 25mM 溶液(ye)
dNTP mixture (25mM) 25mM 溶液(ye)
dNTP Set Solution (00mM each) 溶液(ye)
dNTP Set Solution (00mM each) 溶液(ye)
dNTP/dUTP mixture, 2-4mM 溶液(ye)
關(guan)於加入甘油(you)保(bao)存(cun):有些(xie)人會(hui)加50%的(de)甘(gan)油(you)到(dao)抗體中(zhong)來避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong),甘油(you)在(zai)-20 度 會(hui)降(jiang)低(di)冰點(dian)。這(zhe)對(dui)很(hen)多抗體可(ke)能是可行(xing)的(de)。但(dan)是abcam 僅對(dui)非(fei)常小的(de)壹部(bu)分抗體檢(jian)測(ce)過其(qi)在這(zhe)種(zhong)條件下(xia)的(de)穩(wen)定性(xing);而(er)abcam 只(zhi)對(dui)按照條件保(bao)存(cun)的(de)抗(kang)體提供(gong)質(zhi)量(liang)保(bao)證!加入甘油(you)的(de)溶(rong)液(ye)不建(jian)議(yi)在-80 度保(bao)存(cun),因(yin)為(wei)這(zhe)已(yi)經超過了(le)甘(gan)油(you)的(de)冰點(dian)。如果您(nin)要(yao)加入甘油(you)來(lai)保(bao)存(cun)抗(kang)體的(de)話(hua),請(qing)謹慎(shen)註(zhu)意無菌(jun)操(cao)作,避(bi)免(mian)汙(wu)染(ran)!
關(guan)於蛋(dan)白(bai)保(bao)護(hu)劑:
蛋白在高濃(nong)度時更(geng)不(bu)容易(yi)降(jiang)解(jie)( mg/ml 或(huo)者更(geng)高),這(zhe)就是為(wei)什(shen)麽(me)在(zai)抗體中(zhong)加入BSA 之類作為(wei)穩(wen)定劑的(de)原(yuan)因(yin)了(le);另壹方(fang)面(mian),加入的(de)蛋(dan)白(bai)也可以(yi)減少(shao)抗(kang)體由(you)於管(guan)壁吸附(fu)所(suo)造成的(de)損失(shi)。但(dan)是如果抗(kang)體要(yao)用來標(biao)記的(de)話(hua),則(ze)不(bu)能(neng)加入蛋白穩(wen)定劑,因為(wei)這(zhe)些(xie)穩定劑會(hui)和抗體壹起(qi)競(jing)爭(zheng)結(jie)合(he)標(biao)記物(wu)。
企(qi)業(ye)信(xin)息
ENTERPRISE INFORMATION上海谷(gu)研實(shi)業(ye)有限(xian)公(gong)司(si)
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