【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】小鼠前(qian)列腺成纖(xian)維(wei)細胞公(gong)司正在出(chu)售的產品(pin)：MDCK-I犬(quan)腎(shen)細胞BIU-87 (STR)人(ren)膀胱癌(ai)細胞5637/LUC (STR)人(ren)膀胱癌(ai)細胞HBMEC-2人(ren)膀胱癌(ai)細胞BT-B（hela）人(ren)膀胱癌(ai)細胞ECV-304+RFP人(ren)膀胱癌(ai)細胞EJ人(ren)膀胱癌(ai)細胞U3人(ren)膀胱癌(ai)細胞SV-HUC-1/GFP (STR)人(ren)膀胱上(shang)皮(pi)永生化(hua)細胞T24/LUC (STR)人(ren)膀胱移行(xing)細胞

本(ben)公(gong)司所(suo)有(you)產品(pin)僅(jin)供科學實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他科學實驗(yan)外的使用！

小鼠前(qian)列腺成纖(xian)維(wei)分離(li)自(zi)前(qian)列腺組(zu)織(zhi)；前(qian)列腺（Prostate）是(shi)雄性(xing)的性腺器官；前(qian)列腺是(shi)不(bu)成對的實質(zhi)性(xing)器宮，由(you)腺組(zu)織(zhi)和肌組(zu)織(zhi)構(gou)成。前(qian)列腺如(ru)栗(li)子(zi)，底朝上，與膀胱相(xiang)貼，尖朝下，抵泌尿生(sheng)殖膈，前(qian)面(mian)貼恥(chi)骨聯合，後面(mian)依直(zhi)腸(chang)。前(qian)列腺腺體的中間(jian)有(you)尿道(dao)穿過，扼(e)守著(zhe)尿道(dao)上(shang)口(kou)，所(suo)以(yi)，前(qian)列腺有(you)問題(ti)時，排(pai)尿首(shou)先受(shou)影響。前(qian)列腺是(shi)機(ji)體非(fei)常(chang)少(shao)有(you)的，具有(you)內、外雙重(zhong)分(fen)泌功能(neng)的性分(fen)泌腺。作為(wei)外分泌腺，前(qian)列腺每(mei)天(tian)分泌前(qian)列腺液(ye)，是(shi)構成精(jing)液(ye)主要成分(fen)；作為(wei)內(nei)分(fen)泌腺，前(qian)列腺分(fen)泌的激(ji)素稱為(wei)“前(qian)列腺素"。成纖(xian)維(wei)細胞（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松(song)結締(di)組(zu)織(zhi)的主要(yao)細胞成分(fen)，由(you)胚(pei)胎時期的間(jian)充質細胞分(fen)化而來(lai)。成纖(xian)維(wei)細胞較(jiao)大(da)，輪廓(kuo)清(qing)楚(chu)，多為(wei)突(tu)起(qi)的紡(fang)錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁(bian)平狀結(jie)構(gou)，其(qi)細胞核(he)呈(cheng)規(gui)則(ze)的卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核仁(ren)大(da)而明(ming)顯(xian)。成纖(xian)維(wei)細胞功(gong)能活(huo)動(dong)旺盛(sheng)，細胞質(zhi)嗜弱(ruo)堿性，具明(ming)顯(xian)的蛋白(bai)質(zhi)合成和分泌活(huo)動(dong)，在壹(yi)定條(tiao)件(jian)下，它可(ke)以(yi)實現(xian)跟(gen)纖(xian)維(wei)細胞的互相轉(zhuan)化(hua)；成纖(xian)維(wei)細胞對不同程度的細胞變(bian)性(xing)、壞死和組(zu)織(zhi)缺(que)損的修(xiu)復有(you)著十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作用。剛(gang)分(fen)離(li)的前(qian)列腺成纖(xian)維(wei)細胞呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折光(guang)性良(liang)好，懸(xuan)浮於(yu)培養(yang)基中。30min細胞貼壁，其(qi)中部分開(kai)始(shi)伸出(chu)偽足(zu)，表現(xian)為(wei)小的突起(qi)；6h後細胞基本(ben)貼壁wan全(quan)，伸展(zhan)成梭(suo)形(xing)，胞核(he)清(qing)晰(xi)，分布較均勻(yun)，散在生(sheng)長(chang)，不聚集成團(tuan)；細胞生(sheng)長迅速(su)，5-7天即(ji)呈(cheng)融(rong)合狀態，細胞排(pai)列緊密(mi)，有(you)的交叉(cha)重(zhong)疊生(sheng)長，平坦、胞(bao)體較(jiao)大(da)，細胞質(zhi)透(tou)明，細胞核(he)較大(da)，呈(cheng)橢圓(yuan)形(xing)，顏色(se)淡。細胞融(rong)合，並彼此(ci)連接成網狀；細胞呈(cheng)突(tu)起(qi)的紡(fang)錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁(bian)平分布。
方(fang)法簡介：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分離(li)的小鼠前(qian)列腺成纖(xian)維(wei)采用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶混合消(xiao)化(hua)法結合差速貼壁法制備而來(lai)，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分離(li)的小鼠前(qian)列腺成纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特性 貼壁

細胞形(xing)態 成纖(xian)維(wei)細胞樣

傳(chuan)代特性 可(ke)傳(chuan)3代左(zuo)右

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液(ye)管、離(li)心管(guan)、手術(shu)器械等(deng)，並進行高壓滅菌或其(qi)他合適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制或購買(mai)合適(shi)的培養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動(dong)物並進行相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或處(chu)死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已有(you)的組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅速(su)取出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對組(zu)織(zhi)的損傷(shang)，並去除多余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的無(wu)菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去除血(xue)液和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床或培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞懸(xuan)液或小細胞團(tuan)時，加入含(han)血(xue)清的培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用細胞篩(shai)過濾細胞懸(xuan)液，去除未消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的轉速(su)離(li)心，收(shou)集細胞沈(chen)澱。

細胞觀察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度等，記錄(lu)細胞的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及(ji)時采取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與(yu)活(huo)力檢測(ce)：在需(xu)要時，可(ke)采用臺盼(pan)藍染(ran)色(se)等方法對細胞進行計數(shu)和活(huo)力檢測(ce)，以了解(jie)細胞的生長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖洗組(zu)織(zhi)，去除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免過度消(xiao)化(hua)導致細胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或特定生(sheng)長(chang)因子(zi)的培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻繁更(geng)換培養(yang)基品(pin)牌(pai)或批次(ci)，減少細胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞貼壁能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋白(bai)、多聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯合會導致接觸抑制和分化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影響細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細胞形(xing)態、密(mi)度及培養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換培養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存早(zao)期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使用 DMSO+血(xue)清（或專用凍(dong)存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。