【概(gai)要(yao)描述】小鼠前列腺平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：A-72犬腫瘤成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)CCC-HPF-1 (STR)人(ren)胚(pei)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)HL人(ren)胚(pei)肺(fei)二倍(bei)體(ti)細(xi)胞(bao)WI-38 VA13亞(ya)系2RA人胚(pei)肺(fei)細(xi)胞(bao)WI-38VA-13subline2RA人(ren)胚(pei)肺(fei)細(xi)胞(bao)CCC-HEL-1 (STR)人(ren)胚(pei)肝二倍(bei)體(ti)細(xi)胞(bao)CCC-ESF-1 (STR)人(ren)胚(pei)皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)HES人(ren)胚(pei)皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)AD293 (STR)人(ren)胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao)HEK-293A (STR)人(ren)

本(ben)公(gong)司所有產(chan)品僅供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使用(yong)！

小(xiao)鼠前(qian)列腺平(ping)滑(hua)肌分離(li)自(zi)前(qian)列腺組織(zhi)；前列腺（Prostate）是雄(xiong)性的(de)性腺器官；前(qian)列腺是不成對的(de)實質(zhi)性器宮，由(you)腺組織(zhi)和肌(ji)組織(zhi)構(gou)成。前(qian)列腺如(ru)栗(li)子，底朝(chao)上，與(yu)膀(pang)胱(guang)相(xiang)貼，尖(jian)朝下，抵(di)泌尿生(sheng)殖(zhi)膈(ge)，前(qian)面(mian)貼恥骨聯合，後面(mian)依直腸(chang)。前(qian)列腺腺體(ti)的(de)中(zhong)間(jian)有(you)尿道穿過(guo)，扼守著尿道上口，所以，前列腺有(you)問(wen)題時(shi)，排尿首先(xian)受(shou)影(ying)響(xiang)。前列腺是機體(ti)非(fei)常少(shao)有的(de)，具有(you)內、外(wai)雙(shuang)重分泌功(gong)能(neng)的(de)性分泌腺。作(zuo)為(wei)外(wai)分泌腺，前(qian)列腺每(mei)天分泌前列腺液(ye)，是構(gou)成精液(ye)主(zhu)要(yao)成分；作為(wei)內分泌腺，前(qian)列腺分泌的(de)激(ji)素(su)稱為(wei)“前(qian)列腺素(su)"。前列腺平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)是前列腺的(de)重要(yao)結構(gou)組成細(xi)胞(bao)之(zhi)壹，在機體(ti)的(de)正(zheng)常(chang)生(sheng)理過(guo)程(cheng)中(zhong)發揮著重要(yao)作用。前列腺平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)原代分離(li)培(pei)養(yang)3天後，可(ke)見細(xi)胞(bao)貼壁伸展(zhan)，細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)大(da)小(xiao)不壹，呈梭形(xing)、不規(gui)則(ze)形(xing)、三角(jiao)形(xing)或扇形(xing)，核卵(luan)圓形(xing)、居(ju)中(zhong)；2周(zhou)後細(xi)胞(bao)匯(hui)合，多數細(xi)胞(bao)伸展(zhan)呈(cheng)長(chang)梭形(xing)，胞(bao)漿(jiang)豐富(fu)，有(you)分枝狀(zhuang)突(tu)起，細(xi)胞(bao)平(ping)行(xing)排列成單(dan)層(ceng)或部分區(qu)域多層(ceng)重疊生(sheng)長(chang)，高低起伏；細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)低時(shi)，常(chang)交織(zhi)成網(wang)狀(zhuang)；密(mi)度(du)高時(shi)，則(ze)排列為(wei)旋渦(wo)狀(zhuang)或柵欄狀(zhuang)。傳(chuan)代後細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)較快(kuai)，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯合(he)，並(bing)保持(chi)上述(shu)形(xing)態(tai)學(xue)特(te)征(zheng)和生(sheng)長(chang)特(te)點。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)小鼠(shu)前(qian)列腺平(ping)滑(hua)肌采用(yong)yi蛋白(bai)酶-膠原酶聯合消(xiao)化法結合差(cha)速(su)貼壁法(fa)制(zhi)備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)小鼠(shu)前(qian)列腺平(ping)滑(hua)肌經α-SMA免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定，純度(du)可(ke)達90%以上，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵母和真菌等。

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每(mei)2-3天(tian)換液壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳3代左右(you)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器材(cai)準備：準備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術器械等，並(bing)進行(xing)高壓滅(mie)菌或其他(ta)合適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準備：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙(shuang)抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動物或組織(zhi)來源準(zhun)備：根據(ju)實驗需求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的(de)動物並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處死(si)，獲取(qu)所需組織(zhi)；或從已(yi)有的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件下，迅速取(qu)出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織(zhi)的(de)損傷，並(bing)去(qu)除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結締組織(zhi)等非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清洗：將取(qu)出(chu)的(de)組織(zhi)用預(yu)冷的(de)無菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去(qu)除血液和雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量消(xiao)化酶的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分被消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然後將濾液以適當的(de)轉速(su)離(li)心(xin)，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法對細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活力(li)檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情況和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後需立(li)即(ji)處(chu)理，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於室溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水(shui)沖洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類(lei)型選擇消(xiao)化酶，避免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導致細(xi)胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件(jian)優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選擇

- 使(shi)用含(han)血清或特(te)定生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需添加胰島素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品牌或批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋白(bai)、多聚賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度(du)建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會導致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和(he)分化。

三、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操(cao)作，使(shi)用壹次性耗(hao)材(cai)，避免(mian)交叉汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基(ji)顏色(se)，及時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染或營養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有(you)限(xian)（壹般 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存早期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或專用(yong)凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮保存。