【概(gai)要描述】小(xiao)鼠骨髓(sui)單核(he)細(xi)胞(bao)公司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品(pin)：KU-19-19膀胱癌LNN (STR)人喉癌(ai)淋(lin)巴(ba)結(jie)轉移細胞(bao)LLN人喉癌(ai)淋(lin)巴(ba)結(jie)轉移細胞(bao)TU 686 (STR)人喉癌(ai)細胞(bao)LCC (STR)人喉癌(ai)細胞(bao)TU-138交(jiao)叉人喉癌(ai)細胞(bao)HEp-2人喉表(biao)皮樣(yang)癌(ai)細(xi)胞(bao)SNU-899人喉鱗(lin)狀細(xi)胞umscc5人喉鱗(lin)狀細(xi)胞SW 982 (STR)人滑膜肉(rou)瘤細(xi)胞(bao)

小鼠骨髓(sui)單核(he)分(fen)離自(zi)骨髓(sui)；骨髓(sui)是機體的(de)造(zao)血(xue)組織，位(wei)於身(shen)體的(de)許(xu)多骨骼(ge)內(nei)。成(cheng)年(nian)動(dong)物(wu)的(de)骨髓(sui)分兩(liang)種：紅(hong)骨髓(sui)和(he)黃骨髓(sui)。紅(hong)骨髓(sui)能制造(zao)紅(hong)細(xi)胞(bao)、血小(xiao)板和(he)各種(zhong)白細胞。血小板有止(zhi)血(xue)作用(yong)，白細胞能殺(sha)滅與(yu)抑(yi)制各(ge)種(zhong)病原(yuan)體，包括(kuo)細菌、病毒(du)等；某(mou)些淋(lin)巴(ba)細胞能制造(zao)抗(kang)體。因此，骨髓(sui)不但是(shi)造血(xue)器官，它還是(shi)重(zhong)要的(de)免(mian)疫(yi)器官。骨髓(sui)是存(cun)在(zai)於長(chang)骨（如肱(gong)骨、股骨）的(de)骨髓(sui)腔(qiang)和(he)扁平(ping)骨（如髂(qia)骨）的(de)稀(xi)松(song)骨質(zhi)間的(de)網(wang)眼(yan)中(zhong)，是壹種海綿(mian)狀的(de)組織，能產生血細胞的(de)骨髓(sui)略呈(cheng)紅(hong)色，稱為紅(hong)骨髓(sui)。出生時，紅(hong)骨髓(sui)充滿全身(shen)骨髓(sui)腔(qiang)，隨(sui)著(zhe)年(nian)齡(ling)增大(da)，脂(zhi)肪(fang)細胞增多(duo)，相(xiang)當部分紅(hong)骨髓(sui)被黃骨髓(sui)取代，最後幾乎只(zhi)有(you)扁平(ping)骨骨髓(sui)腔(qiang)中(zhong)有(you)紅(hong)骨髓(sui)。骨髓(sui)單核(he)細(xi)胞(bao)是(shi)壹種未(wei)成(cheng)熟(shu)的(de)單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)，在(zai)骨髓(sui)細胞(bao)中約占0.04%，被認為是破(po)骨細胞的(de)前(qian)體細胞，較外(wai)周血(xue)單(dan)個核(he)細(xi)胞(bao)誘導(dao)的(de)破(po)骨細胞得率高(gao)、全骨髓(sui)誘導(dao)法產生的(de)破(po)骨細胞數(shu)量(liang)多，純度高(gao)，較脾(pi)細(xi)胞誘導(dao)法分化(hua)效(xiao)率高(gao)。骨髓(sui)單核(he)細(xi)胞(bao)（BMMNCs）是(shi)從(cong)股(gu)骨或(huo)脛骨骨髓(sui)中分(fen)離提取出來的(de)原(yuan)代(dai)細胞(bao)，它屬幹細(xi)胞類(lei)型。目(mu)前，大(da)多數(shu)研(yan)究(jiu)用淋(lin)巴(ba)分離液分(fen)離提取骨髓(sui)單核(he)細(xi)胞(bao)，最近也(ye)有采用免(mian)疫(yi)磁珠分離法分離骨髓(sui)單核(he)細(xi)胞(bao)。
方法簡介：

公司(si)實(shi)驗室分離的(de)小(xiao)鼠骨髓(sui)單核(he)采用密度梯(ti)度離心法結(jie)合差速貼(tie)壁法制備(bei)而(er)來，細胞總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公司(si)實(shi)驗室分離的(de)小(xiao)鼠骨髓(sui)單核(he)經(jing)CD68免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可達90%以上，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等。

本公司(si)所(suo)有(you)產品(pin)僅供(gong)科學實(shi)驗，不(bu)做其他科學實(shi)驗外(wai)的(de)使用！

培養基 含FBS、生長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率 每2-3天換液壹次

生長特性 貼壁

細胞形(xing)態(tai) 巨噬細胞(bao)樣(yang)

傳代特性 不增殖；不傳(chuan)代

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白酶

培養條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的(de)培養皿、培養瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌或(huo)其他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適的(de)培養基、消(xiao)化(hua)酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在(zai)有效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來源準(zhun)備(bei)：根據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死(si)，獲取所(suo)需(xu)組織；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取組織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速取出目(mu)標(biao)組織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的(de)組織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以去除(chu)血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便(bian)後續消(xiao)化(hua)。

細胞分離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎的(de)組織塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培養箱中消(xiao)化(hua)壹段時間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當(dang)組織塊大(da)部分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或(huo)小細胞(bao)團時，加入(ru)含(han)血清(qing)的(de)培養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細胞懸液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織碎(sui)片(pian)，然後將濾液以適當的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集(ji)細胞沈澱。

細胞觀察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀察：每天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞的(de)形(xing)態(tai)、生長狀態(tai)、密度等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時采取相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需要時，可采用臺(tai)盼藍(lan)染色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力檢測(ce)，以了解細(xi)胞的(de)生長情(qing)況和(he)健康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材(cai)與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作

- 組織取材(cai)後需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養(yang)環境(jing)。

- 使用無菌 PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二、培養條件(jian)優化(hua)

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清(qing)或(huo)特定生長因子的(de)培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換培養基品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細胞適應壓力。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能力較弱(ruo)，可能需要包被培養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代時密度建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙染控制

1. 無菌操(cao)作

- 全程在(zai)超凈臺(tai)操(cao)作，使用壹次性耗材(cai)，避免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養基中(zhong)可添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期使用可能影(ying)響細(xi)胞活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)

- 定期檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染（如 PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時丟棄細胞(bao)。

四、狀態(tai)監控

1. 日常(chang)觀察

- 每天檢查細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及(ji)培養基顏(yan)色，及時更換(huan)培養基（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可能提示(shi)汙染或(huo)營養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次(ci)數(shu)有(you)限（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍存(cun)早期代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議使用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培養基），梯(ti)度降(jiang)溫後液氮(dan)保(bao)存(cun)。