【概要描(miao)述】小鼠(shu)嗅(xiu)鞘(qiao)細胞公(gong)司正(zheng)在(zai)出售的(de)產(chan)品：OVSAHO卵(luan)巢癌EBV-Human2轉化人淋巴細胞KM9304轉化人淋巴細胞C2C12-GFP標記(ji)小鼠(shu)成(cheng)肌(ji)細胞HEB人(ren)腦膠(jiao)質細胞MLA144長(chang)臂(bi)猿淋(lin)巴瘤細胞PUMC-HUVEC-T1 (STR)轉化人臍(qi)靜(jing)脈內皮細胞COS-1轉化的非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴腎(shen)細胞WI38/VA13 (STR)轉化肺成(cheng)纖維細胞SVPVero細胞

小鼠(shu)嗅(xiu)鞘(qiao)分(fen)離自(zi)嗅(xiu)球(qiu)組織(zhi)；嗅(xiu)鞘(qiao)細胞（OECs）是(shi)在功(gong)能(neng)上(shang)介於施(shi)旺(wang)細胞和(he)少突(tu)膠(jiao)質細胞之(zhi)間的壹(yi)種(zhong)特殊的(de)膠(jiao)質細胞，具(ju)有神(shen)經營養、抑制膠(jiao)質增生(sheng)、瘢痕形成(cheng)、成(cheng)鞘(qiao)作(zuo)用(yong)等；為軸(zhou)突(tu)生(sheng)長(chang)提供了(le)適宜(yi)的微(wei)環(huan)境(jing)及(ji)較強的遷移(yi)的特性，使(shi)其成(cheng)為促進中樞神經(jing)再(zai)生(sheng)的(de)理想(xiang)候(hou)選(xuan)細胞之(zhi)壹(yi)。嗅(xiu)鞘(qiao)細胞是(shi)目前所發(fa)現的(de)極(ji)少(shao)數的中(zhong)樞神經系統可以再(zai)生(sheng)細胞之(zhi)壹(yi)，其特點為(wei)終(zhong)身(shen)具(ju)有神經再(zai)生(sheng)功(gong)能(neng)，還能(neng)夠(gou)釋放多(duo)種(zhong)神經營養因子、神經粘(zhan)附分(fen)子。被(bei)認(ren)為是髓鞘(qiao)化能(neng)力(li)強(qiang)的(de)膠(jiao)質細胞，逐(zhu)漸用(yong)於治(zhi)療(liao)脊髓損傷。嗅(xiu)鞘(qiao)細胞與(yu)膠(jiao)質細胞、雪旺細胞在(zai)表(biao)現型(xing)上(shang)有共同(tong)點，它(ta)們都能(neng)促進(jin)軸(zhou)突(tu)的(de)再(zai)生(sheng)，主(zhu)要區別在於嗅(xiu)鞘(qiao)細胞不(bu)但存(cun)在於(yu)中(zhong)樞(shu)神經系統，也存(cun)在(zai)於外周(zhou)神(shen)經中。嗅(xiu)鞘(qiao)細胞被(bei)認(ren)為是壹(yi)種(zhong)可塑性很高(gao)的(de)細胞，它(ta)可表(biao)現出多種(zhong)細胞形態和細胞表(biao)面標誌(zhi)，在(zai)嗅(xiu)系統發(fa)育(yu)過(guo)程(cheng)中(zhong)，嗅(xiu)鞘(qiao)細胞根(gen)據其在(zai)組織(zhi)定位(wei)的(de)不(bu)同(tong)而有不同(tong)的抗原表(biao)型，其(qi)中P75NTR、GFAP、和(he)O4可標記(ji)大(da)部(bu)分(fen)在體嗅(xiu)鞘(qiao)細胞，然(ran)而在(zai)嗅(xiu)球(qiu)外神(shen)經(jing)層(ceng)O4陽(yang)性(xing)嗅(xiu)鞘(qiao)細胞仍(reng)然(ran)可以在P75NTR陽性細胞層(ceng)內分(fen)化成(cheng)E-NCAM陽性的細胞層(ceng)，還有(you)壹(yi)定比(bi)率(lv)的(de)嗅(xiu)鞘(qiao)細胞P75NTR陰(yin)性而(er)NY和S100表(biao)型為(wei)陽性(xing)。嗅(xiu)黏(nian)膜中(zhong)的(de)神經元(yuan)是生後才(cai)生(sheng)長(chang)並在(zai)成(cheng)年(nian)時繼續(xu)分(fen)化的神經元(yuan)，壽(shou)命(ming)為(wei)4-12周(zhou)，隨(sui)著新(xin)細胞的(de)生長(chang)，又建(jian)立(li)了(le)新(xin)的神(shen)經支(zhi)配(pei)關系。嗅(xiu)鞘(qiao)細胞存(cun)在於(yu)嗅(xiu)神(shen)經及(ji)嗅(xiu)球(qiu)的神(shen)經(jing)層(ceng)上(shang)，沿嗅(xiu)神(shen)經的(de)全(quan)長(chang)，從(cong)周(zhou)圍神(shen)經(jing)系統到中樞(shu)神經(jing)分(fen)布。
方(fang)法簡介：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離的(de)小鼠(shu)嗅(xiu)鞘(qiao)采用yi蛋(dan)白(bai)酶-膠(jiao)原酶聯合消(xiao)化法、結合(he)差速(su)貼(tie)壁法(fa)制備而來，細胞總量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離的(de)小鼠(shu)嗅(xiu)鞘(qiao)經(jing)GFAP免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵母(mu)和真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公司所(suo)有(you)產品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不(bu)做其他科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的使(shi)用！

包被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長特性 貼(tie)壁

細胞形態 神(shen)經元細胞樣(yang)

傳代特性 屬(shu)於終(zhong)末(mo)分(fen)化細胞；屬(shu)於不(bu)增殖(zhi)細胞群

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器材準備：準備無菌(jun)的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術(shu)器械等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合適的消毒處理。

2. 試(shi)劑準備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適的培(pei)養基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試(shi)劑，確(que)保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適的動物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從(cong)已有的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲(huo)取組織(zhi)。

取材(cai)與(yu)處理

1. 取材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組織(zhi)的(de)損傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締組織(zhi)等(deng)非(fei)目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以便後續(xu)消(xiao)化。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適量(liang)消化酶的離心管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消化壹(yi)段時間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管(guan)，使(shi)消化更均勻。

2. 終(zhong)止消化：當組織(zhi)塊(kuai)大部分(fen)被(bei)消(xiao)化成(cheng)單細胞懸液(ye)或(huo)小細胞團時，加入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基終(zhong)止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心：用細胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消化的組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾液以適當的轉速(su)離(li)心，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)。

細胞觀察與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天用倒(dao)置顯(xian)微鏡觀察細胞的(de)形態、生長(chang)狀態、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的(de)變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發(fa)現細胞汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時采取相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計(ji)數與(yu)活力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時，可采用臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方法對(dui)細胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測，以了(le)解(jie)細胞的(de)生長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織(zhi)取材(cai)後(hou)需立(li)即處理，避(bi)免(mian)長時間暴露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致細胞損傷。

- 消(xiao)化時間需嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞解(jie)離(li)狀態。

二、培(pei)養條(tiao)件優(you)化

1. 培(pei)養基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定生(sheng)長因子的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁更(geng)換(huan)培(pei)養基品(pin)牌或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少細胞適應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代

- 原(yuan)代細胞貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱，可能(neng)需要包被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳代時密度建(jian)議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導(dao)致接觸抑制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可(ke)能(neng)影響(xiang)細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法），汙染後(hou)需及(ji)時丟棄細胞。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀察

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細胞形態、密度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及(ji)時更換培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙染或(huo)營養不足。

2. 傳代與凍存

- 原(yuan)代細胞分(fen)裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需及(ji)時凍存早(zao)期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍存液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍存培(pei)養基），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存。