【概要(yao)描述(shu)】小(xiao)鼠胰腺導(dao)管(guan)上皮(pi)細胞(bao)公(gong)司正(zheng)在出售的產品(pin)：CW-2結(jie)腸癌DMS79細胞(bao)DoTc2-4510細胞(bao)DV-90細胞(bao)EB1細胞(bao)EB2細胞(bao)EBC-1細胞(bao)ECC10細胞(bao)ECC12細胞(bao)EC-GI-10細胞(bao)

小(xiao)鼠胰腺導(dao)管(guan)上皮(pi)分(fen)離(li)自(zi)胰腺組(zu)織；胰(yi)腺分為(wei)外分泌(mi)腺和內(nei)分泌腺兩部(bu)分。外分(fen)泌(mi)腺由(you)腺泡和(he)腺管(guan)組(zu)成，腺泡分(fen)泌胰液(ye)，腺管(guan)是(shi)胰(yi)液(ye)排出的通道(dao)。胰液中含(han)有碳(tan)suan氫(qing)鈉、yi蛋白酶(mei)原、脂(zhi)肪(fang)酶、澱(dian)粉(fen)mei等。胰(yi)液通過(guo)胰腺管(guan)排(pai)入(ru)十(shi)二指(zhi)腸，有消化蛋白質(zhi)、脂肪(fang)和糖(tang)的作用(yong)。內(nei)分(fen)泌(mi)腺由(you)大小(xiao)不同的細胞(bao)團(tuan)──胰島所組(zu)成，胰(yi)島(dao)主(zhu)要(yao)由(you)4種(zhong)細胞(bao)組(zu)成：α細胞(bao)、β細胞(bao)、γ細胞(bao)及(ji)PP細胞(bao)。α細胞(bao)分(fen)泌(mi)胰(yi)高(gao)血(xue)糖素(su)，升高(gao)血(xue)糖；β細胞(bao)分(fen)泌(mi)胰(yi)島(dao)素，降低(di)血(xue)糖；γ細胞(bao)分(fen)泌(mi)生(sheng)長(chang)抑(yi)su，以(yi)旁分(fen)泌(mi)的方式(shi)抑(yi)制(zhi)α、β細胞(bao)的分泌(mi)；PP細胞(bao)分(fen)泌(mi)胰(yi)多(duo)肽(tai)，抑(yi)制(zhi)胃腸運動、胰液(ye)分(fen)泌和膽(dan)囊(nang)收縮。成體(ti)胰(yi)腺導(dao)管(guan)上皮(pi)細胞(bao)作為(wei)胰(yi)腺前體細胞(bao)，已(yi)證(zheng)實具多(duo)向(xiang)分化潛能，在合(he)適(shi)的外源(yuan)性刺激(ji)下(xia)可分化成胰(yi)島(dao)樣細胞(bao)，胰(yi)腺導(dao)管(guan)上皮(pi)細胞(bao)轉分化的胰島(dao)樣細胞(bao)免(mian)疫(yi)原性(xing)如何(he)，轉分化的胰島(dao)樣細胞(bao)在(zai)治(zhi)療糖(tang)尿病時(shi)是(shi)否發(fa)生(sheng)免(mian)疫(yi)排(pai)斥反應(ying)，對(dui)幹細胞(bao)臨(lin)床(chuang)治療糖(tang)尿病具有重(zhong)要(yao)意義。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的小(xiao)鼠胰腺導(dao)管(guan)上皮(pi)采(cai)用yi蛋白酶(mei)-膠原酶(mei)混(hun)合(he)消(xiao)化法結(jie)合(he)密度梯度離心(xin)法(fa)、差(cha)速貼壁法，並通過(guo)上皮(pi)細胞(bao)專用培(pei)養基培養(yang)篩(shai)選(xuan)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的小(xiao)鼠胰腺導(dao)管(guan)上皮(pi)經Cytokeratin-19免(mian)疫(yi)熒光鑒定(ding)，純度可達90%以上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌、酵母和(he)真菌等。

本公(gong)司所(suo)有產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

包被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠(shu)尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 上皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可傳1-2代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的培養(yang)皿、培養瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅菌或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的培養(yang)基、消化酶（如、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保(bao)其無菌且在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動物或(huo)組(zu)織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合(he)適(shi)的動物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣(yang)本庫中獲取組(zu)織。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下，迅速取出目(mu)標組(zu)織，盡量(liang)減少對組(zu)織的損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等非目(mu)的組(zu)織。

2. 清(qing)洗：將取出的組(zu)織用(yong)預冷的無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織剪成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離心(xin)管(guan)中，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱中消化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消化的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀察：每(mei)天用(yong)倒(dao)置顯微(wei)鏡觀察細胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等，記(ji)錄細胞(bao)的變(bian)化情(qing)況，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常，及時(shi)采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方(fang)法對細胞(bao)進(jin)行計數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速操作

- 組(zu)織取材(cai)後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非營養(yang)環境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖洗組(zu)織，去(qu)除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶，避免(mian)過(guo)度消化導(dao)致(zhi)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格控制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯微(wei)鏡觀察細胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優化

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養(yang)基品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁能力較(jiao)弱，可能需要(yao)包被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建議控制在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化。

三、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超凈臺(tai)操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可能影響細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日常(chang)觀察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及培養基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度降溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存。