【概(gai)要(yao)描述】小(xiao)鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞公司(si)正在(zai)出(chu)售的產品(pin)：CoCM-1結(jie)腸癌(ai)Duck embryo鴨胚胎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞F81貓(mao)腎細胞LMH雞(ji)肝癌細(xi)胞MDBK牛(niu)腎細胞MDCK狗腎轉化(hua)細(xi)胞OAR-L1綿羊肺成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞（原(yuan)代永生(sheng)化(hua)）pac2斑馬魚(yu)胚(pei)胎成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞人(ren)皮膚黑(hei)色(se)細胞株(zhu)HPF人肺成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)分離(li)自肺(fei)組織(zhi)；肺是(shi)機體的呼吸器(qi)官(guan)，位(wei)於胸腔(qiang)，左(zuo)右(you)各壹(yi)，覆蓋(gai)於(yu)心(xin)之上(shang)。肺有(you)分葉，左(zuo)二右(you)三(san)，共(gong)五(wu)葉。肺(fei)經肺(fei)系(xi)（指氣管(guan)、支(zhi)氣管(guan)等(deng)）與喉、鼻(bi)相連，故稱(cheng)喉為肺(fei)之門(men)戶，鼻(bi)為肺之外(wai)竅。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞（Fibroblast）是疏(shu)松結(jie)締組織(zhi)的主要(yao)細(xi)胞成(cheng)分，由(you)胚(pei)胎時(shi)期的間充(chong)質(zhi)細(xi)胞分化(hua)而(er)來(lai)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞較(jiao)大，輪(lun)廓(kuo)清楚，多為(wei)突起(qi)的紡(fang)錘形(xing)或星(xing)形的扁平狀(zhuang)結(jie)構，其(qi)細胞核(he)呈(cheng)規(gui)則(ze)的卵圓形，核(he)仁(ren)大而明顯。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞功(gong)能(neng)活動旺盛(sheng)，細(xi)胞質(zhi)嗜(shi)弱堿性，具明(ming)顯(xian)的蛋白(bai)質(zhi)合成(cheng)和(he)分泌(mi)活(huo)動，在壹(yi)定(ding)條(tiao)件下，它(ta)可以實(shi)現(xian)跟纖維細(xi)胞的互相(xiang)轉化(hua)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞對不同程(cheng)度的細胞變性(xing)、壞(huai)死和組織(zhi)缺(que)損(sun)的修復(fu)有(you)著十(shi)分重(zhong)要(yao)的作用(yong)。剛(gang)分離(li)的肺成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞呈(cheng)圓形、折(zhe)光(guang)性良好(hao)，懸浮(fu)於培養(yang)基(ji)中(zhong)。30min細(xi)胞貼(tie)壁，其(qi)中部(bu)分開始(shi)伸(shen)出(chu)偽足，表現(xian)為小(xiao)的突起(qi)；6h後細(xi)胞基(ji)本(ben)貼(tie)壁wan全(quan)，伸(shen)展(zhan)成(cheng)梭(suo)形，胞核(he)清(qing)晰，分布(bu)較(jiao)均(jun)勻，散在生長(chang)，不聚集(ji)成(cheng)團(tuan)；細(xi)胞生(sheng)長(chang)迅速，5-7天即呈(cheng)融合狀(zhuang)態(tai)，細(xi)胞排(pai)列緊(jin)密，有(you)的交叉重疊生長(chang)，平坦(tan)、胞體較大，細胞質(zhi)透明，細胞核(he)較(jiao)大，呈(cheng)橢圓形，顏(yan)色(se)淡。細胞融合，並彼此(ci)連(lian)接(jie)成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；細胞呈(cheng)突起(qi)的紡(fang)錘形(xing)或星(xing)形的扁平分布(bu)。肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞在(zai)生理(li)條(tiao)件下的主要(yao)功(gong)能(neng)包括：構造(zao)和維(wei)持肺器(qi)官(guan)的正常形態(tai)，合成(cheng)和(he)釋(shi)放(fang)細(xi)胞外(wai)基質(zhi)以及(ji)組織(zhi)損(sun)傷後及(ji)時(shi)大量(liang)聚集(ji)修復(fu)損(sun)傷組織(zhi)。
方法(fa)簡介(jie)：

公司(si)實驗室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)采(cai)用(yong)yi蛋白酶-膠原酶混合消化(hua)法(fa)結(jie)合差速貼(tie)壁法(fa)制備而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免疫熒光鑒定(ding)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等(deng)。

本(ben)公司(si)所有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗，不做其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗外(wai)的使用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細胞形(xing)態(tai) 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞樣(yang)

傳代特(te)性 可傳3-5代

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培養(yang)條(tiao)件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並進行高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備：配制或購(gou)買(mai)合適(shi)的培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確(que)保(bao)其(qi)無菌且在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗動物或組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動物並進行相應的麻醉(zui)或處(chu)死，獲取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件下，迅(xun)速取出(chu)目標組織(zhi)，盡量(liang)減少對組織(zhi)的損(sun)傷，並去(qu)除多(duo)余的脂(zhi)肪、結(jie)締組織(zhi)等(deng)非目的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出(chu)的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌PBS沖洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除(chu)血液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後續消化(hua)。

細胞分離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的組織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培養(yang)箱中消化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期間(jian)可(ke)輕輕搖晃離(li)心管(guan)，使消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分被(bei)消化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入含(han)血清的培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞篩(shai)過濾細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消化(hua)的組織(zhi)碎片，然(ran)後將(jiang)濾液(ye)以適(shi)當的轉速離(li)心，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱。

細胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞的變化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細胞汙染或異常，及時(shi)采(cai)取相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計(ji)數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在需要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺盼藍染色(se)等(deng)方法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數(shu)和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細胞的生長(chang)情(qing)況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速操作

- 組織(zhi)取材(cai)後需(xu)立即處(chu)理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露於室(shi)溫或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過度消化(hua)導(dao)致(zhi)細胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時(shi)間需(xu)嚴格(ge)控制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血清或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁(fan)更(geng)換培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細胞適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代細胞貼(tie)壁能(neng)力較弱，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠原蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代時(shi)密度建議(yi)控制在 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制和分化(hua)。

三、汙染控制

1. 無菌操(cao)作

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材，避免交叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期使用(yong)可能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原體汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需(xu)及時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變圓、碎片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提(ti)示(shi)汙染或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂(lie)次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存(cun)早期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍存液(ye)建議(yi)使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存。