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人非(fei)色素睫(jie)狀上(shang)皮(pi)細胞(bao)具體操作
取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管: 根據(ju)細胞(bao)凍存(cun)記錄按(an)標(biao)簽找(zhao)到(dao)所需(xu)細胞(bao)的(de)編(bian)號。
從液(ye)氮(dan)罐(guan)中(zhong)取(qu)出(chu)細胞(bao)盒(he),取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)的(de)細胞(bao),同時(shi)核(he)對管外(wai)的(de)編(bian)號。
初學者易(yi)犯(fan)錯誤:水浴(yu)鍋(guo)未預(yu)熱或者(zhe)未(wei)預(yu)熱到37℃。
水浴(yu)鍋(guo)內(nei)凍存(cun)管太(tai)多(duo),導(dao)致(zhi)傳(chuan)熱(re)不(bu)佳,使(shi)融(rong)化時(shi)間延長。
離(li)心(xin)前忘記平(ping)衡,導(dao)致(zhi)離(li)心(xin)機損壞和細胞(bao)丟失(shi)。
壹(yi)次復(fu)蘇細胞(bao)過多(duo),忘記更換(huan)吸(xi)頭(tou)和吸(xi)管,導(dao)致(zhi)細胞(bao)交叉汙染(ran)。
實(shi)驗前準備(bei):將(jiang)水浴(yu)鍋(guo)預熱(re)至(zhi)37℃
人非(fei)色素睫(jie)狀上(shang)皮(pi)細胞(bao)用(yong)75%酒(jiu)精(jing)擦拭紫外(wai)線照(zhao)射(she)30min的(de)超(chao)凈(jing)工(gong)作臺(tai)臺(tai)面。
在(zai)超(chao)凈(jing)工(gong)作臺(tai)中(zhong)按(an)次序(xu)擺(bai)放好消(xiao)過毒(du)的(de)離(li)心(xin)管、吸(xi)管、培(pei)養瓶(ping) 等(deng)。
迅速(su)解凍(dong):
迅速(su)將(jiang)凍(dong)存(cun)管投(tou)入(ru)到已經(jing)預(yu)熱(re)的(de)水浴(yu)鍋(guo)中(zhong)迅速(su)解凍(dong),並(bing)要(yao)不(bu)斷(duan)的(de)搖(yao)動(dong),使(shi)管中(zhong)的(de)液(ye)體迅速(su)融化。
.約(yue)-2min後(hou)
凍(dong)存管內(nei)液(ye)體*溶(rong)解,取(qu)出(chu)用(yong)酒(jiu)精(jing)棉(mian)球(qiu)擦拭凍存管的(de)外(wai)壁,再拿入(ru)超(chao)凈(jing)臺(tai)內(nei)。
平(ping)衡離(li)心(xin):用(yong)架(jia)盤(pan)天平(ping)平(ping)衡後(hou),放入(ru)離心(xin)機中(zhong)3000r/min 離(li)心(xin)3min
制備細胞(bao)懸(xuan)液(ye):吸(xi)棄(qi)上(shang)清液(ye)。
向離心(xin)管內(nei)加入(ru)0ml培(pei)養液(ye),吹打(da)制成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)。
活(huo)化與(yu)細胞(bao)復(fu)蘇 收(shou)到(dao)細胞(bao)株包裹(guo)時, 請檢查(zha)細胞(bao)株冷(leng)凍管是否有(you)解凍(dong)情(qing)形, 若(ruo)有(you)請立即通(tong)知(zhi)。細胞(bao)株請盡(jin)速開(kai)始培(pei)養, 或(huo)立即冷(leng)凍保存(置於(yu)–70 °C, 隔(ge)夜(ye)後, 移(yi)到liq N2)。
細胞(bao)復(fu)蘇的(de)原(yuan)則(ze)-快(kuai)速融化:必(bi)須將(jiang)凍(dong)存(cun)在(zai)-96℃液(ye)氮(dan)中(zhong)的(de)細胞(bao)快速(su)融(rong)化(hua)至(zhi)37℃,使(shi)細胞(bao)外(wai)凍(dong)存(cun)時(shi)的(de)冰(bing)晶(jing)迅速(su)融化,避免(mian)冰晶(jing)緩慢融化(hua)時(shi)進入(ru)細胞(bao)形成(cheng)再(zai)結(jie)晶,對細胞(bao)造成(cheng)損害。
細胞(bao)計數:細胞(bao)濃度(du)以(yi)5×05/ml為(wei)宜(yi)。
培(pei)養細胞(bao)將(jiang)復(fu)合(he)細胞(bao)計數要(yao)求(qiu)的(de)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)入(ru)培(pei)養瓶(ping)內(nei),將(jiang)培(pei)養瓶(ping)放入(ru)37℃和5%CO2的(de)培(pei)養箱(xiang)內(nei)2-4小時(shi)(或(huo)者(zhe)24-48小時(shi))後(hou)換(huan)液(ye)繼(ji)續(xu)培(pei)養培(pei)養,換(huan)液(ye)的(de)時(shi)間(jian)由(you)細胞(bao)情(qing)況而(er)定。
公司(si)其他銷量(liang)大產(chan)品(pin)信息(xi):蒙氏檸檬(meng)酸鹽(yan)、液(ye)體石蠟(la)
"SN/T 63 .—005 阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌分(fen)離(li)與(yu)計數"
編(bian)號 產(chan)品(pin)名(ming)稱 規(gui)格(ge) 產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)
006 腸(chang)道菌增(zeng)菌肉湯(tang)(EE 肉湯(tang)) 50g/瓶(ping) 用(yong)於(yu)腸(chang)道菌的(de)增(zeng)菌培(pei)養
037 結(jie)晶紫中(zhong)性(xing)紅膽鹽(yan)葡(pu)萄糖瓊脂(VRBGA) 50g/瓶(ping) 用(yong)於(yu)腸(chang)道菌選(xuan)擇(ze)性(xing)分離(li)和計數
50 胰(yi)蛋(dan)白腖(dong)大(da)豆(dou)瓊(qiong)脂(zhi)(TSA) 50g/瓶(ping) 用(yong)於(yu)細菌的(de)純(chun)化(hua)、培(pei)養
350 胰(yi)蛋白腖(dong)大(da)豆(dou)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban) 90mm×0 個(ge)/包 用(yong)於(yu)細菌的(de)純(chun)化(hua)、培(pei)養
00 革蘭氏染(ran)色液(ye) 0ml×4 支/盒(he) 用(yong)於(yu)細菌的(de)革蘭氏染(ran)色
00 氧化(hua)酶(mei)試(shi)紙(zhi) 0 片/瓶(ping) 用(yong)於(yu)氧化(hua)酶(mei)試(shi)驗
5070 氧化(hua)酶(mei)試(shi)劑(ji) g/瓶(ping) 用(yong)於(yu)氧化(hua)酶(mei)試(shi)驗
503 阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌顯(xian)色培(pei)養基(DFI 瓊脂(zhi)) 000ml/瓶(ping) 用(yong)於(yu)阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌的(de)分(fen)離(li)
0404 脫(tuo)羧酶(mei)試(shi)驗 ml×0 支/盒(he) 生 化(hua) 試(shi) 驗 , 接(jie) 種 後 每(mei) 支 滴 加 00~300ul 0303 覆蓋(gai)
030 賴氨酸(suan)脫羧酶(mei)試(shi)驗 ml×0 支/盒(he)
50 脫羧酶(mei)試(shi)驗 ml×0 支/盒(he)
030 氨基酸脫(tuo)羧酶(mei)試(shi)驗對(dui)照(zhao) ml×0 支/盒(he)
0303 無菌液(ye)體石蠟(la) ml×0 支/盒(he)
0307 (KCN)培(pei)養基 ml×0 支/盒(he)
0308 (KCN)對照(zhao)培(pei)養基 ml×0 支/盒(he)
504 D-蔗糖發(fa)酵(jiao)管 ml×0 支/盒(he) 用(yong)於(yu)細菌糖發(fa)酵(jiao)試(shi)驗
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