【概要(yao)描(miao)述(shu)】人骨(gu)髓(sui)來(lai)源巨(ju)噬細胞(bao)公司正(zheng)在出(chu)售的產品：KNRK大(da)鼠(shu)正(zheng)常腎細(xi)胞(bao)小鼠(shu)表(biao)皮角(jiao)化(hua)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠(shu)表(biao)皮角(jiao)化(hua)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)小鼠(shu)腸神經脊幹(gan)細胞(bao)大(da)鼠(shu)腸神經脊幹(gan)細胞(bao)小鼠(shu)骨(gu)細胞(bao)大(da)鼠(shu)骨(gu)細胞(bao)小鼠(shu)海綿體平滑肌(ji)細胞(bao)小鼠(shu)主動(dong)脈外膜(mo)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)大(da)鼠(shu)主動(dong)脈外膜(mo)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)

本(ben)公司所有產品僅供(gong)科學(xue)實驗，不(bu)做其他(ta)科學(xue)實驗外的使(shi)用！

人骨(gu)髓(sui)來(lai)源巨(ju)噬分離(li)自骨(gu)髓(sui)；骨髓(sui)是機(ji)體(ti)的造(zao)血組織，位(wei)於身(shen)體(ti)的(de)許多骨(gu)骼內。成(cheng)年動(dong)物(wu)的(de)骨髓(sui)分兩(liang)種：紅(hong)骨髓(sui)和(he)黃骨髓(sui)。紅骨(gu)髓(sui)能制(zhi)造(zao)紅細(xi)胞(bao)、血小板和(he)各(ge)種(zhong)白(bai)細(xi)胞(bao)。血小板有(you)止(zhi)血作(zuo)用(yong)，白(bai)細(xi)胞(bao)能殺(sha)滅(mie)與(yu)抑制(zhi)各種病原(yuan)體，包(bao)括細(xi)菌(jun)、病毒等；某(mou)些淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)能制(zhi)造(zao)抗體(ti)。因此(ci)，骨髓(sui)不(bu)但是造(zao)血器(qi)官，它還是重(zhong)要(yao)的免(mian)疫(yi)器(qi)官。骨髓(sui)是存(cun)在(zai)於(yu)長(chang)骨(如(ru)肱骨、股骨(gu))的骨(gu)髓(sui)腔(qiang)和(he)扁(bian)平(ping)骨(如髂骨(gu))的(de)稀(xi)松(song)骨質間的網眼中，是壹(yi)種(zhong)海綿狀(zhuang)的(de)組織，能產(chan)生血細(xi)胞(bao)的骨(gu)髓(sui)略呈紅(hong)色(se)，稱(cheng)為紅(hong)骨(gu)髓(sui)。出(chu)生時，紅骨(gu)髓(sui)充(chong)滿(man)全身骨髓(sui)腔(qiang)，隨著年(nian)齡(ling)增大(da)，脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)增多(duo)，相(xiang)當(dang)部分紅骨髓(sui)被黃骨髓(sui)取(qu)代，最(zui)後(hou)幾(ji)乎(hu)只(zhi)有(you)扁(bian)平(ping)骨骨髓(sui)腔(qiang)中有(you)紅(hong)骨(gu)髓(sui)。巨(ju)噬細胞(bao)屬免(mian)疫(yi)細(xi)胞(bao)，有多(duo)種(zhong)功(gong)能，是研(yan)究細胞(bao)吞(tun)噬(shi)、細胞(bao)免(mian)疫(yi)和(he)分子免(mian)疫(yi)學(xue)的重要(yao)對象。巨(ju)噬細胞(bao)較易獲得(de)，便於培(pei)養，並(bing)可進(jin)行(xing)純(chun)化(hua)。巨(ju)噬細胞(bao)屬不(bu)繁殖細胞(bao)群，在(zai)條件(jian)適宜(yi)下(xia)可生活2-3周(zhou)，多用做(zuo)原(yuan)代培(pei)養，難(nan)以(yi)長(chang)期(qi)生存(cun)。巨(ju)噬細胞(bao)(Macrophages)是壹(yi)種(zhong)位(wei)於組織內的白(bai)血球(qiu)，源(yuan)自單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)，而(er)單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)又(you)來(lai)源於骨髓(sui)中的(de)前(qian)體(ti)細(xi)胞(bao)。巨(ju)噬細胞(bao)和(he)單(dan)核(he)細(xi)胞(bao)皆為吞(tun)噬(shi)細胞(bao)，在脊(ji)椎動物體(ti)內參與(yu)非特異性防衛(先(xian)天(tian)性免(mian)疫(yi))和(he)特異性防衛(細(xi)胞(bao)免(mian)疫(yi))。它(ta)們的主要(yao)功能(neng)是以(yi)固(gu)定(ding)細胞(bao)或遊離(li)細胞(bao)的形(xing)式對細(xi)胞(bao)殘(can)片及(ji)病原(yuan)體進(jin)行(xing)噬菌(jun)作(zuo)用(yong)(即吞(tun)噬(shi)以及(ji)消(xiao)化(hua))，並(bing)激活淋巴(ba)球(qiu)或其他(ta)免(mian)疫(yi)細(xi)胞(bao)，令(ling)其對病原(yuan)體作(zuo)出(chu)反(fan)應(ying)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實驗室(shi)分離(li)的人骨(gu)髓(sui)來(lai)源巨(ju)噬采用分離(li)骨髓(sui)單(dan)個核(he)細(xi)胞(bao)經細胞(bao)因子誘(you)導(dao)分化法(fa)制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司實驗室(shi)分離(li)的人骨(gu)髓(sui)來(lai)源巨(ju)噬經CD68免(mian)疫(yi)熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

培(pei)養基(ji) 含FBS、生長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生長特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態 巨(ju)噬細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代特性 屬(shu)於終末(mo)分化細胞(bao)；屬於(yu)不(bu)增殖細胞(bao)群

消(xiao)化液(ye) 利(li)多ka因（12mM）

培(pei)養條件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材準備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術器(qi)械等，並進(jin)行高壓滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購(gou)買合(he)適的(de)培(pei)養基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其無(wu)菌且(qie)在有(you)效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動物(wu)或(huo)組織來(lai)源準備：根(gen)據實驗需求(qiu)，選擇合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或處(chu)死(si)，獲取(qu)所需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組織。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標組織，盡(jin)量減(jian)少對組織的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪、結(jie)締組織等非(fei)目(mu)的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除血液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管，使(shi)消化(hua)更均勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部分被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小細胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含血清的(de)培(pei)養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用細胞(bao)篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未(wei)消化(hua)的(de)組織碎片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收集(ji)細胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生長狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或(huo)異(yi)常，及(ji)時采取(qu)相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力檢測：在(zai)需要(yao)時，可采用臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢測，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快速操作

- 組織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽水沖洗(xi)組織，去(qu)除血液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇

- 根(gen)據組織類型選擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消化導(dao)致細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時間需嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘），可通(tong)過顯微鏡觀察(cha)細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選擇

- 使(shi)用含血清或(huo)特定(ding)生長因子的培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁更換(huan)培(pei)養基(ji)品牌或批(pi)次，減少細胞(bao)適應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力較弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度(du)建議控制(zhi)在 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑制(zhi)和(he)分化。

三、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程在超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培(pei)養基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期(qi)使(shi)用可能(neng)影(ying)響細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更換(huan)培(pei)養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形態（如細胞(bao)變圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可能(neng)提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存(cun)早(zao)期(qi)代次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使(shi)用 DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯(ti)度降溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。