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兔抗(kang)抗體(ti)*,兔抗(kang)抗體(ti)用(yong)於免(mian)疫組化(hua)實(shi)驗(yan),WB實驗,相應(ying)的(de)標記(ji)抗體(ti)有(you)HRP標(biao)記抗(kang)體(ti),FITC標記(ji),BIO等(deng)。
【貯存條件(jian)】: 貯(zhu)存於(yu)-20℃. 本品應(ying)在(zai)低(di)溫(wen)下(xia)保(bao)存,長時間(jian)在暴露(lu)在空(kong)氣中,含量會(hui)有(you)所降(jiang)低。
規格(ge):0.5ml
材料(liao)和(he)方(fang)法
. 材料(liao) 人成骨肉(rou)瘤(liu)MG63細(xi)胞(bao)為本實驗室保存。重(zhong)組質(zhi)粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以(yi)及(ji)recombinant cofilinHis6由王巖教(jiao)授(shou)惠贈(zeng)。脂質(zhi)體(ti) 2000( Invitrogen公司(si))。高糖DMEM培養(yang)基(美國(guo)Gibco 公司(si)),胎(tai)牛(niu)血清(Hyclone公(gong)司(si)),和(he)EDTA(Sigma 公司(si))。A2387,KN93,CaM,重(zhong)組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain,Calbiochem)。抗(kang)體(ti):Myc (9E0;Roche),HA (3F0;Roche),Pcofilin,Cofilin(Santa Cruz), CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.),PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免(mian)疫共沈澱(Protein Gagarose)試劑盒(邁(mai)晨科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公司(si))。
.2 蛋白(bai)印(yin)跡(ji)實(shi)驗(yan) MG63細(xi)胞(bao)鋪(pu)於(yu)35 mmol/L培養(yang)皿(min)中,待(dai)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da)到(dao)60%~70%時,轉染MycSSHL,48 h後換無血清培養(yang)基培養(yang)3 h,分(fen)別(bie)加(jia)入濃(nong)度(du)為0.5,,2.5,5 μmol/L的(de)A2387孵(fu)育(yu)0 min後裂解細(xi)胞(bao),離心取上清加(jia)入凝膠(jiao)加(jia)樣(yang)緩(huan)沖液,沸(fei)水浴上(shang)加(jia)熱5 min,上樣、電泳(yong)、轉膜、雜交〔壹(yi)抗分(fen)別(bie)為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及(ji)CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。
.3 體(ti)外激酶(mei)測定 MycSSHL(WT)及(ji)其突變(bian)體(ti)MycSSHL(2 SA)分(fen)別(bie)轉染至(zhi)MG63細(xi)胞(bao),48 h後采用(yong)免(mian)疫共沈澱(Protein Gagarose)試劑盒的(de)方(fang)法及(ji)抗cmyc抗體(ti),對照組為抗IgG抗(kang)體(ti)。回(hui)收MycSSHL,加(jia)入0.6 μg/ml重組活(huo)性CaMKⅡ(單獨或(huo)同(tong)時加(jia)入抑制(zhi)劑(ji)KN93)以(yi)及(ji)00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 於 20 μl 激酶(mei)反(fan)應(ying)緩(huan)沖液中(zhong),30℃反(fan)應(ying)40 min。反(fan)應(ying)產(chan)物(wu)進行(xing)SDSPAGE電泳(yong)、轉膜,應(ying)用(yong)放(fang)射自顯影技術檢(jian)測32P 標(biao)記(ji)的(de)SSHL水(shui)平(ping)。
.4 體(ti)外SSHL磷(lin)酸(suan)酶(mei)活(huo)性測定實驗(yan) MycSSHL(WT)或(huo)MycSSHL (2 SA)轉染至(zhi)MG63細(xi)胞(bao),48 h後,采用(yong)免(mian)疫共沈澱(Protein Gagarose)試劑盒的(de)方(fang)法及(ji)抗cmyc抗體(ti),對照組為抗IgG抗(kang)體(ti)。回(hui)收MycSSHL,加(jia)入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨或(huo)同(tong)時加(jia)入抑制(zhi)劑(ji)KN93),20 μg/ml CaM,以(yi)及(ji) 6.3 μg/ml cofilinHis6 於 20 μl 反(fan)應(ying)緩(huan)沖液(50 mol/L HEPES,pH 7.4,0. mol/L CaCl2,0.5 mol/L EDTA,3 mol/L MgCl2,00 mmol/L NaCl, mol/L dithiothreitol,0.5 mg/ml BSA, μg/ml leupeptin),中(zhong)30℃反(fan)應(ying)2 h。反(fan)應(ying)產(chan)物(wu)進行(xing)SDSPAGE電泳(yong)、轉膜、雜交(壹(yi)抗分(fen)別(bie)為Pcofilin,Cofilin, cmyc 抗體(ti))、ECL顯色。
本公司(si)更(geng)多產(chan)品(pin)優(you)惠:
鼠抗(kang)人神(shen)經絲(si)蛋(dan)白(bai)單克(ke)隆(long)抗體(ti) Neurofilament-68KDa(NF-L) 小鼠(shu)淋巴(ba)細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)因(yin)子(zi)Lptn/LTN/XCL抗(kang)體(ti) 0mg/ml
406 鼠抗(kang)人神(shen)經元(yuan)特(te)異性烯醇(chun)化(hua)酶(mei)單克(ke)隆(long)抗體(ti) Neuron Specific Enolase (NSE) 小鼠(shu)淋巴(ba)細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)相關抗原(yuan)3LFA-3/CD58抗(kang)體(ti) 50mg/2-3ml
407 兔抗(kang)人神(shen)經元(yuan)特(te)異性烯醇(chun)化(hua)酶(mei)多(duo)克(ke)隆(long)抗體(ti) Neuron Specific Enolase (NSE) 小鼠(shu)粒細(xi)胞(bao)集(ji)落刺激因(yin)子(zi)G-CSF抗(kang)體(ti) 00mg/5ml
408 鼠抗(kang)人神(shen)經元(yuan)特(te)異性烯醇(chun)化(hua)酶(mei)單克(ke)隆(long)抗體(ti) Neuron specific enolase(NSE) 小鼠(shu)克(ke)拉(la)拉(la)細(xi)胞(bao)蛋(dan)白CC6抗(kang)體(ti) 0mg
409 兔抗(kang)人NF Kappa B/p50多克(ke)隆(long)抗體(ti) NF Kappa B/p50 小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性血小(xiao)板內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)粘附(fu)分(fen)子(zi)sPECAM-/sCD3抗(kang)體(ti) 50mg
40 鼠抗(kang)人神(shen)經生長因(yin)子(zi)受(shou)體(ti)單克(ke)隆(long)抗體(ti) NGF-R 小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)蛋(dan)白C受(shou)體(ti)sEPCR抗體(ti) 00mg
小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性瘦(shou)素受(shou)體(ti)sLR抗體(ti) 000mg
4 鼠抗(kang)人nm23單克(ke)隆(long)抗體(ti) nm23 小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性肌(ji)球蛋白(bai)重(zhong)鏈2sMHC-2抗(kang)體(ti) 0mg/ml
小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性肌(ji)球蛋白(bai)重(zhong)鏈sMHC-抗(kang)體(ti) 50mg/2-3ml
42 兔抗(kang)人nm23多克(ke)隆(long)抗體(ti) nm23 小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性核因(yin)子(zi)κB受(shou)體(ti)活(huo)化(hua)因(yin)子(zi)配(pei)基sRANKL抗體(ti) 00mg/ml
43 兔抗(kang)人nm23多克(ke)隆(long)抗體(ti) nm23/NDP Kinase 小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性P選擇(ze)素(su)sP-selectin抗體(ti) 0mg
小鼠(shu)可(ke)溶(rong)性EndoglinENG/sCD05抗體(ti) 50mg
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