【概(gai)要描(miao)述(shu)】人(ren)源(yuan)NK細胞(bao)公(gong)司正在出售(shou)的(de)產品(pin)：SHZ-88大鼠乳(ru)腺癌細胞(bao)人(ren)腎(shen)癌組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)小鼠皮(pi)層神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)大鼠淋(lin)巴(ba)細胞(bao)人(ren)膀胱癌組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)小鼠胎盤絨毛膜(mo)滋養層細胞(bao)大鼠脊(ji)髓神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)人(ren)甲狀腺癌組(zu)織(zhi)源(yuan)細胞(bao)小鼠嗅(xiu)球(qiu)神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)大鼠椎(zhui)間(jian)盤(pan)髓核(he)細胞(bao)

人(ren)NK分離(li)自(zi)人(ren)外(wai)周血(xue)單個核(he)細胞(bao)；NK細胞(bao)即自(zi)然殺傷細(xi)胞(bao)（natural killer cell，NK）是機體(ti)重要(yao)的(de)免疫(yi)細胞(bao)，不僅(jin)與(yu)抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)、 抗病(bing)毒(du)感染和(he)免疫(yi)調節有(you)關(guan)，而(er)且(qie)在(zai)某(mou)些(xie)情(qing)況下(xia)參(can)與(yu)超(chao)敏(min)反(fan)應和自(zi)身(shen)免疫(yi)性疾病(bing)的(de)發(fa)生，能夠(gou)識(shi)別(bie)靶細(xi)胞(bao)、殺傷(shang)介質(zhi)。NK細胞(bao)來(lai)源(yuan)於(yu)骨(gu)髓淋巴(ba)樣幹(gan)細(xi)胞(bao)，其分化(hua)、發(fa)育(yu)依(yi)賴(lai)於(yu)骨(gu)髓及(ji)胸腺微(wei)環境(jing)，主(zhu)要(yao)分布(bu)於(yu)骨(gu)髓、外(wai)周血(xue)、肝、脾(pi)、肺(fei)和(he)淋(lin)巴(ba)結。NK細(xi)胞(bao)不同於(yu)T、B細胞(bao)，是壹類無需預(yu)先致敏(min)就(jiu)能非(fei)特異性殺傷(shang)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)和病(bing)毒(du)感染細(xi)胞(bao)的(de)淋(lin)巴(ba)細胞(bao)。由於(yu)NK細胞(bao)的(de)殺(sha)傷(shang)活性無MHC限制(zhi)，不依(yi)賴(lai)抗體，因(yin)此稱(cheng)為自然殺傷活性。NK細胞(bao)胞(bao)漿豐(feng)富，含有較(jiao)大的(de)嗜(shi)天青顆(ke)粒(li)，顆(ke)粒(li)的(de)含量(liang)與(yu)NK細(xi)胞(bao)的(de)殺(sha)傷(shang)活性呈正(zheng)相關(guan)。NK細(xi)胞(bao)作用於(yu)靶細(xi)胞(bao)後(hou)殺(sha)傷作用出(chu)現(xian)早，在(zai)體外(wai)1小(xiao)時、體(ti)內(nei)4小時即(ji)可(ke)見到殺傷效應。NK細胞(bao)的(de)靶(ba)細(xi)胞(bao)主(zhu)要(yao)有(you)某(mou)些(xie)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)（包括部(bu)分細(xi)胞(bao)系）、病(bing)毒(du)感染細(xi)胞(bao)、某些(xie)自身(shen)組(zu)織(zhi)細胞(bao)（如(ru)血(xue)細胞(bao)）、寄(ji)生蟲等(deng)，因(yin)此NK細(xi)胞(bao)是機體(ti)抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)、抗感染的(de)重要(yao)免疫(yi)因(yin)素(su)，也參(can)與(yu)第(di)Ⅱ型(xing)超敏(min)反(fan)應和移(yi)植物(wu)抗宿主(zhu)反(fan)應。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)人(ren)外(wai)周血(xue)NK采(cai)用取(qu)外(wai)周血(xue)、通(tong)過(guo)密度梯(ti)度離(li)心(xin)、差(cha)速(su)貼(tie)壁、細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)誘(you)導(dao)法(fa)制(zhi)備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)人(ren)源(yuan)NK經(jing)CD56免疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母和真(zhen)菌等。

本公(gong)司所有產品(pin)僅(jin)供科學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他(ta)科學實(shi)驗外(wai)的(de)使(shi)用！

培養基(ji) 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換液壹次

生長(chang)特性 懸浮

細(xi)胞(bao)形態 短(duan)梭形

傳(chuan)代特性 可(ke)傳5代左(zuo)右；3代以(yi)內(nei)狀態好(hao)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準備：準備無菌的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等(deng)，並(bing)進行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適的(de)培養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等）、胎牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試劑，確(que)保(bao)其無菌且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相應的(de)麻(ma)醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本庫中(zhong)獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取出目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的(de)組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大部(bu)分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單細胞(bao)懸液或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時，加入含血(xue)清(qing)的(de)培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將(jiang)濾液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察：每天用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態、生長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變化情(qing)況，如(ru)發(fa)現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用臺盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細胞(bao)的(de)生長(chang)情(qing)況和(he)健康(kang)狀態。

壹、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需(xu)立即處(chu)理(li)，避(bi)免長(chang)時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型(xing)選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁更換培養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑(yi)制和分化(hua)。

三、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺操(cao)作，使(shi)用壹次性耗材(cai)，避(bi)免交叉汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可能影(ying)響(xiang)細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度及(ji)培養基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更換培養基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎片(pian)增(zeng)多）可能提示汙(wu)染或營養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存(cun)早期代次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍存培養基(ji)），梯(ti)度降溫後(hou)液氮保(bao)存。