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羊(yang)抗(kang)豬(zhu)IgG免疫(yi)血(xue)清抗體(ti)*,羊(yang)抗(kang)豬(zhu)IgG免疫(yi)血(xue)清抗體(ti)用(yong)於免疫(yi)組(zu)化(hua)實(shi)驗,WB實(shi)驗,相(xiang)應(ying)的(de)標(biao)記(ji)抗體(ti)有(you)HRP標(biao)記(ji)抗體(ti),FITC標(biao)記(ji),BIO等(deng)。
【貯存(cun)條件(jian)】: 貯存(cun)於(yu)-20℃. 本(ben)品(pin)應(ying)在(zai)低(di)溫下(xia)保(bao)存(cun),長(chang)時(shi)間(jian)在(zai)暴(bao)露在(zai)空(kong)氣(qi)中(zhong),含(han)量(liang)會(hui)有所降(jiang)低(di)。
規格:0.5ml
材(cai)料和方(fang)法(fa)
. 材(cai)料(liao) 人(ren)成骨肉瘤MG63細胞(bao)為(wei)本實(shi)驗室保(bao)存(cun)。重組質粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王(wang)巖教(jiao)授(shou)惠(hui)贈(zeng)。脂質體 2000( Invitrogen公司)。高(gao)糖(tang)DMEM培(pei)養(yang)基(美(mei)國(guo)Gibco 公司),胎牛血清(Hyclone公司),和EDTA(Sigma 公司)。A2387,KN93,CaM,重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain,Calbiochem)。抗(kang)體:Myc (9E0;Roche),HA (3F0;Roche),Pcofilin,Cofilin(Santa Cruz), CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.),PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免(mian)疫共沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒(he)(邁(mai)晨(chen)科技有限(xian)公司)。
.2 蛋白(bai)印(yin)跡(ji)實(shi)驗 MG63細胞(bao)鋪(pu)於35 mmol/L培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong),待(dai)細胞(bao)密(mi)度達(da)到60%~70%時(shi),轉染(ran)MycSSHL,48 h後換無血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)3 h,分(fen)別(bie)加(jia)入(ru)濃度為0.5,,2.5,5 μmol/L的(de)A2387孵(fu)育0 min後(hou)裂解細胞(bao),離(li)心取(qu)上清(qing)加(jia)入(ru)凝(ning)膠加(jia)樣緩沖液(ye),沸(fei)水浴上加(jia)熱5 min,上(shang)樣、電泳、轉膜、雜交〔壹(yi)抗(kang)分(fen)別(bie)為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯(xian)色(se)。
.3 體(ti)外激(ji)酶測(ce)定 MycSSHL(WT)及(ji)其(qi)突變體MycSSHL(2 SA)分(fen)別(bie)轉染(ran)至MG63細胞(bao),48 h後(hou)采用(yong)免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒(he)的(de)方(fang)法(fa)及抗cmyc抗(kang)體(ti),對照(zhao)組(zu)為(wei)抗(kang)IgG抗體。回收MycSSHL,加(jia)入(ru)0.6 μg/ml重組活性(xing)CaMKⅡ(單獨或(huo)同時(shi)加(jia)入(ru)抑(yi)制劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 於(yu) 20 μl 激(ji)酶反(fan)應(ying)緩沖液(ye)中(zhong),30℃反(fan)應(ying)40 min。反(fan)應(ying)產物(wu)進(jin)行(xing)SDSPAGE電(dian)泳(yong)、轉(zhuan)膜(mo),應(ying)用(yong)放射自(zi)顯(xian)影(ying)技術檢(jian)測(ce)32P 標(biao)記(ji)的(de)SSHL水平(ping)。
.4 體外(wai)SSHL磷(lin)酸酶(mei)活性(xing)測定實(shi)驗 MycSSHL(WT)或(huo)MycSSHL (2 SA)轉染(ran)至MG63細胞(bao),48 h後(hou),采用(yong)免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒(he)的(de)方(fang)法(fa)及抗cmyc抗(kang)體(ti),對照(zhao)組(zu)為(wei)抗(kang)IgG抗體。回收MycSSHL,加(jia)入(ru)0.6 μg/ml CaMKⅡ(單(dan)獨(du)或(huo)同時(shi)加(jia)入(ru)抑(yi)制劑KN93),20 μg/ml CaM,以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 於(yu) 20 μl 反(fan)應(ying)緩沖液(ye)(50 mol/L HEPES,pH 7.4,0. mol/L CaCl2,0.5 mol/L EDTA,3 mol/L MgCl2,00 mmol/L NaCl, mol/L dithiothreitol,0.5 mg/ml BSA, μg/ml leupeptin),中(zhong)30℃反(fan)應(ying)2 h。反(fan)應(ying)產物(wu)進(jin)行(xing)SDSPAGE電(dian)泳(yong)、轉(zhuan)膜(mo)、雜交(壹(yi)抗(kang)分(fen)別(bie)為Pcofilin,Cofilin, cmyc 抗體)、ECL顯(xian)色(se)。
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兔子(zi)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白(bai)MIgM抗(kang)體(ti) 免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 抗(kang)布(bu)魯(lu)氏(shi)菌抗(kang)體
兔(tu)子(zi)組(zu)織型纖(xian)溶(rong)酶(mei)原激(ji)活劑(ji)t-PA抗(kang)體 Androgen Receptor 免(mian)疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R, Rb 乳(ru)腺(xian)癌(ai)轉(zhuan)移(yi)抑(yi)制基因(yin)抗(kang)體(ti)
α-銀環(huan)蛇(she)毒(du)素(su)α-BGT抗(kang)體(ti) BAX 免疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R,Rb 兔(tu)抗(kang)牛血清白(bai)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)
蓖麻(ma)凝集(ji)素(su)RCA抗(kang)體(ti) Bcl-2 免疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R,Rb 膽(dan)汁(zhi)酸鹽(yan)輸出(chu)泵(beng)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)
扁(bian)豆凝集素(su)LCA抗(kang)體(ti) CD34免疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H B細胞(bao)遷(qian)移(yi)基因(yin)2抗(kang)體(ti)
菜(cai)豆凝集素(su)PHA抗(kang)體(ti) C-erbB-2免疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H 過(guo)敏毒素(su)C5a(補(bu)體(ti)C5a)抗體
倉鼠(shu)核(he)因(yin)子(zi)κB受體活化(hua)因(yin)子(zi)配(pei)基RANKL抗體(ti) Cyclin D免(mian)疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H 卵(luan)巢(chao)癌(ai)抗(kang)原抗體
倉鼠(shu)基質金屬蛋白(bai)酶(mei)9/明(ming)膠酶BMMP-9/Gelatinase B 抗(kang)體(ti) E-cadherin 免疫組(zu)化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R,Rb 乳(ru)腺(xian)癌(ai)相(xiang)關(guan)抗原抗體
倉鼠(shu)甲(jia)狀腺(xian)結合(he)球(qiu)蛋白(bai)TBG抗(kang)體(ti) EGFR 免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R,Rb Caspase 激(ji)活的(de)脫(tuo)氧(yang)核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)酶抗體
倉(cang)鼠(shu)組(zu)織蛋白(bai)酶(mei)Kcath-K抗(kang)體(ti) ER、PR 免(mian)疫(yi)組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體 H,M,R,Rb 抗(kang)牛酪(lao)蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)
大腸(chang)桿(gan)菌宿主殘留蛋(dan)白(bai)E.coli P抗(kang)體(ti) ER/PR/C-erbB-2免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H 蛋(dan)白(bai)磷(lin)酸酯(zhi)酶(mei)-2B催(cui)化(hua)亞(ya)單(dan)位(wei)抗(kang)體
大豆凝集素(su)SBA抗(kang)體(ti) ER/PR免疫組化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H 鈣介質素(su)抗(kang)體(ti)
大鼠(shu),3-βD葡(pu)葡(pu)糖(tang)苷(gan)酶,3-βD-Glu抗體 Factor Ⅷ Related Ag免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)檢(jian)測(ce)抗體H 鈣蛋白(bai)酶(mei)抗(kang)體(ti)
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