【概要描(miao)述】人直腸癌(ai)組(zu)織(zhi)源細胞公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：HSC-T6大(da)鼠(shu)肝星(xing)形(xing)細胞人輸尿管上(shang)皮(pi)細胞小(xiao)鼠(shu)腎皮質(zhi)上(shang)皮(pi)細胞大(da)鼠(shu)腎皮質(zhi)上(shang)皮(pi)細胞人腎實質(zhi)細胞小(xiao)鼠(shu)膀胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞大(da)鼠(shu)膀胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞人腎小(xiao)球系(xi)膜(mo)細胞小(xiao)鼠(shu)腎足(zu)突(tu)細胞大(da)鼠(shu)腎足(zu)突(tu)細胞

人直腸癌(ai)組(zu)織(zhi)源分(fen)離自(zi)癌(ai)組(zu)織(zhi)；癌(ai)（cancer）是(shi)指(zhi)起源於(yu)上(shang)皮(pi)組(zu)織(zhi)的(de)惡性腫(zhong)瘤，是(shi)惡性腫(zhong)瘤中(zhong)最常(chang)見(jian)的(de)壹類。相(xiang)對應的(de)，起源於(yu)間葉(ye)組(zu)織(zhi)的(de)惡性腫(zhong)瘤統(tong)稱(cheng)為肉瘤。有(you)少(shao)數惡性(xing)腫(zhong)瘤不(bu)按上(shang)述原則命(ming)名(ming)，如腎母細胞瘤、惡性(xing)畸胎(tai)瘤等(deng)。壹般(ban)人們(men)所(suo)說的(de)“癌(ai)癥(zheng)"習(xi)慣上(shang)泛(fan)指(zhi)所(suo)有惡(e)性(xing)腫(zhong)瘤。癌(ai)癥(zheng)具(ju)有細胞分(fen)化和(he)增(zeng)殖異常、生(sheng)長(chang)失(shi)去(qu)控(kong)制(zhi)、浸潤性和(he)轉移(yi)性等(deng)生(sheng)物(wu)學特征(zheng)，其(qi)發(fa)生(sheng)是(shi)壹個(ge)多(duo)因子、多(duo)步驟的(de)復(fu)雜過程，分(fen)為致(zhi)癌(ai)、促癌(ai)、演進三個過(guo)程，與吸煙(yan)、感(gan)染(ran)、職(zhi)業(ye)暴露(lu)、環(huan)境汙染(ran)、不(bu)合(he)理膳食、遺傳因素密(mi)切相(xiang)關。癌(ai)細胞，是壹種(zhong)變(bian)異的(de)細胞，是產生(sheng)癌(ai)癥(zheng)的(de)病源。癌(ai)細胞與正(zheng)常(chang)細胞不同，有(you)無限增(zeng)殖、可轉化和(he)易轉移(yi)三大(da)特點，能夠(gou)無限增(zeng)殖並破(po)壞(huai)正(zheng)常的(de)細胞組(zu)織(zhi)。癌(ai)細胞除了分(fen)裂失(shi)控外(wai)（能進行多極(ji)分(fen)裂），還會局(ju)部侵(qin)入(ru)周(zhou)圍正常組(zu)織(zhi)甚(shen)至(zhi)經(jing)由體(ti)內(nei)循環系(xi)統(tong)或(huo)淋(lin)巴系(xi)統(tong)轉(zhuan)移(yi)到身(shen)體(ti)其(qi)他部(bu)分(fen)。分(fen)惡性(xing)和(he)良(liang)性兩(liang)種。
方法(fa)簡介：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)癌(ai)組(zu)織(zhi)源采用(yong)膠原酶消(xiao)化、經(jing)Percoll離心(xin)純(chun)化(hua)制(zhi)備(bei)而(er)來，細胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)人直腸癌(ai)組(zu)織(zhi)源經(jing)檢測(ce)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵母(mu)和(he)真菌等(deng)。

本(ben)公司所(suo)有產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實驗外(wai)的(de)使用(yong)！

培(pei)養(yang)基 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細胞形(xing)態(tai) 梭(suo)形(xing)、多(duo)角(jiao)形(xing)

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳5代(dai)左(zuo)右；3代以(yi)內(nei)狀態(tai)好(hao)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗器(qi)材準備：準備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器(qi)械等(deng)，並進行高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒處理。

2. 試(shi)劑準備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶（如、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其(qi)無菌且在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需求，選擇合適(shi)的(de)動物(wu)並進行相(xiang)應的(de)麻醉或(huo)處死(si)，獲取所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下，迅(xun)速取出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗(xi)數次，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段時(shi)間(jian)。期間可輕輕(qing)搖晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被消(xiao)化成單細胞懸液或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的(de)培(pei)養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離心(xin)：用(yong)細胞篩過濾細胞懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然(ran)後(hou)將濾液以適當(dang)的(de)轉速離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞沈澱。

細胞觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄細胞的(de)變(bian)化情(qing)況，如發(fa)現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異常，及(ji)時(shi)采(cai)取相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數與活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺盼藍染(ran)色(se)等(deng)方法(fa)對細胞進行計數和(he)活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健康(kang)狀態(tai)。

壹、取材(cai)與分(fen)離

1. 快速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需立(li)即處理，避免長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或(huo)非營(ying)養(yang)環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇消化(hua)酶，避免過(guo)度消(xiao)化(hua)導(dao)致細胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴格控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使用(yong)含血(xue)清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞需添(tian)加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養(yang)基品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少(shao)細胞適應壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原代細胞貼(tie)壁能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能需要包被培(pei)養(yang)皿（如膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度建議控制在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導致接觸(chu)抑制和(he)分(fen)化。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全程在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但長期使用(yong)可能影響細胞活性(xing)。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測支原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及時(shi)丟(diu)棄細胞。

四、狀態(tai)監(jian)控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培(pei)養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細胞變(bian)圓、碎片增(zeng)多）可能提示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原代細胞分(fen)裂次(ci)數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代次細胞。

- 凍存(cun)液建議使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度降(jiang)溫後液(ye)氮保(bao)存(cun)。