【概要(yao)描(miao)述】羊(yang)抗(kang)馬IgG-RBITC抗體(ti),抗體(ti)種類(lei),多種試劑現貨(huo)供(gong)應(ying)!

羊(yang)抗(kang)馬IgG-RBITC抗體(ti)*,羊(yang)抗(kang)馬IgG-RBITC抗體(ti)用於(yu)免疫組化實(shi)驗(yan)，WB實(shi)驗(yan)，相(xiang)應(ying)的(de)標記抗體(ti)有HRP標記抗體(ti)，FITC標記，BIO等。

【貯存條(tiao)件(jian)】： 貯存於(yu)-20℃. 本品(pin)應在(zai)低(di)溫(wen)下(xia)保(bao)存，長(chang)時(shi)間(jian)在(zai)暴露在(zai)空(kong)氣(qi)中(zhong)，含量(liang)會(hui)有所(suo)降低(di)。

規(gui)格(ge)：0.5ml

材(cai)料(liao)和方(fang)法

　　. 材(cai)料(liao) 人(ren)成骨(gu)肉瘤MG63細(xi)胞(bao)為(wei)本(ben)實(shi)驗(yan)室(shi)保(bao)存。重組質粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以(yi)及recombinant cofilinHis6由(you)王巖(yan)教(jiao)授(shou)惠(hui)贈(zeng)。脂(zhi)質體 2000( Invitrogen公司(si))。高(gao)糖(tang)DMEM培養(yang)基(ji)(美國(guo)Gibco 公司)，胎(tai)牛(niu)血(xue)清(Hyclone公司(si))，和EDTA(Sigma 公司(si))。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗體：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免(mian)疫(yi)共(gong)沈澱(dian)(Protein Gagarose)試劑盒(he)(邁(mai)晨(chen)科技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司(si))。

　　.2 蛋白(bai)印(yin)跡實(shi)驗(yan) MG63細(xi)胞(bao)鋪於(yu)35 mmol/L培養(yang)皿(min)中(zhong)，待(dai)細胞密(mi)度(du)達(da)到60%～70%時(shi)，轉(zhuan)染MycSSHL，48 h後(hou)換(huan)無血(xue)清培養(yang)基(ji)培養(yang)3 h，分別(bie)加(jia)入濃(nong)度為(wei)0.5，，2.5，5 μmol/L的(de)A2387孵(fu)育(yu)0 min後(hou)裂解(jie)細(xi)胞，離(li)心取(qu)上清加(jia)入凝膠(jiao)加(jia)樣緩沖(chong)液,沸(fei)水(shui)浴(yu)上加(jia)熱(re)5 min，上樣(yang)、電泳(yong)、轉膜、雜(za)交(jiao)〔壹抗分別(bie)為(wei)Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯(xian)色。

　　.3 體外激(ji)酶測定(ding) MycSSHL(WT)及其(qi)突變(bian)體MycSSHL(2 SA)分別(bie)轉染(ran)至MG63細(xi)胞(bao)，48 h後采(cai)用免疫(yi)共沈澱(dian)(Protein Gagarose)試劑盒(he)的(de)方(fang)法(fa)及抗cmyc抗(kang)體，對照(zhao)組(zu)為(wei)抗(kang)IgG抗(kang)體(ti)。回收(shou)MycSSHL，加(jia)入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨或(huo)同時加(jia)入抑(yi)制(zhi)劑(ji)KN93)以(yi)及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 於(yu) 20 μl 激(ji)酶反應緩沖(chong)液中，30℃反應40 min。反應產物進(jin)行(xing)SDSPAGE電泳(yong)、轉膜，應用(yong)放(fang)射(she)自顯(xian)影技(ji)術(shu)檢(jian)測(ce)32P 標記的SSHL水(shui)平。

　　.4 體外SSHL磷酸酶活性測定實(shi)驗(yan) MycSSHL(WT)或(huo)MycSSHL (2 SA)轉染(ran)至MG63細(xi)胞(bao)，48 h後，采(cai)用免疫(yi)共沈澱(dian)(Protein Gagarose)試劑盒(he)的(de)方(fang)法(fa)及抗cmyc抗(kang)體，對照(zhao)組(zu)為(wei)抗(kang)IgG抗(kang)體(ti)。回收(shou)MycSSHL，加(jia)入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨或(huo)同時加(jia)入抑(yi)制(zhi)劑(ji)KN93)，20 μg/ml CaM，以(yi)及 6.3 μg/ml cofilinHis6 於(yu) 20 μl 反應緩沖(chong)液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應2 h。反應產物進(jin)行(xing)SDSPAGE電泳(yong)、轉膜、雜(za)交(jiao)(壹抗分別(bie)為(wei)Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗(kang)體(ti))、ECL顯(xian)色。

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