【概(gai)要描(miao)述(shu)】人(ren)乳腺癌組織(zhi)源細(xi)胞公司正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：MMQ大鼠(shu)垂(chui)體(ti)瘤(liu)細(xi)胞人(ren)肝(gan)動脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞小鼠結(jie)腸平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞大鼠結(jie)腸平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞兔角膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞人(ren)肝(gan)動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞小鼠小(xiao)腸黏(nian)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞大鼠小(xiao)腸黏(nian)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞兔肺大(da)靜(jing)脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞人(ren)肝(gan)星(xing)狀細(xi)胞

本(ben)公司所有產(chan)品僅供科學(xue)實驗(yan)，不做其他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使用！

人(ren)乳腺癌組織(zhi)源分(fen)離自(zi)癌組織(zhi)；癌（cancer）是(shi)指(zhi)起源於上(shang)皮組織(zhi)的(de)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)，是(shi)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)中(zhong)最常(chang)見的(de)壹類。相對(dui)應(ying)的(de)，起源於間(jian)葉組(zu)織(zhi)的(de)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)統(tong)稱(cheng)為肉瘤(liu)。有少(shao)數惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)不(bu)按上(shang)述原則命名，如(ru)腎母(mu)細(xi)胞瘤、惡性(xing)畸(ji)胎(tai)瘤等。壹般人(ren)們所說(shuo)的(de)“癌癥"習(xi)慣(guan)上(shang)泛指(zhi)所有惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)。癌(ai)癥具有細(xi)胞分化(hua)和增(zeng)殖(zhi)異(yi)常(chang)、生長(chang)失去控制、浸潤(run)性(xing)和轉移性(xing)等生物(wu)學(xue)特(te)征(zheng)，其發(fa)生是(shi)壹(yi)個(ge)多(duo)因(yin)子(zi)、多(duo)步驟(zhou)的(de)復雜過程(cheng)，分為致癌(ai)、促癌(ai)、演(yan)進(jin)三個(ge)過(guo)程，與(yu)吸(xi)煙(yan)、感染(ran)、職業(ye)暴露(lu)、環(huan)境(jing)汙染、不(bu)合理(li)膳(shan)食、遺傳(chuan)因(yin)素(su)密切(qie)相關。癌細(xi)胞，是(shi)壹(yi)種(zhong)變(bian)異(yi)的(de)細(xi)胞，是(shi)產(chan)生癌(ai)癥的(de)病源。癌細(xi)胞與(yu)正(zheng)常(chang)細(xi)胞不同，有無(wu)限(xian)增(zeng)殖(zhi)、可(ke)轉化(hua)和易轉移三大(da)特(te)點(dian)，能夠無(wu)限增(zeng)殖(zhi)並破壞(huai)正(zheng)常(chang)的(de)細(xi)胞組織(zhi)。癌細(xi)胞除了分(fen)裂失(shi)控外(wai)（能進(jin)行(xing)多(duo)極(ji)分(fen)裂(lie)），還(hai)會(hui)局部侵入周(zhou)圍(wei)正(zheng)常(chang)組織(zhi)甚至(zhi)經由(you)體內(nei)循(xun)環系(xi)統(tong)或(huo)淋巴(ba)系(xi)統(tong)轉移到(dao)身體其他(ta)部分。分(fen)惡性(xing)和良性(xing)兩(liang)種(zhong)。
方(fang)法簡(jian)介：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離的(de)癌組織(zhi)源采(cai)用膠(jiao)原酶(mei)消化(hua)、經Percoll離(li)心純(chun)化(hua)制備(bei)而(er)來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離的(de)人(ren)乳腺癌組織(zhi)源經(jing)檢測(ce)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等。

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁

細(xi)胞形態 梭(suo)形、多(duo)角形

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可(ke)傳5代(dai)左(zuo)右；3代以(yi)內(nei)狀態好(hao)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材準備：準備無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心管、手術器(qi)械等，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅菌或(huo)其他(ta)合適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試劑，確保(bao)其無(wu)菌且(qie)在(zai)有效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗(yan)動物或(huo)組(zu)織(zhi)來源(yuan)準備：根(gen)據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選擇合適(shi)的(de)動物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織(zhi)樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去除(chu)多(duo)余的(de)脂肪、結締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出(chu)的(de)組織(zhi)用預冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數次，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞分離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的(de)離心管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃離(li)心管，使消化(hua)更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部分被(bei)消化(hua)成(cheng)單細(xi)胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用細(xi)胞篩過濾細(xi)胞懸液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心，收集(ji)細(xi)胞沈澱。

細(xi)胞觀(guan)察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞的(de)形態、生長(chang)狀態、密度等，記錄(lu)細(xi)胞的(de)變化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染色等方法(fa)對(dui)細(xi)胞進行計數和活力(li)檢測(ce)，以了解細(xi)胞的(de)生長(chang)情(qing)況(kuang)和健(jian)康狀態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長(chang)時間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類型選擇消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消化(hua)導致細(xi)胞損傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞解離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定生長(chang)因子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需(xu)添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁(fan)更(geng)換培養(yang)基(ji)品牌或(huo)批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞貼壁能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制和分化(hua)。

三、汙染控制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作(zuo)，使用壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交叉汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期使用可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測(ce)

- 定期檢測(ce)支原體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄細(xi)胞。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形態、密度及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更(geng)換培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示汙染或(huo)營養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分裂次數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早(zao)期代次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度降溫(wen)後液(ye)氮(dan)保存。