【概要描述】人(ren)臍帶(dai)血(xue)單(dan)核細(xi)胞公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產品：T24人(ren)膀胱(guang)移行細(xi)胞癌細(xi)胞人(ren)骨肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞KHOS-240S(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)膀胱(guang)癌細(xi)胞EJ(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)舌鱗(lin)癌耐藥株CAL 27+DDP(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)乳腺(xian)導(dao)管(guan)癌細(xi)胞HCC38(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)甲狀腺癌細(xi)胞 BHT11 (STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))人(ren)小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌NCI-H148(STR鑒定(ding)正(zheng)確(que))大(da)鼠主(zhu)動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞A7R5（種屬鑒定(ding)）人(ren)角(jiao)膜(mo)上皮細(xi)胞系(xi) HCE

本(ben)公司(si)所有產品僅供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使用(yong)！

人(ren)臍帶(dai)血(xue)單(dan)核分離自(zi)臍(qi)帶(dai)血(xue)；臍(qi)帶(dai)血(xue)是(shi)胎(tai)兒(er)娩出(chu)、臍帶(dai)結(jie)紮(zha)並(bing)離斷(duan)後(hou)殘(can)留(liu)在(zai)胎(tai)盤(pan)和(he)臍帶(dai)中(zhong)的血(xue)液(ye)。近(jin)十(shi)幾(ji)年的(de)研究發(fa)現，臍(qi)帶(dai)血(xue)中(zhong)含(han)有可以重(zhong)建造血(xue)和(he)免疫系(xi)統的造血(xue)幹(gan)細(xi)胞，可(ke)用(yong)於造血(xue)幹(gan)細(xi)胞移(yi)植(zhi)，因此(ci)，臍帶(dai)血(xue)已(yi)成(cheng)為造血(xue)幹(gan)細(xi)胞的(de)重(zhong)要來源(yuan)。臍(qi)帶(dai)血(xue)中(zhong)含(han)有大(da)量的(de)幹(gan)細(xi)胞，幹(gan)細(xi)胞是(shi)生(sheng)命(ming)的(de)種子，它(ta)會分化(hua)成(cheng)機體(ti)的各(ge)種細(xi)胞，結(jie)出(chu)各(ge)種不同(tong)的(de)果實——血(xue)液(ye)細(xi)胞、神(shen)經細(xi)胞、骨骼(ge)細(xi)胞等。幹(gan)細(xi)胞是(shi)具有自我(wo)更新(xin)、高度(du)增殖和(he)多項分(fen)化潛(qian)能的細(xi)胞群(qun)體(ti)；這些(xie)細(xi)胞可(ke)以通(tong)過(guo)分(fen)裂維持(chi)自(zi)身(shen)細(xi)胞的(de)特(te)性和(he)數量，又可進(jin)壹(yi)步(bu)分化(hua)為各(ge)種組織細(xi)胞，從(cong)而在組(zu)織(zhi)修復(fu)等方(fang)面(mian)發(fa)揮(hui)積極(ji)作用(yong)。血(xue)液(ye)中(zhong)的單(dan)核細(xi)胞來源(yuan)於骨髓(sui)幹(gan)細(xi)胞分(fen)化(hua)出的(de)髓(sui)樣(yang)幹(gan)細(xi)胞，是(shi)機(ji)體防(fang)禦系(xi)統的壹(yi)個重(zhong)要組(zu)成(cheng)部(bu)分(fen)。單(dan)核細(xi)胞能(neng)吞(tun)噬異(yi)物產生(sheng)抗體(ti)，在(zai)機(ji)體損傷(shang)治(zhi)愈(yu)、抗(kang)禦(yu)病原(yuan)的(de)入(ru)侵和(he)對(dui)疾(ji)病的(de)免(mian)疫方面(mian)起著(zhe)重(zhong)要的(de)作用(yong)。機(ji)體發(fa)生(sheng)炎癥(zheng)或(huo)其(qi)他疾(ji)病都(dou)可(ke)引起單(dan)核細(xi)胞總(zong)數百(bai)分比發(fa)生(sheng)變化(hua)，因(yin)此(ci)，檢查(zha)單(dan)核細(xi)胞計數成(cheng)為輔(fu)助診斷(duan)的(de)壹(yi)種重(zhong)要方(fang)法(fa)。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)人(ren)臍帶(dai)血(xue)單(dan)核采用(yong)密(mi)度(du)梯(ti)度(du)離心(xin)法(fa)結合(he)差(cha)速貼(tie)壁法(fa)制備而來，細(xi)胞總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)人(ren)臍帶(dai)血(xue)單(dan)核經CD14免(mian)疫熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和(he)真菌(jun)等。

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特(te)性 半(ban)貼(tie)壁半(ban)懸浮(fu)

細(xi)胞形態 圓(yuan)形、巨噬細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性 不增殖；不傳(chuan)代

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器(qi)械等，並(bing)進(jin)行高壓滅菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買合(he)適的培養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原(yuan)酶等）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且(qie)在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織；或(huo)從已(yi)有的組織(zhi)樣(yang)本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去除多余的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締組(zu)織等非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以去(qu)除血液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織塊放入(ru)含(han)有適量消(xiao)化(hua)酶的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕(qing)搖晃離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化(hua)更均勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加入含(han)血清(qing)的培養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當的轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞的(de)形態、生(sheng)長狀態、密(mi)度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變(bian)化情(qing)況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞汙染或(huo)異常，及(ji)時(shi)采取相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數與活(huo)力(li)檢測(ce)：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計數和(he)活力檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞的(de)生(sheng)長情(qing)況和(he)健康(kang)狀態。

壹(yi)、取材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露於室溫或(huo)非營養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去除血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致細(xi)胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長因(yin)子的(de)培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更換培養(yang)基品牌或(huo)批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接(jie)觸抑制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙染控制

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染。

- 培養(yang)基中(zhong)可添加雙抗，但長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能影響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形態、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基顏色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形態（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示汙染或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮保存(cun)。