【概要描(miao)述(shu)】小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR試劑盒本產(chan)品就是(shi)以(yi)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR 技(ji)術(shu)為基礎開發(fa)的(de)專(zhuan)門(men)檢(jian)測(ce)小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)的(de)試劑

【產(chan)品名(ming)稱(cheng)】小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR試劑盒

Name  ：MouseHepatitisVirus(MHV)ProbegRT-PCRKit

【包(bao)裝(zhuang)規格】50次/盒                                                                    

【預(yu)期(qi)用(yong)途(tu)】小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)(MouseHepatitisVirus ，MHV)是(shi)壹(yi)種 RNA 病(bing)毒(du) ，病毒(du)存在(zai)於血(xue)液(ye)和內臟(zang) ，特別(bie)是(shi) 肝(gan)和腎(shen) ，也(ye)見(jian)於糞尿(niao)中(zhong) ，對(dui)幼(you)鼠(shu)有(you)高(gao)度的(de)傳染性 ，小鼠肝(gan)炎(yan)是(shi)由(you) MHV 所(suo)致(zhi)的(de) 1 種的(de)傳染病 ，帶毒 小鼠分(fen)布(bu)於 ，但在(zai)正常(chang)情況(kuang)下(xia)大多呈(cheng)不(bu)顯(xian)性感(gan)染 ，只(zhi)在(zai)應激(ji)因(yin)素激(ji)發(fa)下才能成(cheng)為致(zhi)死(si)性疾(ji)病(bing) ，主(zhu) 要為肝(gan)炎(yan)和腦炎(yan) ， 因此(ci)小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)的(de)快(kuai)速(su)準(zhun)確(que)鑒定(ding)對(dui)該(gai)病的(de)預(yu)防(fang)和檢(jian)疫有(you)著(zhe)重要作(zuo)用(yong) 。本產(chan)品就是(shi)以(yi)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR 技(ji)術(shu)為基礎開發(fa)的(de)專(zhuan)門(men)檢(jian)測(ce)小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)的(de)試劑盒 ，它(ta)具有(you)下(xia)列特(te)點(dian)：

1.即開即(ji)用(yong) ，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要提(ti)供樣(yang)品 RNA 模(mo)板(ban)。

2.引物和探(tan)針(zhen)經(jing)過(guo)優(you)化(hua) ，靈(ling)敏(min)性(xing)高。

3.提供陽(yang)性對(dui)照 ，便(bian)於區分(fen)假(jia)陰性樣(yang)品。

4.特異性(xing)高(gao) ，引物是(shi)根據(ju)小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)高(gao)度(du)保(bao)守區設計(ji)，不(bu)會(hui)跟其(qi)他(ta)病(bing)毒的(de)RNA 發(fa)生交(jiao)叉反應。

5.本產(chan)品足夠(gou) 50 次 20μL 體系的(de)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR 反(fan)應(ying)。

6.本產(chan)品只(zhi)能用(yong)於科研。

【規格及(ji)成(cheng)分】

【運輸及(ji)保(bao)存】低(di)溫運(yun)輸，-20℃保(bao)存，保(bao)存期(qi)限(xian)為 12 個月。

【自(zi)備(bei)試劑】樣(yang)品 RNA。

【使用(yong)方法(fa)】壹、稀(xi)釋(shi)標準(zhun)曲(qu)線樣(yang)品 (以 10E2- 10E6 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li))由(you)於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常(chang)高 ，   因此(ci)下列稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定要在(zai)獨立(li)的(de)區域進(jin)行(xing) ，千(qian)萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染樣(yang)品或(huo)本試劑盒的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分 。為增(zeng)加(jia)產(chan)品穩(wen)定性(xing)和避(bi)免擴散(san)傳染性病(bing)原 ，本產(chan)品不(bu)提(ti)供活(huo)體樣(yang)品做(zuo)陽(yang)性對(dui)照 ，只(zhi)提供無傳染性的(de) DNA 片段作(zuo)為陽(yang)性對(dui)照 。

1.標記 6 個離心管 ，分別(bie)為 6 ，  5 ，  4 ，  3 ，  2, 1。

2.用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加(jia)入 45μL 熒光(guang) PCR 專(zhuan)用(yong)模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)   (最好(hao)用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭  ，  下(xia)同(tong)) 。

3.在(zai) 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入 5μL1  ×  10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照   (試劑盒提供) ，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong) ，得(de) 1  × 10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)標準(zhun)曲(qu)線樣(yang)品 。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。

4.換槍(qiang)頭 ，在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入 5μL1  ×  10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得) ，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)， 得(de) 1 × 10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)標準(zhun)曲(qu)線樣(yang)品 。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。

5.換槍(qiang)頭  ，在(zai) 4 號管(guan)中(zhong)加(jia)入 5μL1  ×  10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照  (上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得) ，充(chong)分震(zhen)蕩  1 分(fen) 鐘(zhong) ，得(de) 1 × 10E4 拷(kao)貝/μL 的(de)標準(zhun)曲(qu)線樣(yang)品 。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。

6.重復上面的(de)操作(zuo)直(zhi)到得到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度(du)的(de)標準(zhun)曲(qu)線樣(yang)品 。放冰(bing)上用(yong) 。

二、樣(yang)品 RNA 的(de)制備 

7 .如果(guo)有(you) N 個樣(yang)品 ，最(zui)好(hao)設置(zhi) N+2 個提取  ， 多出的(de)壹個是(shi) PC (樣(yang)品制備陽(yang)性對(dui)照)  ，壹個是(shi) NC (樣(yang)品制備陰(yin)性對(dui)照) 。可以(yi)用(yong)  10μL 陽(yang)性對(dui)照的(de)  10000 倍(bei)稀(xi)釋(shi)液(ye)再加(jia)上壹(yi)定量的(de)水(shui)使總(zong)體(ti)積(ji)跟(gen)每(mei)次制備要求的(de)體積(ji)壹(yi)樣(yang) ，  以此(ci)作(zuo)為 PC 。  另(ling)外用(yong)水(shui)作(zuo)為 NC。

8 .用(yong)自(zi)選(xuan)方法(fa)純化(hua)樣(yang)品的(de) RNA  ，  本試劑盒跟市(shi)場(chang)上大(da)多數(shu)病毒 RNA 提取(qu)試劑盒兼容(rong)。

三(san)ProbeqRT-PCR反應(ying) (20μL 體系(xi)，在(zai)樣(yang)品制備室進行(xing))

9 .如果(guo)做定量分(fen)析(xi)並(bing)且只(zhi)做  1 次重復 ，則標記 N+9 個 PCR 管 ，其(qi)中(zhong) N+2 個用(yong)於上步得到(dao)的(de) N+2 個樣(yang)品 ，  1 個用(yong)於 PCR 陰性(xing)對(dui)照  (用(yong)水(shui)做模(mo)板(ban)) ，  6 個用(yong)於標準(zhun)曲(qu)線 。如果(guo)做定性分析 ，  並且 只(zhi)做 1 次重復 ，則標記 N+4 個 PCR 管 ，  其(qi)中(zhong) N+2 個用(yong)於上步得到(dao)的(de) N+2 個樣(yang)品  ，   1 個用(yong)於 PCR 陰性(xing)對(dui)照 (用(yong)水(shui)做模(mo)板(ban))  ， 1 個用(yong)於 PCR 陽(yang)性對(dui)照 (用(yong)第(di) 4 號(hao)管中的(de)陽(yang)性對(dui)照稀(xi)釋(shi)液(ye)做模板(ban)) 。  下(xia)面只(zhi)以定量分(fen)析(xi)為描(miao)述(shu)操作(zuo)步驟(zhou)，

10 . 在(zai)標記管中按下(xia)表(biao)加(jia)入各(ge)成(cheng)分   (本表只(zhi)列出壹次重復  。樣(yang)品管(guan)和陰(yin)性對(dui)照設置(zhi)完(wan)畢(bi)後(hou)才設置(zhi)陽(yang) 性對(dui)照 ，  並且陽(yang)性對(dui)照樣(yang)品要等(deng)所有(you)管(guan)子蓋上蓋(gai)子儲存好(hao)後最(zui)後(hou)加(jia))   

小鼠肝(gan)炎(yan)病毒(du)探(tan)針(zhen)法(fa)熒光(guang)定量 RT-PCR試劑盒11.蓋上蓋(gai)子後上機，按下(xia)面參(can)數(shu)進行(xing) qRT-PCR：

四：數(shu)據(ju)處(chu)理(li)

12. 如果(guo)把本試劑盒用(yong)於定量檢(jian)測(ce) ，  則以(yi)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度(du)的(de) log 值(zhi)為橫(heng)軸(zhou)  ，  以(yi) Ct 值(zhi)為縱(zong)軸(zhou) ，  繪制標 準(zhun)曲(qu)線 。再以(yi)待(dai)測樣(yang)品的(de) Ct 值(zhi)從標準(zhun)曲(qu)線上推算(suan)出(chu)樣(yang)品 RNA 濃(nong)度(du)的(de) log 值(zhi) ，再推算(suan)出(chu)其(qi)濃(nong)度(du)。

13 . 如果(guo)把本試劑盒用(yong)於定性(xing)檢(jian)測  ，只(zhi)判斷陽(yang)性或(huo)陰(yin)性(xing)  ，則陰(yin)性對(dui)照 Ct 必須(xu)大(da)於或等(deng)於 40 。  陽(yang) 性對(dui)照必須(xu)有(you)熒光(guang)對(dui)數(shu)增長(chang) ，有(you)典(dian)型擴(kuo)增(zeng)曲(qu)線 ，Ct 值(zhi)應該小於或等(deng)於 30 。對(dui)待(dai)測樣(yang)品 ，如果(guo) 其(qi) Ct 大(da)於或等(deng)於 40 則為陰(yin)性(xing) ，  如果(guo)小於或等(deng)於 35 則為陽(yang)性 。  如果(guo)在(zai) 35-40 之(zhi)間(jian)  ，則重(zhong)復壹次 。重復實驗的(de) Ct 值(zhi)如果(guo)大於或等(deng)於 40 則為陰(yin)性(xing)  ，如果(guo)小於 35 ，則為陽(yang)性。