【概(gai)要(yao)描(miao)述】30%單(dan)/雙丙烯酰胺預制膠(jiao)溶液（29:）
Western免(mian)疫(yi)印跡(ji)(Western Blot)是(shi)將(jiang)蛋白質(zhi)轉移到膜(mo)上，然(ran)後(hou)利用抗體進(jin)行檢測。

壹(yi)、 原理

與(yu)Southern或(huo)Northern雜交方法(fa)類(lei)似，但Western Blot采用的是(shi)聚丙烯酰胺凝膠(jiao)電泳，被(bei)檢(jian)測(ce)物(wu)是(shi)蛋白質(zhi)，“探針(zhen)”是(shi)抗體，“顯色(se)”用標記的二抗(kang)。經過(guo)PAGE分離(li)的(de)蛋(dan)白質(zhi)樣品(pin)，轉移到固相載體（例(li)如(ru)硝(xiao)#纖維素(su)薄(bo)膜(mo)）上，固相載體以非(fei)共(gong)價(jia)鍵(jian)形式(shi)吸附蛋白質(zhi)，且能保(bao)持電泳分(fen)離(li)的(de)多(duo)肽類(lei)型(xing)及(ji)其(qi)生物(wu)學(xue)活性不(bu)變(bian)。以(yi)固相載體上的蛋(dan)白質(zhi)或(huo)多(duo)肽作為抗(kang)原，與(yu)對(dui)應(ying)的(de)抗(kang)體起免(mian)疫(yi)反(fan)應(ying)，再(zai)與(yu)酶(mei)或(huo)同(tong)位素(su)標記(ji)的第二抗(kang)體起反(fan)應(ying)，經過(guo)底(di)物(wu)顯色(se)或(huo)放(fang)射自(zi)顯影以(yi)檢測(ce)電泳分(fen)離(li)的(de)特(te)異性目(mu)的基(ji)因表達(da)的(de)蛋(dan)白成(cheng)分(fen)。該技術也(ye)廣(guang)泛應(ying)用於(yu)檢(jian)測(ce)蛋白水平(ping)的(de)表達(da)。

二、分(fen)類(lei)30%單(dan)/雙丙烯酰胺預制膠(jiao)溶液（29:）
現常用的有底物(wu)化(hua)學(xue)發光(guang)ECL和底物(wu)DAB呈色(se)，體同(tong)水平(ping)和(he)實驗條件的(de)是(shi)用*種方法(fa)，目(mu)前(qian)發(fa)表文章通常是(shi)用底物(wu)化(hua)學(xue)發光(guang)ECL。只要(yao)買(mai)現成的(de)試劑盒(he)就(jiu)行，操(cao)作也(ye)比較(jiao)簡(jian)單(dan)，原理如下(xia)（二抗(kang)用HRP標記）：反(fan)應(ying)底(di)物(wu)為過(guo)氧化(hua)物(wu)+魯米諾(nuo)，如(ru)遇到(dao)HRP，即(ji)發光(guang)，可使(shi)膠(jiao)片曝(pu)光(guang)，就(jiu)可洗出(chu)條(tiao)帶(dai)。

三(san)、 主(zhu)要(yao)試劑(ji)

、 丙烯酰胺和N，N’-亞甲雙丙烯酰胺，應(ying)以(yi)溫(wen)熱(re)（以利於(yu)溶解雙丙稀酰胺）的去(qu)離(li)子(zi)水配(pei)制含有29%（w/v）丙稀酰胺和(he)%（w/v）N，N’-亞甲雙丙烯酰胺儲(chu)存(cun)液丙稀酰胺29g，N，N-亞甲叉雙丙稀酰胺g，加H2O至 00ml。）儲(chu)於(yu)棕(zong)色(se)瓶，4℃避光(guang)保(bao)存。嚴(yan)格核(he)實PH不(bu)得(de)超過(guo)7.0，因可(ke)以發(fa)生(sheng)脫(tuo)氨(an)基(ji)反(fan)應(ying)是(shi)光(guang)催化(hua)或(huo)堿(jian)催(cui)化(hua)的(de)。使(shi)用期不(bu)得(de)超過(guo)兩個月，隔(ge)幾(ji)個月須(xu)重(zhong)新(xin)配制。如有(you)沈澱(dian)，可(ke)以(yi)過(guo)濾。30%單(dan)/雙丙烯酰胺預制膠(jiao)溶液（29:）
2、 十二烷基(ji)硫#鈉SDS溶液:0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去(qu)離(li)子(zi)水配(pei)制，室溫(wen)保(bao)存。

3、 分離(li)膠(jiao)緩(huan)沖(chong)液:.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和48mlmol/L HCl 混(hun)合(he)，加(jia)水稀(xi)釋(shi)到00ml終體積。過(guo)濾後(hou)40℃保(bao)存。

4、 濃縮膠(jiao)緩(huan)沖(chong)液:0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶於(yu)40mlH2O中，用約48ml mol/L HCl調(tiao)至(zhi)pH6.8加水稀(xi)釋(shi)到00ml終體積。過(guo)濾後(hou)40C保(bao)存。這(zhe)兩種緩(huan)沖(chong)液必(bi)須(xu)使(shi)用Tris堿(jian)制備，再(zai)用HCL調(tiao)節(jie)PH值，而不(bu)用 Tris.CL。

5、 TEMED原溶液N，N，N’N’四甲(jia)基(ji)乙二胺(an)催化(hua)過(guo)硫#銨形(xing)成自(zi)由基(ji)而加(jia)速(su)兩種丙稀酰胺的(de)聚合(he)。PH太(tai)低時，聚合(he)反(fan)應(ying)受到抑(yi)制。0%（w/v）過(guo)硫#胺溶液。提供(gong)兩種丙稀酰胺聚合(he)所(suo)必(bi)須(xu)的自(zi)由基(ji)。去(qu)離(li)子(zi)水配(pei)制數(shu)ml，臨用前配制.

6、 SDS- PAGE加樣緩(huan)沖(chong)液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩(huan)沖(chong)液8ml，甘油6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰(qiu)基(ji)乙醇3.2ml，0.05%溴(xiu)酚(fen)藍(lan).6ml，H2O 32ml混(hun)勻(yun)備用。按:或(huo):2比例(li)與(yu)蛋(dan)白質(zhi)樣品(pin)混(hun)合(he)，在(zai)沸(fei)水終煮3min混(hun)勻(yun)後(hou)再(zai)上(shang)樣(yang)，壹(yi)般為20-25ul，總蛋(dan)白量(liang)00μg。

7、 Tris-甘氨(an)#電泳緩(huan)沖(chong)液:30.3gTris，88g甘氨(an)#，0gSDS，用蒸(zheng)餾(liu)水溶解至000ml，得(de)0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨(an)#電極緩(huan)沖(chong)液。臨用前稀釋0倍。

8、 轉移緩(huan)沖(chong)液：配制L轉移緩(huan)沖(chong)液，需(xu)稱(cheng)取(qu)2.9g甘氨(an)#、5.8gTris堿(jian)、0.37g SDS，並(bing)加入(ru)200ml甲醇，加(jia)水至(zhi)總量(liang)L。

9、 麗春紅(hong)染液儲(chu)存(cun)液：麗春紅S 2g 三(san)#乙#30g 磺基(ji)水楊(yang)# 30g 加水至(zhi)00ml 用時上述儲(chu)存(cun)液稀釋0倍即(ji)成麗(li)春(chun)紅(hong)S使(shi)用液。使(shi)用後(hou)應(ying)予以廢棄。

0、 脫(tuo)脂奶粉(fen)5%（w/v）。

、 NaN3 0.02% 疊(die)氮鈉（有毒(du)，戴(dai)手套操(cao)作），溶於(yu)磷(lin)#緩(huan)沖(chong)鹽溶液（PBS）。

2、 Tris緩(huan)沖(chong)鹽溶液（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。

3、 Tween20（5）鼠抗人-MMP-9（6）鼠抗人-TIMP-。

4、 過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第二抗(kang)體。

5、 NBT（溶於(yu)70%二甲(jia)基(ji)甲酰胺，75mg/ml）。

6、 BCIP（溶於(yu)00%二甲(jia)基(ji)甲酰胺，50mg/ml）。

7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。

8、 00mmol/L NaCl。

9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L EDTA。（可以參(can)看分(fen)子克(ke)隆(long)）微(wei)囊(nang)藻(zao)毒(du)素(su)RR
MDR-免(mian)疫(yi)組化(hua)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)黑(hei)海(hai)綿(mian)酸(suan),軟(ruan)海(hai)綿(mian)酸(suan)
黑(hei)海(hai)綿(mian)酸(suan),軟(ruan)海(hai)綿(mian)酸(suan)
黑(hei)海(hai)綿(mian)酸(suan),軟(ruan)海(hai)綿(mian)酸(suan)
黑(hei)海(hai)綿(mian)酸(suan),軟(ruan)海(hai)綿(mian)酸(suan)
黑(hei)海(hai)綿(mian)酸(suan),軟(ruan)海(hai)綿(mian)酸(suan)

鰭(qi)藻(zao)毒(du)素(su)
裸藻(zao)毒(du)
裸藻(zao)毒(du)

石房蛤毒(du)素(su)

英文名稱

Aflatoxin B
Aflatoxin B2
Aflatoxin G
Aflatoxin G2
Aflatoxin M
Aflatoxin M2
Citrinin
Deoxynivalenol
Vomintoxin
Fumonisin B
Fumonisin B2
Ochratoxin A
Patulin
T2 Toxin
Zearalenone
Sterigmatocystin
Moniliformin