【概要(yao)描述(shu)】小鼠真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)細胞(bao)公司正(zheng)在出售的(de)產(chan)品：TFK1人(ren)膽管(guan)癌細胞(bao)RAW264.7小鼠巨(ju)噬細胞(bao)16HBE人(ren)支(zhi)氣(qi)管上皮細(xi)胞(bao)ZA1轉(zhuan)S9基(ji)因倉(cang)鼠卵(luan)巢細(xi)胞(bao)V79.4倉(cang)鼠肺(fei)細胞(bao)MC53小鼠腎(shen)系膜(mo)細(xi)胞(bao)HRMC腎(shen)小球(qiu)系膜(mo)細(xi)胞(bao)HMC腎(shen)小球(qiu)系膜(mo)細(xi)胞(bao)HBZY-1大(da)鼠腎(shen)小球(qiu)系膜(mo)細(xi)胞(bao)BB7.2分(fen)泌(mi)A2抗(kang)體B淋(lin)巴(ba)細胞(bao)

小鼠真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)分(fen)離自皮(pi)膚(fu)毛(mao)囊組(zu)織(zhi)；毛囊是表(biao)皮細(xi)胞(bao)連(lian)續(xu)形(xing)成(cheng)的(de)袋樣(yang)上(shang)皮。其基底是真(zhen)皮(pi)凹(ao)進的(de)真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)，中心是壹(yi)根(gen)毛(mao)發，立(li)毛肌的(de)壹(yi)側(ce)斜附在毛囊壁上(shang)，附著(zhe)點(dian)的(de)上方為皮脂(zhi)腺(xian)通(tong)入(ru)毛(mao)囊的(de)短(duan)頸(jing)，毛(mao)囊在皮膚(fu)表(biao)面(mian)的(de)開口(kou)是毛囊孔(kong)。毛囊位於真(zhen)皮(pi)和(he)皮下組(zu)織(zhi)中，毛囊向下(xia)伸(shen)入(ru)真(zhen)皮(pi)約有壹(yi)厘(li)米(mi)深度，它是由(you)包繞(rao)毛(mao)發與表(biao)皮相(xiang)連的(de)上皮(pi)鞘(qiao)，以(yi)及(ji)皮(pi)脂(zhi)腺(xian)和(he)立(li)毛肌所(suo)組(zu)成(cheng)的(de)壹(yi)個(ge)結構比較(jiao)復雜(za)的(de)器官附件組(zu)織(zhi)。毛囊實際(ji)上是(shi)由(you)結締組(zu)織(zhi)和上皮兩(liang)部分(fen)所(suo)組(zu)成(cheng)，除了具(ju)有結締組(zu)織(zhi)和血管的(de)真(zhen)皮(pi)乳(ru)頭(tou)（毛乳(ru)頭(tou)）外，毛囊其余部分(fen)都(dou)是(shi)由(you)表(biao)皮細(xi)胞(bao)分(fen)化而(er)來。真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)細胞(bao)位(wei)於毛(mao)囊基底(di)部，是(shi)壹(yi)類(lei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)。在毛囊發育(yu)早(zao)期，真(zhen)皮(pi)細(xi)胞(bao)向(xiang)單(dan)層(ceng)上皮細(xi)胞(bao)發(fa)出(chu)真(zhen)皮(pi)信號(hao)，刺(ci)激(ji)上皮局(ju)部(bu)形(xing)成(cheng)毛基板。隨(sui)後毛基(ji)板細胞(bao)向(xiang)下(xia)方的(de)真(zhen)皮(pi)發(fa)出表(biao)皮信號(hao)，誘(you)導(dao)其形(xing)成(cheng)有成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)組(zu)成(cheng)的(de)凝集(ji)細(xi)胞(bao)團。在此過程(cheng)中，毛(mao)母(mu)質(zhi)細(xi)胞(bao)逐(zhu)漸包裹凝集(ji)細(xi)胞(bao)團，形(xing)成(cheng)成(cheng)熟的(de)真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)細胞(bao)。作為毛囊中的(de)重要(yao)細胞(bao)群，真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)細胞(bao)的(de)分(fen)子(zi)機制和臨床應用正(zheng)在被逐(zhu)漸認(ren)識和解析(xi)。
方法簡介：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)小鼠真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)采用膠(jiao)原酶-中(zhong)性dan白酶混(hun)合(he)消(xiao)化法制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為5×105cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)小鼠真(zhen)皮(pi)毛(mao)乳(ru)頭(tou)經層(ceng)粘連蛋(dan)白免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度可達90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌等。

本(ben)公司所(suo)有產(chan)品僅供(gong)科(ke)學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實驗(yan)外的(de)使用！

包被條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次(ci)；

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 梭(suo)形(xing)、多(duo)角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代特(te)性 可(ke)傳1-2代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離心管、手術器械(xie)等，並進行高(gao)壓(ya)滅菌或其(qi)他合適的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配(pei)制或購(gou)買合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無菌且(qie)在有效期內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來源準(zhun)備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行相(xiang)應的(de)麻醉或(huo)處死(si)，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在無菌條件下，迅速取(qu)出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡量減(jian)少對組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪、結締組(zu)織(zhi)等非目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的(de)無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去除血液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便後續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有適量消(xiao)化酶的(de)離心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使消(xiao)化更均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞(bao)團時，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾與離心：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除未消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速離心，收集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法對細(xi)胞(bao)進行計(ji)數(shu)和活(huo)力檢測，以了解細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健康狀態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營養環(huan)境(jing)。

- 使用無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗組(zu)織(zhi)，去除血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解離狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條(tiao)件優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使用含(han)血清或(huo)特(te)定生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯合會導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑制和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌操作

- 全(quan)程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作，使用壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙(shuang)抗，但長期使用可(ke)能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定(ding)期檢測支(zhi)原體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使用 DMSO+血清（或(huo)專用凍(dong)存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度降溫後液氮(dan)保(bao)存。