【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠(shu)浦肯野細(xi)胞公(gong)司正在出售的產品(pin)：GBC-SD (STR)人(ren)膽(dan)囊(nang)癌細(xi)胞JB6-C30小(xiao)鼠(shu)皮膚細(xi)胞JB6-C41小(xiao)鼠(shu)皮膚細(xi)胞HK-2C人(ren)胚腎(shen)上皮細(xi)胞NRK腎(shen)小(xiao)管上皮細(xi)胞GP2-293人(ren)胚腎(shen)上皮細(xi)胞GP2-293Luc人(ren)胚腎(shen)上皮包裝細(xi)胞HPT-8滋(zi)養(yang)層上皮細(xi)胞BPH-1前列腺(xian)增(zeng)生(sheng)細(xi)胞Nthy-ori3-1人(ren)甲狀腺(xian)正(zheng)常細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)浦肯野分離(li)自(zi)小(xiao)腦(nao)皮質組(zu)織(zhi)；小(xiao)腦(nao)的表面被覆(fu)著(zhe)壹層(ceng)灰(hui)質，叫小(xiao)腦(nao)皮質，小(xiao)腦(nao)皮質分為(wei)3層(ceng)，從(cong)表及(ji)裏(li)分別(bie)為分子(zi)層(ceng)、浦(pu)肯野細(xi)胞層(ceng)和顆(ke)粒細(xi)胞層(ceng)。皮質(zhi)裏(li)含有星狀細(xi)胞、籃(lan)狀細(xi)胞、浦(pu)肯野細(xi)胞、高(gao)爾(er)基細(xi)胞和顆(ke)粒細(xi)胞等(deng)5種神經元(yuan)。浦肯野細(xi)胞發出的軸(zhou)突(tu)組(zu)成(cheng)小(xiao)腦(nao)皮質的傳(chuan)出纖維，終止於(yu)小(xiao)腦(nao)白質內的神(shen)經核。浦肯野細(xi)胞（Purkinje cell）是從(cong)小(xiao)腦(nao)皮質發出的能夠(gou)傳出沖(chong)動(dong)的神(shen)經元(yuan)。人的小(xiao)腦(nao)皮質約有1500萬(wan)個(ge)浦肯野細(xi)胞。浦(pu)肯野細(xi)胞還(hai)廣泛分布(bu)於(yu)心(xin)室(shi)。顯著的電(dian)生理(li)特點(dian)是傳(chuan)導性強(qiang)，傳導速(su)度(du)快(kuai)，可達4000mm/s。屬(shu)快反(fan)應自(zi)律型(xing)細(xi)胞，具有舒張期(qi)自(zi)動除極化(hua)的性能，因(yin)而(er)有自(zi)律性，但(dan)自(zi)律性強(qiang)度(du)明(ming)顯(xian)低(di)於(yu)竇(dou)房結(jie)P細(xi)胞。這(zhe)類細(xi)胞常常平行排(pai)列，細(xi)胞內(nei)電(dian)阻(zu)低(di)，只有心(xin)室(shi)細(xi)胞的1/3。小(xiao)腦(nao)：浦肯野細(xi)胞是小(xiao)腦(nao)皮質中(zhong)最大(da)的神(shen)經元(yuan)，細(xi)胞體呈(cheng)梨(li)形(xing)，頂端(duan)發出2~3條(tiao)粗(cu)大(da)的主樹(shu)突(tu)，向外伸入(ru)分子(zi)層(ceng)。主樹(shu)突(tu)沿途(tu)分支(zhi)繁茂，形如(ru)展開的、扁薄(bo)的扇(shan)形(xing)，鋪(pu)展在與(yu)小(xiao)腦(nao)葉(ye)片長軸垂直的平(ping)面上。樹(shu)突(tu)分支(zhi)上有大量(liang)的樹(shu)突(tu)棘(ji)，與(yu)傳入纖維構(gou)成廣泛的突(tu)觸(chu)聯系，接受(shou)傳(chuan)入(ru)小(xiao)腦(nao)的全(quan)部信(xin)息(xi)。軸突(tu)由細(xi)胞底(di)部（與(yu)主樹(shu)突(tu)相對(dui)方(fang)向）發出，細(xi)長，離(li)開胞(bao)體不(bu)遠(yuan)便形(xing)成(cheng)有髓神(shen)經纖維，向內經顆(ke)粒層(ceng)離開皮(pi)質(zhi)進入(ru)白質(zhi)，組(zu)成(cheng)小(xiao)腦(nao)皮質的傳(chuan)出纖維，終止於(yu)小(xiao)腦(nao)內部的神(shen)經核團(tuan)。壹個(ge)浦肯野細(xi)胞的軸(zhou)突(tu)約形成500個(ge)終末(mo)膨(peng)大，約與(yu)小(xiao)腦(nao)深部核團(tuan)的35個(ge)神經元(yuan)形成(cheng)突(tu)觸(chu)。心(xin)臟(zang)浦肯野細(xi)胞常常平行排(pai)列，幾(ji)個(ge)細(xi)胞互(hu)相以漿(jiang)膜連(lian)接排(pai)成壹個(ge)小(xiao)束，小(xiao)束外包繞(rao)著(zhe)基底(di)膜。細(xi)胞內(nei)含肌原纖維很少(shao)，胞漿(jiang)區內充滿(man)糖原(yuan)顆粒、線粒體和肌漿網(wang)，細(xi)胞內(nei)電(dian)阻(zu)低(di)，只有心(xin)室(shi)細(xi)胞的1/3。浦(pu)肯野細(xi)胞內(nei)無橫管系統，但(dan)膜電(dian)容(rong)比(bi)收縮細(xi)胞大(da)，可能是由於(yu)其(qi)閏(run)盤結構(gou)廣泛而(er)復雜(za)，提供了較大的表面積的緣(yuan)故。浦肯野細(xi)胞閏(run)盤的主要(yao)成(cheng)分是縫隙(xi)連(lian)接，粒(li)著(zhe)膜占(zhan)的比(bi)例很少(shao)，這些可能是構(gou)成浦(pu)肯野細(xi)胞傳(chuan)導快的形(xing)態學基礎(chu)。
方(fang)法簡介(jie)：

公(gong)司實驗室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)浦肯野采(cai)用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)消化(hua)法結合(he)神(shen)經元(yuan)專用培(pei)養(yang)基、化(hua)學試劑抑(yi)制(zhi)法篩選制備(bei)而(er)來，細(xi)胞總量(liang)約為5×105cells/瓶
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實驗室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)浦肯野經Neph3免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度(du)可達90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌、酵母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司所有產品(pin)僅供(gong)科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學實驗外(wai)的使(shi)用！

包被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養(yang)基 含(han)脂(zhi)質濃(nong)縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每(mei)2-3天換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態 神(shen)經元(yuan)細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性 不(bu)增(zeng)殖(zhi)；不傳(chuan)代

消化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準備(bei)無菌的培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液管、離(li)心(xin)管、手術器械等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓滅菌或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑準備(bei)：配(pei)制或(huo)購買合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其(qi)無菌且(qie)在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選擇合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並(bing)進行(xing)相應的麻醉(zui)或(huo)處死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余的脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出的組(zu)織(zhi)用預(yu)冷的無菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去除血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便後續消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入含有適(shi)量(liang)消化(hua)酶的離(li)心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時間。期(qi)間可輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使(shi)消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終止消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分被消化(hua)成單細(xi)胞懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基終止消化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩過濾細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎片，然後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適(shi)當的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收(shou)集細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天用倒(dao)置顯微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞的形(xing)態、生長狀態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化(hua)情(qing)況，如(ru)發現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異常，及(ji)時采(cai)取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行(xing)計(ji)數和活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了解細(xi)胞的生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避免長時間暴露(lu)於(yu)室溫或(huo)非營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用無菌 PBS 或(huo)生理鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇消化(hua)酶，避(bi)免過度(du)消化(hua)導致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時間需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分鐘(zhong)），可通過顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生長(chang)因子(zi)的培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻繁更換培(pei)養(yang)基品(pin)牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁能力較弱，可能需(xu)要(yao)包被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代時密度(du)建(jian)議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會導致接觸(chu)抑制和分化(hua)。

三、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無菌操作

- 全(quan)程在超凈(jing)臺(tai)操作，使用壹次(ci)性耗(hao)材(cai)，避免交叉(cha)汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可能影響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及(ji)時丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞形(xing)態、密度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時更換培(pei)養(yang)基（通常每 2-3 天換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常形態（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片增多）可能提示汙(wu)染或(huo)營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存(cun)早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫後液氮(dan)保存(cun)。