【概要(yao)描述】小(xiao)鼠三叉(cha)神經星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞公司正在出(chu)售的產(chan)品(pin)：SK-N-DZ人成(cheng)神(shen)經瘤細(xi)胞TPC-1-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人乳(ru)頭(tou)瘤(liu)甲狀腺細胞(bao)MDA-MB-468-Luc熒(ying)光酶標(biao)記(ji)的人乳(ru)腺癌細胞(bao)HCC1806-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人乳(ru)腺鱗(lin)狀癌細胞(bao)SW1353-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人軟(ruan)骨肉瘤細胞ACHN-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人腎(shen)細胞(bao)KYSE-150-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人食管鱗癌細胞(bao)AGS-Luc熒光酶標(biao)記(ji)的人胃腺(xian)癌細胞(bao)BXPC

小(xiao)鼠三叉(cha)神經星形(xing)膠(jiao)質(zhi)分(fen)離(li)自(zi)三叉(cha)神經組織(zhi)；三叉(cha)神經為最(zui)粗(cu)大的混合性腦神(shen)經，含(han)壹(yi)般(ban)軀體(ti)感覺(jiao)和(he)特殊內(nei)臟(zang)運(yun)動兩種(zhong)纖維。其(qi)特殊內(nei)臟(zang)運(yun)動纖維起(qi)於(yu)腦橋(qiao)中(zhong)段的三叉(cha)神經運動核，纖維組(zu)成(cheng)三叉(cha)神經運動根，由(you)腦橋(qiao)基(ji)底部(bu)與腦橋(qiao)臂(bi)交(jiao)界處(chu)出(chu)腦，位(wei)於(yu)感覺(jiao)根下內(nei)側(ce)，最(zui)後進入(ru)三叉(cha)神經第(di)3支下頜(he)神(shen)經中，經卵(luan)圓孔(kong)出(chu)顱，隨(sui)下頜(he)神(shen)經分(fen)支(zhi)分(fen)布於(yu)咀(ju)嚼肌(ji)等。運動根內(nei)還(hai)含(han)有三叉(cha)神經中腦核(he)有(you)關的纖維，主(zhu)要(yao)傳(chuan)導咀(ju)嚼肌(ji)的本體(ti)感覺(jiao)。三叉(cha)神經內(nei)以(yi)軀體感覺(jiao)神經纖維為主，這(zhe)些纖維的細胞(bao)體(ti)位於(yu)三叉(cha)神經節（半月節）內(nei)，該神經節位(wei)於(yu)顱中窩(wo)顴骨巖部(bu)的前(qian)面三叉(cha)神經壓(ya)跡(ji)處，為硬腦膜(mo)形(xing)成(cheng)的美(mei)克爾腔包(bao)裹(guo)。神經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞是神經組織(zhi)中(zhong)除(chu)神經元以(yi)外(wai)的另(ling)壹(yi)大(da)類(lei)細(xi)胞(bao)，也有突(tu)起(qi)，但(dan)無樹突(tu)和(he)軸突(tu)之分(fen)，廣(guang)泛(fan)分(fen)布於(yu)中(zhong)樞和(he)周圍(wei)神經系(xi)統(tong)。在哺乳(ru)類(lei)動物(wu)中，神(shen)經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞與神經元的細胞(bao)數(shu)量(liang)比例約(yue)為10：1。在中樞神(shen)經系(xi)統(tong)（CNS）中的神經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞主要(yao)有星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞、少(shao)突膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞（與前(qian)者合稱(cheng)為大膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞）和(he)小(xiao)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞等。傳(chuan)統(tong)認為膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞屬(shu)於(yu)結(jie)締組(zu)織(zhi)，其(qi)作用(yong)僅(jin)是連(lian)接(jie)和(he)支持(chi)各種(zhong)神經成(cheng)分(fen)，其(qi)實神(shen)經膠(jiao)質(zhi)還(hai)起(qi)著(zhe)分(fen)配營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)、參(can)與(yu)修(xiu)復(fu)和(he)吞噬(shi)的作用(yong)，在形(xing)態(tai)、化學特征(zheng)和(he)胚胎起(qi)源(yuan)上都(dou)不同(tong)於(yu)普(pu)通結締組織(zhi)。星形(xing)膠(jiao)質(zhi)前(qian)體細(xi)胞主(zhu)要(yao)表(biao)達(da)Vimentin，而(er)成(cheng)熟(shu)之後(hou)表(biao)達(da)Vimentin和(he)膠(jiao)質(zhi)纖維酸(suan)性蛋白(bai)（GFAP），故GFAP被(bei)認為是星形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞成(cheng)熟(shu)的標誌物(wu)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司實(shi)驗室分(fen)離(li)的小(xiao)鼠三叉(cha)神經星形(xing)膠(jiao)質(zhi)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶消化法結(jie)合差(cha)速貼(tie)壁(bi)法篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×105cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測：

公司實(shi)驗室分(fen)離(li)的小(xiao)鼠三叉(cha)神經星形(xing)膠(jiao)質(zhi)經GFAP免疫(yi)熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵母和(he)真菌(jun)等。

本公司所(suo)有產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不做其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的使(shi)用(yong)！

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生長特性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 梭(suo)形、多角形(xing)

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)2-3代(dai)左(zuo)右(you)

消化液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實驗器材準備：準備無菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心(xin)管、手(shou)術器械(xie)等，並(bing)進行(xing)高壓(ya)滅菌(jun)或其(qi)他合適(shi)的消毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購(gou)買合適(shi)的培養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試劑，確(que)保(bao)其無菌(jun)且在(zai)有效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗動物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準備：根據實(shi)驗需求(qiu)，選(xuan)擇合適(shi)的動物(wu)並(bing)進行(xing)相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或處(chu)死(si)，獲取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有的組織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中獲取組(zu)織(zhi)。

取材與處理

1. 取材：在無菌(jun)條件(jian)下，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余(yu)的脂肪、結締組(zu)織(zhi)等非目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便後續消(xiao)化。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪碎的組織(zhi)塊(kuai)放入含(han)有適量(liang)消化酶的離心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使(shi)消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當組織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液或小(xiao)細胞(bao)團時(shi)，加入含(han)血(xue)清(qing)的培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化的組織(zhi)碎(sui)片，然後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當的轉速離(li)心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞觀察(cha)與檢測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞的形態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度等，記錄細(xi)胞(bao)的變化情況，如發(fa)現細胞汙染或異(yi)常，及時(shi)采取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時，可采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測，以(yi)了解細胞的生長情(qing)況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快速操作

- 組織(zhi)取(qu)材後需立(li)即(ji)處理，避免(mian)長時(shi)間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養(yang)環境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或生理鹽水沖洗組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶，避免過(guo)度消化導致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時間需嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可通過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定生長因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需添加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包被培(pei)養皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗材，避免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可添加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態(tai)監控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及培(pei)養基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更換培養基(ji)（通(tong)常每 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用(yong)凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存。