【概要描(miao)述】小(xiao)鼠(shu)視(shi)網(wang)膜微血管內(nei)皮細胞公司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：OVTOKO卵巢癌(ai)BDCM白血病(bing)C1498白(bai)血病(bing)C8166白(bai)血病(bing)CCRF-CEM白(bai)血病(bing)HEL 92.1.7白(bai)血病(bing)HL-60白(bai)血病(bing)HL-60 Clone 15白(bai)血病(bing)Jurkat白(bai)血病(bing)Jurkat, Clone E6-1白(bai)血病(bing)

本公司所有(you)產品僅供(gong)科(ke)學實驗(yan)，不做(zuo)其他科(ke)學實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

小鼠(shu)視(shi)網(wang)膜微血管內(nei)皮分(fen)離自視(shi)網(wang)膜組織(zhi)；視(shi)網(wang)膜居(ju)於(yu)眼球(qiu)壁(bi)的(de)內層，是壹層透(tou)明的(de)薄(bo)膜。視(shi)網(wang)膜由色素(su)上(shang)皮(pi)層和視(shi)網(wang)膜感(gan)覺層組成，兩(liang)層間(jian)在(zai)病(bing)理(li)情(qing)況(kuang)下可分(fen)開(kai)，稱為視(shi)網(wang)膜脫離(li)。色(se)素(su)上(shang)皮(pi)層與(yu)脈(mai)絡(luo)膜(mo)緊密(mi)相(xiang)連，由(you)色(se)素(su)上(shang)皮(pi)細(xi)胞組成，它(ta)們(men)具有(you)支(zhi)持(chi)和營(ying)養(yang)光(guang)感(gan)受(shou)器細(xi)胞、遮光(guang)、散(san)熱(re)以(yi)及(ji)再生(sheng)和修(xiu)復(fu)等作(zuo)用(yong)。組織(zhi)學上視(shi)網(wang)膜分(fen)為10層，由外(wai)向(xiang)內分(fen)別為：色素(su)上(shang)皮(pi)層、視(shi)錐(zhui)、視(shi)桿(gan)細胞層、外(wai)界膜(mo)、外(wai)顆粒(li)層、外(wai)叢(cong)狀(zhuang)層、內顆粒(li)層、內叢(cong)狀(zhuang)層、神經節(jie)細(xi)胞層、神經纖維層、內界膜(mo)。視(shi)網(wang)膜內層為襯於(yu)血管膜(mo)內面(mian)的(de)壹層薄(bo)膜，有(you)感(gan)光(guang)作(zuo)用(yong)；後(hou)部鼻(bi)側有(you)壹視(shi)神(shen)經乳(ru)頭(tou)。視(shi)網(wang)膜上的(de)感(gan)覺層是由三個神經元(yuan)組成。神(shen)經元(yuan)是(shi)視(shi)細(xi)胞層，專司感(gan)光(guang)，它(ta)包(bao)括(kuo)錐(zhui)細(xi)胞和桿(gan)細(xi)胞。視(shi)桿(gan)細胞主(zhu)要(yao)在(zai)離(li)中心(xin)凹較(jiao)遠(yuan)的(de)視(shi)網(wang)膜上，而視(shi)錐(zhui)細胞則(ze)在中心(xin)凹處(chu)最(zui)多。第(di)二層叫雙節(jie)細(xi)胞，約有(you)10到(dao)數(shu)百個視(shi)細(xi)胞通(tong)過雙節(jie)細(xi)胞與(yu)壹個神經節(jie)細(xi)胞相(xiang)聯(lian)系，負責(ze)聯(lian)絡(luo)作(zuo)用(yong)。第三(san)層叫節(jie)細(xi)胞層，專管傳(chuan)導。視(shi)網(wang)膜是壹層菲薄(bo)的(de)但又(you)非常復(fu)雜(za)的(de)結構，它(ta)貼於(yu)眼球(qiu)的(de)後(hou)壁部(bu)，傳(chuan)遞(di)來自視(shi)網(wang)膜感(gan)受(shou)器沖(chong)動的(de)神經(jing)纖維跨(kua)越視(shi)網(wang)膜表(biao)面(mian)，經由視(shi)神(shen)經到達(da)出(chu)口。視(shi)網(wang)膜的(de)分(fen)辨(bian)力是(shi)不均(jun)勻(yun)的(de)，在黃斑(ban)區，其分(fen)辨(bian)能(neng)力強(qiang)。它(ta)是組成血管腔(qiang)面(mian)單(dan)層扁平(ping)上皮樣(yang)細(xi)胞，它(ta)所產生(sheng)和分(fen)泌的(de)生(sheng)物(wu)活性物(wu)質對維(wei)持(chi)血管張(zhang)力、調(tiao)節(jie)血壓(ya)、抗血栓形(xing)成(cheng)等有(you)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)，在視(shi)網(wang)膜血管疾(ji)病的(de)發病機制(zhi)中有(you)重(zhong)要(yao)病理生(sheng)理(li)學意義(yi)。由於(yu)從不同(tong)的(de)組織(zhi)和器(qi)官(guan)獲得的(de)內皮(pi)細胞具有(you)不同(tong)的(de)特性，在(zai)腦和視(shi)網(wang)膜中，這(zhe)些內(nei)皮(pi)細胞具有(you)內(nei)屏障(zhang)的(de)功(gong)能，在(zai)調(tiao)節(jie)血管生(sheng)理(li)狀(zhuang)態(tai)，釋放血管活性物(wu)質以(yi)及(ji)新生(sheng)血管的(de)形(xing)成(cheng)中發揮著重要作(zuo)用(yong)，體外(wai)分(fen)離培(pei)養(yang)RCEC對研究(jiu)視(shi)網(wang)膜血管性(xing)疾病發生(sheng)發展的(de)病理(li)生(sheng)理(li)機制(zhi)以(yi)及(ji)疾病的(de)早期(qi)防治(zhi)具有(you)重(zhong)要(yao)臨床意義(yi)。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)小鼠(shu)視(shi)網(wang)膜微血管內(nei)皮采用(yong)膠原(yuan)酶-中性(xing)dan白酶混合消(xiao)化法(fa)結合密(mi)度(du)梯(ti)度(du)離(li)心法(fa)、最(zui)後(hou)通(tong)過內皮細胞專用(yong)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞總(zong)量約為5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)小鼠(shu)視(shi)網(wang)膜微血管內(nei)皮經CD31免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵母和真菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細胞形(xing)態(tai) 內皮細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特性 可傳(chuan)2-3代

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心管、手(shou)術器械等，並進(jin)行高壓滅菌或(huo)其他合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血清、雙抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保其無菌且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組織(zhi)來源準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇合適(shi)的(de)動物(wu)並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中獲(huo)取組織(zhi)。

取材與(yu)處(chu)理

1. 取材：在(zai)無菌條件(jian)下，迅(xun)速取(qu)出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡量(liang)減少對組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締組織(zhi)等非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無菌PBS沖洗(xi)數次(ci)，以(yi)去除血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化酶的(de)離心(xin)管中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床或(huo)培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心(xin)管，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當組織(zhi)塊大(da)部分(fen)被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細胞懸液(ye)或(huo)小細(xi)胞團時(shi)，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化。

3. 過濾與(yu)離心：用(yong)細胞篩(shai)過(guo)濾細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速離(li)心，收集細胞沈(chen)澱。

細胞觀察(cha)與(yu)檢測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞計數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方(fang)法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計數和活力檢(jian)測，以(yi)了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與(yu)分(fen)離

1. 快速操作(zuo)

- 組織(zhi)取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗(xi)組織(zhi)，去除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根據(ju)組織(zhi)類(lei)型選擇消(xiao)化酶，避免(mian)過度(du)消(xiao)化導(dao)致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件優化

1. 培(pei)養(yang)基選擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或(huo)特定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養(yang)基品牌或(huo)批次(ci)，減少細胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞貼壁能(neng)力較(jiao)弱，可能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操作(zuo)

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中可添加雙抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能影(ying)響(xiang)細胞活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基顏色，及(ji)時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓、碎片增(zeng)多）可能提(ti)示(shi)汙染(ran)或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原(yuan)代細胞分(fen)裂次(ci)數(shu)有(you)限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代次(ci)細(xi)胞。

- 凍存液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度(du)降(jiang)溫後(hou)液氮(dan)保存(cun)。