【概(gai)要(yao)描述(shu)】小(xiao)鼠小梁(liang)網(wang)細(xi)胞公(gong)司(si)正在出售的產(chan)品(pin)：PA-1卵巢癌(ai)Loucy白血(xue)病(bing)MEG-01白血(xue)病(bing)M-NFS-60白血(xue)病(bing)MOLM-13白血(xue)病(bing)MOLM-16白血(xue)病(bing)MOLT-4白血(xue)病(bing)MT-2白血(xue)病(bing)MV-4-11白血(xue)病(bing)NB-4白血(xue)病(bing)

小鼠小(xiao)梁(liang)網(wang)分離自(zi)眼球組織；小(xiao)梁(liang)網(wang)由角膜(mo)基質(zhi)纖(xian)維(wei)、後(hou)界(jie)膜和角(jiao)膜(mo)內(nei)皮向後(hou)擴(kuo)展而(er)成，覆蓋在鞏膜靜(jing)脈竇(dou)的內(nei)側(ce)。小(xiao)梁(liang)網(wang)細(xi)胞在(zai)眼內壓(ya)調(tiao)節(jie)中起(qi)著關(guan)鍵作(zuo)用(yong)；小梁(liang)網(wang)細(xi)胞內(nei)有特定的神經遞(di)質(zhi)和(he)神經肽受體(ti)，其(qi)中包括腎(shen)上(shang)腺(xian)素(su)、乙(yi)酰(xian)dan堿和神經肽Y。青(qing)光(guang)眼是由於眼內壓(ya)力(li)升高而(er)造(zao)成的壹(yi)種不(bu)可(ke)逆(ni)致(zhi)盲眼病，小(xiao)梁(liang)網(wang)細(xi)胞的體(ti)外(wai)培(pei)養是青(qing)光(guang)眼病因學研究的重(zhong)要(yao)手段之壹(yi)。在小(xiao)梁(liang)網(wang)細(xi)胞中，壹(yi)長串的血(xue)管(guan)活性(xing)多(duo)肽和(he)生(sheng)長因子(zi)能夠(gou)觸(chu)發細(xi)胞內(nei)信號傳(chuan)導機制(zhi)，小梁(liang)網(wang)細(xi)胞可(ke)合(he)成不同(tong)類(lei)型(xing)的細(xi)胞外(wai)基質(zhi)蛋(dan)白以(yi)及(ji)金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶。形(xing)態(tai)學觀察(cha)可(ke)見(jian)，剛(gang)從(cong)組織塊長出的原(yuan)代細(xi)胞，形(xing)態(tai)各異，多(duo)數(shu)呈星(xing)狀或(huo)不規(gui)則形(xing)。細(xi)胞有(you)胞突，核橢(tuo)圓形(xing)，胞(bao)體肥大，胞(bao)漿(jiang)豐富，且可(ke)見(jian)吞(tun)噬(shi)顆粒。隨著細(xi)胞的增(zeng)生(sheng)及相互融(rong)合(he)為(wei)單(dan)層(ceng)，細(xi)胞的形(xing)態(tai)趨(qu)於(yu)壹(yi)致。胞(bao)漿的色(se)素(su)顆粒及胞(bao)突消失(shi)，排(pai)列緊(jin)密呈(cheng)類(lei)似(si)上(shang)皮細(xi)胞的扁(bian)橢(tuo)圓(yuan)形(xing)或(huo)不規(gui)則形(xing)。胞(bao)體透亮，包膜清晰(xi)。
方法簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離的小(xiao)鼠(shu)小(xiao)梁(liang)網(wang)采(cai)用組織貼(tie)塊法(fa)制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離的小(xiao)鼠(shu)小(xiao)梁(liang)網(wang)經NSE（神經元(yuan)特異(yi)性(xing)烯(xi)醇化(hua)酶）免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅供科學實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他(ta)科學實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

包被(bei)條件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS、生(sheng)長添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特性(xing) 貼壁

細(xi)胞形(xing)態(tai) 梭(suo)形(xing)、多(duo)角形(xing)

傳(chuan)代特性(xing) 可(ke)傳(chuan)1-2代

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養條(tiao)件 氣相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌的培(pei)養(yang)皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器械等，並(bing)進行高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購買合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌且在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或(huo)組織來(lai)源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物並(bing)進行相應(ying)的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織；或(huo)從已有(you)的組織樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取組織。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出目(mu)標組織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織等(deng)非目(mu)的組織。

2. 清洗(xi)：將取出的組織用(yong)預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組織剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細(xi)胞分離

1. 消化：將剪(jian)碎的組織塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或培養箱中消(xiao)化壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終止消化(hua)：當(dang)組織塊大部分被(bei)消化(hua)成單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清的培(pei)養(yang)基終止消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩(shai)過濾細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組織碎片，然後(hou)將濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收集細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每天(tian)用倒(dao)置顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞的形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞的變化(hua)情(qing)況，如發(fa)現細(xi)胞汙染(ran)或異(yi)常，及時采(cai)取相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與(yu)活力(li)檢測(ce)：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染(ran)色等(deng)方法對(dui)細(xi)胞進行計數(shu)和活(huo)力(li)檢測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞的生(sheng)長情況和健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長時間暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或(huo)非營(ying)養環(huan)境。

- 使用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避免(mian)過度消(xiao)化(hua)導致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞解(jie)離狀(zhuang)態。

二、培養條件優化

1. 培養基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或特定生(sheng)長因子(zi)的培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞需(xu)添加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換培(pei)養(yang)基品牌(pai)或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞適(shi)應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超(chao)凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基中可(ke)添加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞。

四、狀態(tai)監控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度(du)及(ji)培(pei)養基顏色(se)，及時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞變圓(yuan)、碎片增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙染(ran)或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分裂次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用凍存(cun)培(pei)養(yang)基），梯度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保(bao)存(cun)。