【概要描(miao)述】小(xiao)鼠視網膜色素(su)上皮細胞(bao)公司(si)正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：RKN卵(luan)巢(chao)癌(ai)PF-382白血(xue)病RBL-2H3白血(xue)病THP-1白血(xue)病ZEM2S斑馬(ma)魚(yu)胚胎細(xi)胞(bao)ZF4斑馬(ma)魚(yu)細胞(bao)5-8F (STR)鼻咽(yan)癌細(xi)胞(bao)6-10b (STR)鼻咽(yan)癌細(xi)胞(bao)5-8F/LUC (STR)鼻咽(yan)癌細(xi)胞(bao)Tb1Lu蝙(bian)蝠(fu)肺(fei)細胞(bao)

小(xiao)鼠視網膜色素(su)上皮分(fen)離(li)自視網膜組(zu)織(zhi)；視網膜居於眼球壁的(de)內(nei)層，是(shi)壹層透明(ming)的(de)薄(bo)膜。視網膜由(you)色素(su)上皮層和(he)視網膜感(gan)覺層組(zu)成(cheng)，兩(liang)層(ceng)間在(zai)病理(li)情況下(xia)可分(fen)開(kai)，稱為視網膜脫(tuo)離(li)。色素(su)上皮層與(yu)脈絡(luo)膜緊(jin)密相(xiang)連(lian)，由(you)色素(su)上皮細胞(bao)組成(cheng)，它(ta)們(men)具(ju)有(you)支(zhi)持和(he)營養光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)、遮光(guang)、散(san)熱以(yi)及再(zai)生和(he)修復等(deng)作用。組(zu)織學(xue)上(shang)視網膜分(fen)為10層(ceng)，由外向(xiang)內(nei)分(fen)別(bie)為：色素(su)上皮層、視錐、視桿細(xi)胞(bao)層、外(wai)界膜、外(wai)顆粒層、外叢狀層(ceng)、內(nei)顆粒層、內(nei)叢狀層(ceng)、神經(jing)節(jie)細胞(bao)層、神經(jing)纖維(wei)層、內(nei)界膜。視網膜內(nei)層為(wei)襯於(yu)血(xue)管膜內(nei)面(mian)的(de)壹層薄(bo)膜，有(you)感(gan)光(guang)作(zuo)用；後(hou)部鼻側(ce)有(you)壹視神經(jing)乳(ru)頭(tou)。視網膜上(shang)的(de)感(gan)覺層是(shi)由(you)三個神經(jing)元(yuan)組成。神經(jing)元(yuan)是視細胞(bao)層，專(zhuan)司感(gan)光(guang)，它(ta)包(bao)括(kuo)錐細胞(bao)和(he)桿細(xi)胞(bao)。視桿細(xi)胞(bao)主要在(zai)離(li)中心凹較遠(yuan)的(de)視網膜上(shang)，而(er)視錐細胞(bao)則(ze)在(zai)中心凹處(chu)最多(duo)。第(di)二(er)層(ceng)叫(jiao)雙(shuang)節細胞(bao)，約有(you)10到數(shu)百(bai)個(ge)視細胞(bao)通過(guo)雙節(jie)細(xi)胞(bao)與(yu)壹個神經(jing)節(jie)細胞(bao)相聯(lian)系，負(fu)責(ze)聯絡(luo)作用。第(di)三層叫(jiao)節(jie)細胞(bao)層，專(zhuan)管傳(chuan)導(dao)。視網膜是(shi)壹層菲薄(bo)的(de)但(dan)又非(fei)常復雜(za)的(de)結構，它(ta)貼(tie)於(yu)眼球的(de)後壁部(bu)，傳(chuan)遞(di)來自視網膜感(gan)受(shou)器(qi)沖(chong)動的(de)神經(jing)纖維(wei)跨(kua)越(yue)視網膜表面(mian)，經(jing)由視神經(jing)到達出(chu)口。視網膜的(de)分(fen)辨(bian)力(li)是(shi)不(bu)均(jun)勻(yun)的(de)，在(zai)黃(huang)斑區(qu)，其(qi)分(fen)辨(bian)能(neng)力(li)強(qiang)。視網膜色素(su)上皮（RPE）位於(yu)脈絡(luo)膜和(he)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)之間(jian)，是(shi)視網膜下(xia)腔和(he)脈絡(luo)膜血(xue)管之間的(de)離(li)子、水、營養物質(zhi)和(he)代(dai)謝終(zhong)產(chan)物(wu)轉運通道；主要是(shi)由(you)單(dan)層色素(su)上皮細胞(bao)所(suo)構成，排(pai)列十(shi)分(fen)規則(ze)。視網膜色素(su)上皮參與(yu)shi黃(huang)醇循(xun)環，吞噬(shi)脫落(luo)的(de)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)以(yi)維(wei)持光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)興(xing)奮性(xing)，並分(fen)泌(mi)多(duo)種生長因(yin)子，幫助維持脈絡(luo)膜血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞(bao)和(he)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)的(de)結構完整(zheng)性(xing)。細胞(bao)呈多(duo)角形(xing)，細(xi)胞(bao)分(fen)為三部分(fen)，即頂部(bu)、體部(bu)和(he)基底部(bu)。視網膜色素(su)上皮細胞(bao)無再(zai)生能(neng)力(li)，細(xi)胞(bao)死(si)亡後(hou)不(bu)被替(ti)換(huan)，而(er)是(shi)鄰(lin)近的(de)細胞(bao)向側(ce)面(mian)滑(hua)動，以(yi)死(si)亡細(xi)胞(bao)遺留(liu)下(xia)來的(de)空間。視網膜色素(su)上皮位於(yu)脈絡(luo)膜和(he)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)之間(jian)，是(shi)視網膜下(xia)腔和(he)脈絡(luo)膜血(xue)管之間的(de)離(li)子、水、營養物質(zhi)和(he)代(dai)謝終(zhong)產(chan)物(wu)轉運通道。視網膜色素(su)上皮參與(yu)shi黃(huang)醇循(xun)環，吞噬(shi)脫落(luo)的(de)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)外節(jie)以(yi)維(wei)持光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)興(xing)奮性(xing)，並分(fen)泌(mi)多(duo)種生長因(yin)子，幫助維持脈絡(luo)膜血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞(bao)和(he)光(guang)感(gan)受(shou)器(qi)細(xi)胞(bao)的(de)結構完整(zheng)性(xing)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)小(xiao)鼠視網膜色素(su)上皮采用yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合消化法(fa)結合(he)差速(su)貼(tie)壁法(fa)，並通(tong)過(guo)上(shang)皮細胞(bao)專用培(pei)養基培(pei)養篩選制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)小(xiao)鼠視網膜色素(su)上皮經PCK免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公司(si)所(suo)有產(chan)品僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其他科學(xue)實驗(yan)外的(de)使用！

包(bao)被條件(jian) 鼠尾(wei)膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹次

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 上(shang)皮細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可傳(chuan)1-2代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的(de)培養皿、培(pei)養瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心管、手術器械等，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他合(he)適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制或(huo)購(gou)買(mai)合適的(de)培養基、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛血(xue)清、雙抗等試劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有效期內(nei)。

3. 實驗(yan)動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲取所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲(huo)取組織。

取材與(yu)處理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標(biao)組織(zhi)，盡量減(jian)少對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去除多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出的(de)組織(zhi)用預冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去除血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪碎的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含(han)有(you)適量消化酶的(de)離(li)心管中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱中消化壹段(duan)時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管，使消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分(fen)被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清的(de)培養基終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除未(wei)消化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當的(de)轉速(su)離(li)心，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天用倒(dao)置顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生長狀態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情況，如發現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及時采取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時(shi)，可采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色等(deng)方法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細胞(bao)的(de)生長情況和(he)健康狀態。

壹、取材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取材後需(xu)立(li)即處理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間暴露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養環境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類型(xing)選擇(ze)消化酶，避免(mian)過度(du)消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損傷。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養條件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或(huo)特(te)定生(sheng)長因(yin)子的(de)培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培養基品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次，減(jian)少細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包(bao)被培(pei)養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合會導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹次性(xing)耗(hao)材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用可能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態、密度(du)及培養基顏(yan)色，及時更換(huan)培養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次數(shu)有(you)限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍存早(zao)期代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使用 DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用凍存培養基），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。