【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠(shu)海馬神經元(yuan)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：OV7卵(luan)巢癌(ai)sh-sy5y轉染(ran)突(tu)變(bian)型人神經母細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)sh-sy5y轉染(ran)野(ye)生(sheng)型人神經母細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SIHa人子宮(gong)頸鱗癌細(xi)胞(bao)SJSA-1人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-BR-3人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao)SK-BR-3+LUC人乳腺(xian)癌細(xi)胞(bao)SK-HEP-1人肝腹(fu)水腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)SK-LU-1人低(di)分化(hua)肺腺(xian)癌細(xi)胞(bao)SK-MEL-1人皮(pi)膚(fu)黑色(se)瘤(liu)細(xi)胞(bao)

小鼠(shu)海馬神經元(yuan)分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又(you)名海馬回(hui)、海馬區(qu)、大(da)腦(nao)海馬，海馬體主(zhu)要(yao)負責(ze)記憶和學(xue)習(xi)。海馬神經元(yuan)細(xi)胞(bao)是(shi)海馬區(qu)的(de)主(zhu)要(yao)細(xi)胞(bao)組(zu)成(cheng)，主(zhu)要(yao)功(gong)能是(shi)參(can)與近期記憶、情(qing)緒及內臟(zang)功能調(tiao)節(jie)、是(shi)老(lao)年(nian)性(xing)癡(chi)呆、癲癇(xian)等疾病的(de)主(zhu)要(yao)病竈(zao)之(zhi)壹(yi)。海馬屬於大(da)腦(nao)的(de)邊緣(yuan)系(xi)統，在(zai)學(xue)習(xi)、記憶、情(qing)緒反應(ying)及神經系(xi)統疾病的(de)病理(li)生(sheng)理(li)變(bian)化等方面(mian)有(you)重要(yao)作用，而(er)且海馬組織(zhi)是(shi)中(zhong)樞神經系(xi)統內主(zhu)要(yao)的(de)神經幹細(xi)胞(bao)聚集(ji)區(qu)，具(ju)有(you)高(gao)度序化(hua)板(ban)層(ceng)結構(gou)和(he)神經元(yuan)相(xiang)對獨立(li)分布(bu)的(de)特點(dian)，境(jing)界相(xiang)對清晰(xi)，便於(yu)取(qu)材(cai)，因(yin)此(ci)，海馬神經元(yuan)體(ti)外(wai)培養模(mo)型(xing)被(bei)廣(guang)大(da)基(ji)礎醫(yi)學和(he)臨(lin)床醫(yi)學研(yan)究(jiu)者當(dang)做理(li)想(xiang)的(de)實驗模(mo)型(xing)。海馬神經元(yuan)細(xi)胞(bao)培養是研究神(shen)經細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)特性(xing)和(he)外(wai)源幹(gan)擾因(yin)素作用(細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi))的(de)有(you)效細(xi)胞(bao)模(mo)型(xing)，其(qi)在(zai)神(shen)經生物(wu)學(xue)，發(fa)育(yu)生物(wu)學體外(wai)實驗研究中(zhong)已(yi)被(bei)廣(guang)泛應(ying)用。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗室(shi)分離的(de)小鼠(shu)海馬神經元(yuan)采(cai)用yi蛋白酶(mei)消(xiao)化(hua)法(fa)、神(shen)經元(yuan)專用培養基(ji)培養篩選結合(he)化(hua)學(xue)試劑(ji)抑制法制備而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗室(shi)分離的(de)小鼠(shu)海馬神經元(yuan)經β-Tubulin免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純度可(ke)達90%以上，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真菌等。

本(ben)公(gong)司(si)所有(you)產品(pin)僅供(gong)科(ke)學實驗，不做其他(ta)科(ke)學實驗外(wai)的(de)使用！

包被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培養基(ji) 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率 每2-3天換液壹(yi)次(ci)

生長特性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態(tai) 神經元(yuan)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 屬於終末分化(hua)細(xi)胞(bao)；屬(shu)於(yu)不(bu)增殖細(xi)胞(bao)群

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心管(guan)、手(shou)術(shu)器械(xie)等，並進(jin)行高(gao)壓滅菌或其他(ta)合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在(zai)有(you)效期內。

3. 實驗動物或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗需求，選擇合(he)適(shi)的(de)動物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組織(zhi)；或從已(yi)有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織(zhi)的(de)損傷，並(bing)去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出的(de)組織(zhi)用預(yu)冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次(ci)，以去(qu)除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入(ru)含(han)血清的(de)培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與離心：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎片，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉速離心，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態(tai)、生長狀態(tai)、密度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況，如發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染(ran)或異常，及時采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)等方法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測(ce)，以了解細(xi)胞(bao)的(de)生長情(qing)況和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離

1. 快速操作

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或非營養環(huan)境(jing)。

- 使用無(wu)菌 PBS 或生理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型選擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培養條(tiao)件優(you)化

1. 培養基(ji)選擇

- 使用含(han)血清或特定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰島素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養基(ji)品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度建議控制在(zai) 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸抑制和分化(hua)。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺(tai)操(cao)作，使用壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長期使用可(ke)能影(ying)響細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支原體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及培養基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換培養基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片增多）可(ke)能提示(shi)汙染(ran)或營養不足。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數(shu)有(you)限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使用 DMSO+血(xue)清（或專用凍(dong)存(cun)培養基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。