【概要(yao)描(miao)述】大(da)鼠骨外膜(mo)細胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：COLO 792黑(hei)瘤兔膀(pang)胱(guang)間(jian)質細胞兔甲狀腺(xian)上(shang)皮細胞兔甲狀腺(xian)成纖維(wei)細胞兔胰(yi)腺(xian)星(xing)狀(zhuang)細胞兔胰(yi)島(dao)細胞兔垂(chui)體細胞兔上(shang)皮細胞兔基(ji)質(zhi)細胞兔頜下腺(xian)上(shang)皮細胞

大(da)鼠骨外膜(mo)分(fen)離自(zi)骨外膜(mo)組織；骨外膜(mo)是(shi)指成骨細胞與(yu)破骨細胞緊(jin)貼(tie)骨密質外面(mian)包(bao)著的(de)那層(ceng)膜(mo)；在骨外膜(mo)和(he)骨內膜(mo)中(zhong)含有壹種能夠(gou)生(sheng)成骨的(de)細胞，稱為成骨細胞，這種細胞具有使(shi)骨骼(ge)生長的(de)功能(neng)。在(zai)骨外膜(mo)中(zhong)還有另外(wai)壹(yi)種專門破壞(huai)骨細胞的(de)細胞，稱為破(po)骨細胞。這兩種細胞作用(yong)相(xiang)反(fan)又相(xiang)互(hu)依(yi)據。成骨細胞像(xiang)建築工人(ren)，不停(ting)地生(sheng)成新的(de)骨組織，破骨細胞則(ze)像(xiang)維修工人(ren)，不停(ting)地清(qing)除老(lao)化、死亡(wang)、破(po)碎(sui)的(de)骨結構，並(bing)且還(hai)負(fu)責(ze)拆(chai)除“違(wei)章(zhang)建築"，就是(shi)除去不需(xu)要(yao)的(de)多余(yu)的(de)骨組織，從(cong)而(er)使(shi)骨的(de)整(zheng)體結構更(geng)符(fu)合(he)生物(wu)力(li)學的(de)需要(yao)。正常(chang)情(qing)況(kuang)下，兩種細胞之(zhi)間處於(yu)動(dong)態的(de)平衡之(zhi)中，完(wan)成骨的(de)生長發育(yu)的(de)新陳(chen)代謝。骨折之(zhi)後，成骨細胞首先(xian)啟(qi)動(dong)，從(cong)而(er)促使(shi)新骨痂的(de)生成，即骨折的(de)愈合(he)。但是(shi)，股痂(jia)只(zhi)是(shi)恢(hui)復了骨的(de)連續性，往往不(bu)符(fu)合(he)生物(wu)力(li)學的(de)需要(yao)，改建塑形(xing)的(de)過(guo)程(cheng)則(ze)必須有破骨細胞的(de)參與(yu)才能完(wan)成。
方法簡介：

公(gong)司(si)實驗室分離(li)的(de)大(da)鼠骨外膜(mo)采用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)消(xiao)化法(fa)制備(bei)而(er)來，細胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗室分離(li)的(de)大(da)鼠骨外膜(mo)經Vimentin免疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純度(du)可達90%以上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學實驗外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長特(te)性 貼(tie)壁

細胞形(xing)態 成纖維(wei)細胞樣

傳代特(te)性 可傳5代左(zuo)右(you)；3代以內狀(zhuang)態

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗器材準備：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心管、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓(ya)滅菌或其他合適(shi)的(de)消毒處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配制或購(gou)買合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙抗等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其(qi)無(wu)菌且在(zai)有效期(qi)內。

3. 實驗動(dong)物或組織來源準備(bei)：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適的(de)動(dong)物並(bing)進行相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已(yi)有的(de)組織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織。

取材與(yu)處理(li)

1. 取材：在無(wu)菌條(tiao)件下，迅(xun)速取出目(mu)標組織，盡量(liang)減少對(dui)組織的(de)損傷(shang)，並(bing)去除多余(yu)的(de)脂肪、結締(di)組織等(deng)非(fei)目的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織用(yong)預冷的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去除血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組織剪成約1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後(hou)續消(xiao)化。

細胞分離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊放入含有適量(liang)消(xiao)化酶(mei)的(de)離心管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床或培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消化更(geng)均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組織塊大(da)部分(fen)被消(xiao)化成單細胞懸液或小細胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸液，去(qu)除未消化的(de)組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將濾(lv)液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集(ji)細胞沈澱。

細胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置(zhi)顯微鏡觀察(cha)細胞的(de)形(xing)態、生長狀態、密度等(deng)，記錄細胞的(de)變化情(qing)況(kuang)，如發現細胞汙染或異(yi)常(chang)，及時采取相(xiang)應措施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時，可采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法對細胞進行計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測，以了解細胞的(de)生長情況(kuang)和(he)健康狀態。

壹、取材與(yu)分離

1. 快速操(cao)作

- 組織取材後(hou)需(xu)立(li)即處理(li)，避免長時間(jian)暴露於(yu)室溫或非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或生理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組織，去除血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據(ju)組織類(lei)型選(xuan)擇消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度(du)消(xiao)化導(dao)致細胞損傷。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通過(guo)顯微鏡觀察(cha)細胞解離狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條(tiao)件優化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特(te)定(ding)生長因子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞需添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更(geng)換培養(yang)基(ji)品牌或批次，減少細胞適應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代

- 原代細胞貼(tie)壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可能需要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密度建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹次性耗(hao)材，避免交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加雙抗，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可能影響細胞活性。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原體汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需(xu)及時丟棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細胞形(xing)態、密度及培養(yang)基(ji)顏色(se)，及時更(geng)換培養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細胞變圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可能提示(shi)汙染或營養不(bu)足。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原代細胞分裂次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時凍存早期(qi)代次細胞。

- 凍存液建議使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保存。