【概(gai)要描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)骨(gu)骼肌成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公(gong)司正在出(chu)售的產品：COLO 679黑瘤兔肝(gan)卵(luan)圓(yuan)細(xi)胞(bao)兔腸(chang)微(wei)血管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔腸(chang)神經(jing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)兔腹(fu)膜(mo)間(jian)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔腸(chang)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)兔內(nei)括約肌(ji)平滑肌細(xi)胞(bao)兔腸(chang)道幹細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)兔腸(chang)粘膜(mo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔腹(fu)腔(qiang)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)骨(gu)骼肌分離(li)自四肢(zhi)肌肉(rou)組織(zhi)；骨(gu)骼肌又稱橫(heng)紋(wen)肌，肌(ji)肉(rou)中(zhong)的壹(yi)種，約占(zhan)全(quan)身重量的40%。骨(gu)骼肌纖維為(wei)長柱(zhu)形(xing)的多(duo)核細(xi)胞(bao)，肌膜(mo)的外(wai)面(mian)有(you)基(ji)膜(mo)緊(jin)密(mi)貼附(fu)。屬(shu)於橫(heng)紋(wen)肌，橫(heng)紋(wen)肌還(hai)包(bao)括心肌與(yu)內(nei)臟(zang)橫(heng)紋(wen)肌，其中骨(gu)骼肌主(zhu)要分布於四肢。每(mei)塊(kuai)肌(ji)肉(rou)都(dou)是(shi)具(ju)有(you)壹定形(xing)態、結構和功能的器(qi)官(guan)，有(you)豐富的血管(guan)、淋(lin)巴(ba)分布，在軀體神(shen)經(jing)支(zhi)配(pei)下收縮(suo)或(huo)舒(shu)張，進(jin)行(xing)隨意運動(dong)。肌肉(rou)可(ke)根(gen)據(ju)共(gong)形(xing)狀(zhuang)、大(da)小(xiao)、位置、起(qi)止點、纖維方向(xiang)和(he)作用(yong)等命名。依形(xing)態命(ming)名的如(ru)斜(xie)方(fang)肌(ji)、菱形(xing)肌、三角(jiao)肌、梨狀(zhuang)肌(ji)等。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)呈(cheng)纖(xian)維狀(zhuang)，不(bu)分支，有(you)明顯(xian)橫紋(wen)，核很(hen)多(duo)，且都(dou)位於細(xi)胞(bao)膜(mo)下方。肌(ji)細(xi)胞(bao)內(nei)有(you)許(xu)多(duo)沿細(xi)胞(bao)長軸平(ping)行(xing)排(pai)列的細(xi)絲(si)狀(zhuang)肌(ji)原(yuan)纖(xian)維(wei)。每壹肌原(yuan)纖(xian)維(wei)都有(you)相(xiang)間(jian)排列的明帶（Ⅰ帶）及(ji)暗帶(dai)（A帶）。明帶染色(se)較(jiao)淺，而暗帶(dai)染色(se)較(jiao)深。暗帶(dai)中間(jian)有(you)壹條較(jiao)明亮的線(xian)稱(cheng)H線(xian)。H線(xian)的中(zhong)部(bu)有(you)壹M線。明帶中間(jian)，有(you)壹條較(jiao)暗的線(xian)稱(cheng)為(wei)Z線(xian)。兩個Z線之(zhi)間的區(qu)段，叫(jiao)做壹個肌節(jie)。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)也稱(cheng)橫(heng)紋(wen)肌細(xi)胞(bao)，細(xi)胞(bao)呈(cheng)纖(xian)維狀(zhuang)，不(bu)分支，有(you)明顯(xian)橫紋(wen)，核很(hen)多(duo)，且都(dou)位於細(xi)胞(bao)膜(mo)下方，細(xi)胞(bao)多(duo)呈(cheng)梭(suo)行(xing)，具(ju)有(you)壹定的方(fang)向(xiang)性(xing)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的大(da)鼠(shu)骨(gu)骼肌成(cheng)纖(xian)維(wei)采用yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合(he)酶消(xiao)化(hua)後差(cha)速貼壁(bi)制備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的大(da)鼠(shu)骨(gu)骼肌成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母和真(zhen)菌等。

本公(gong)司所有(you)產品僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他科學(xue)實(shi)驗外(wai)的使(shi)用(yong)！

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代左右；3代以(yi)內(nei)狀(zhuang)態

消化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌的培養皿、培養瓶、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌或其他合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備：配(pei)制或購買(mai)合(he)適(shi)的培養基(ji)、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血清、雙(shuang)抗(kang)等試劑(ji)，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組織(zhi)來(lai)源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇合(he)適(shi)的動(dong)物並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處理

1. 取材(cai)：在無(wu)菌條件(jian)下，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗(xi)數(shu)次，以(yi)去(qu)除血液和雜質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化酶的離(li)心管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱中消化壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清的培養基(ji)終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未消化的組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速離(li)心，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長狀(zhuang)態、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力(li)檢(jian)測(ce)：在需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用臺盼藍染色(se)等方法(fa)對細(xi)胞(bao)進行(xing)計數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長情(qing)況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後需立即(ji)處(chu)理，避免(mian)長時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水沖洗組織(zhi)，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根據組織(zhi)類型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養條件(jian)優化

1. 培養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長因(yin)子的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養基(ji)品牌(pai)或批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需要(yao)包(bao)被培養皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導(dao)致(zhi)接觸抑制和分化。

三、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材(cai)，避免交叉汙染。

- 培養基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)能影(ying)響細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支原(yuan)體(ti)汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需(xu)及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及培養基(ji)顏色(se)，及時(shi)更換(huan)培養基(ji)（通常每 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示(shi)汙染或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂次數有(you)限（壹般 5-10 代），需及時(shi)凍存(cun)早期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培養基(ji)），梯度降(jiang)溫後(hou)液氮保(bao)存(cun)。