【概(gai)要(yao)描述(shu)】大(da)鼠滋養層幹(gan)細胞公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：CHSE-214鮭魚(yu)胚胎細胞(bao)小(xiao)鼠腦(nao)動脈血管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞小鼠腦(nao)血管(guan)周(zhou)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠(shu)腦(nao)膜細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠腦(nao)皮(pi)層神(shen)經元(yuan)細(xi)胞小鼠海(hai)馬神經元(yuan)細(xi)胞小鼠脊髓神(shen)經元(yuan)細(xi)胞小鼠雪(xue)旺細胞(bao)小鼠(shu)星(xing)形(xing)膠(jiao)質(zhi)細胞(bao)小鼠(shu)小(xiao)膠(jiao)質(zhi)細胞(bao)

大(da)鼠(shu)滋養層幹(gan)分離自(zi)胎盤組(zu)織(zhi)；胎盤（placenta）是(shi)哺(bu)乳動(dong)物妊(ren)娠(shen)期間(jian)由(you)胚(pei)胎的胚(pei)膜(mo)和母體子宮內(nei)膜聯(lian)合長成(cheng)的母子間交換(huan)物質(zhi)的(de)過渡(du)性器官(guan)，由(you)羊(yang)膜(mo)、葉(ye)狀絨毛膜和底(di)蛻膜(mo)構(gou)成。胎兒在子(zi)宮中發育，依靠(kao)胎盤從(cong)母體取(qu)得營養，而雙(shuang)方保(bao)持(chi)相(xiang)當(dang)的(de)獨(du)立性。胎盤還產生多種(zhong)維持(chi)妊娠(shen)的(de)激(ji)素，是(shi)壹(yi)個(ge)重要(yao)的(de)內(nei)分泌器官(guan)。有些爬行類(lei)和(he)魚類也(ye)以(yi)胎生方式(shi)繁殖後(hou)代(dai)，胚胎生長(chang)出(chu)壹(yi)些輔助(zhu)結構(gou)如卵(luan)黃囊(nang)、鰓絲(si)等(deng)與(yu)母體組織緊(jin)密(mi)結合(he)，以(yi)達(da)到母子間物質(zhi)的(de)交換(huan)，這樣(yang)的(de)結構(gou)稱假胎盤。滋養層幹(gan)細胞是(shi)胎盤組(zu)織(zhi)細胞(bao)的(de)祖細胞，與(yu)胚胎著床(chuang)和(he)胎盤的(de)形(xing)成密(mi)切(qie)相(xiang)關(guan)。胚(pei)胎著床(chuang)和(he)胎盤形(xing)成(cheng)是(shi)母體與(yu)胎兒建(jian)立聯(lian)系的(de)關(guan)鍵時(shi)期(qi)，此時(shi)期滋養層細(xi)胞(bao)增殖速度快，滋養層幹(gan)細胞自(zi)我更新和(he)分化旺盛，與(yu)多種(zhong)妊娠(shen)相(xiang)關(guan)疾(ji)病的發生、發展(zhan)及其增殖、功(gong)能(neng)調(tiao)節的失(shi)常(chang)有密(mi)切(qie)關(guan)系。在哺(bu)乳動(dong)物胚(pei)胎發育過程中，胚(pei)胎細胞(bao)次(ci)分化形(xing)成內(nei)細胞(bao)團(tuan)和(he)滋養外胚層。滋養層幹(gan)細胞是(shi)胎盤細(xi)胞(bao)的前體細(xi)胞(bao)，在胎盤發(fa)育中有重要(yao)作用(yong)。
方法(fa)簡介(jie)：

公司實(shi)驗室(shi)分離的大(da)鼠滋養層幹(gan)采用(yong)囊(nang)胚組(zu)織(zhi)貼(tie)壁(bi)法制(zhi)備而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分離的大(da)鼠滋養層幹(gan)經HLA-E（白(bai)細(xi)胞(bao)抗原(yuan)）免(mian)疫熒(ying)光鑒定，純(chun)度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本(ben)公司所(suo)有產(chan)品僅供科學實(shi)驗，不做(zuo)其(qi)他科(ke)學實(shi)驗外的使(shi)用(yong)！

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳3代(dai)左右(you)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶(ping)、移液管(guan)、離心管(guan)、手術器械(xie)等，並進行(xing)高壓(ya)滅菌(jun)或其他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒處理(li)。

2. 試劑準備：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養基、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛血清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確保(bao)其無菌且(qie)在有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或組織來(lai)源準(zhun)備：根據實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並進行(xing)相(xiang)應(ying)的麻(ma)醉(zui)或處死(si)，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目標(biao)組織，盡(jin)量減少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多余的脂肪、結締組織等(deng)非目的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組(zu)織用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離心管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離心管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大部(bu)分被消(xiao)化成(cheng)單細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含血清(qing)的(de)培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉速離心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒(dao)置顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞的形態(tai)、生長(chang)狀態、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如發現(xian)細胞(bao)汙染或異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活力檢測(ce)：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍染色等方法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞的生長(chang)情況(kuang)和健康狀態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後(hou)需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴露(lu)於室(shi)溫或非營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生理鹽水(shui)沖洗(xi)組織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根據組(zu)織(zhi)類型選擇(ze)消(xiao)化酶，避免(mian)過度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯微鏡觀(guan)察細胞解離狀態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞(bao)需添(tian)加(jia)胰島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培(pei)養基品牌或批次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能(neng)需(xu)要包被(bei)培(pei)養皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度建議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯合(he)會導致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分化。

三(san)、汙染控(kong)制(zhi)

1. 無菌操(cao)作

- 全程在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材，避免(mian)交叉汙染。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如 PCR 法），汙染後(hou)需及(ji)時丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及培(pei)養基顏(yan)色，及時(shi)更換(huan)培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細胞(bao)變圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染或營養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍存早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍存培(pei)養基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮(dan)保(bao)存。