【概要描(miao)述】大鼠(shu)角膜(mo)基(ji)質細胞公司正在(zai)出(chu)售的(de)產品：JHH-6肝癌(ai)大(da)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管(guan)上(shang)皮(pi)細胞大鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管(guan)平滑(hua)肌細胞大鼠(shu)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞大鼠(shu)肺(fei)巨噬(shi)細胞大鼠(shu)肺(fei)微(wei)血管(guan)周細胞大鼠(shu)心肌細胞大鼠(shu)心房心(xin)肌細胞大鼠(shu)心室心肌細胞大鼠(shu)心肌成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞

大(da)鼠(shu)角膜(mo)基(ji)質分(fen)離(li)自(zi)眼(yan)角(jiao)膜(mo)組織(zhi)；角膜位(wei)於(yu)眼(yan)球(qiu)前(qian)壁(bi)的(de)壹(yi)層透明膜，約(yue)占(zhan)纖(xian)維(wei)膜(mo)的(de)前1/6，從(cong)後面看(kan)角(jiao)膜呈(cheng)正圓(yuan)形，從(cong)前(qian)面看(kan)為(wei)橫橢圓(yuan)形(xing)。角膜厚(hou)度各(ge)部(bu)分不(bu)盡(jin)相同(tong)，中央(yang)部(bu)最薄。角膜(mo)有十(shi)分(fen)敏感(gan)的(de)神經末(mo)梢，如有外(wai)物接(jie)觸(chu)角膜(mo)，眼(yan)瞼便會(hui)不(bu)由(you)自(zi)主(zhu)地(di)合(he)上(shang)以(yi)保護(hu)眼(yan)睛(jing)。為(wei)了(le)保(bao)持(chi)透(tou)明，角膜(mo)並(bing)沒(mei)有血管(guan)，透過外(wai)界(jie)空氣(qi)、淚液(ye)及(ji)房水(shui)獲取(qu)養(yang)份及(ji)氧(yang)氣(qi)。角膜(mo)分為(wei)五層，由前向後依次為：上(shang)皮(pi)細胞層、前彈(dan)力層、基(ji)質層、後彈(dan)力層、內皮(pi)細胞層。角膜基(ji)質層是(shi)角膜的主(zhu)要組成(cheng)部(bu)分，占(zhan)據角(jiao)膜(mo)厚度的90%，由角膜基(ji)質細胞、膠原纖(xian)維(wei)和(he)細胞外(wai)基(ji)質構(gou)成(cheng)。角膜(mo)基(ji)質層缺損的修復(fu)主(zhu)要由(you)角膜基(ji)質細胞的增殖(zhi)及(ji)分(fen)泌細胞外(wai)基(ji)質完成(cheng)。角膜(mo)基(ji)質層具(ju)有結構(gou)規(gui)整(zheng)，透(tou)明度高(gao)的(de)特(te)點(dian)，正常(chang)情況(kuang)下(xia)角(jiao)膜基(ji)質細胞分泌組成(cheng)基(ji)質層的成(cheng)分，維(wei)持(chi)角(jiao)膜的透(tou)明(ming)度，此細胞對(dui)於(yu)角(jiao)膜(mo)損(sun)傷(shang)的修復(fu)具(ju)有重(zhong)要意(yi)義。角膜基(ji)質細胞，存(cun)在於(yu)角膜(mo)基(ji)質層中，在(zai)正(zheng)常(chang)情況(kuang)下(xia)，處(chu)於靜(jing)止(zhi)狀態。但當(dang)角(jiao)膜(mo)損傷(shang)時，不(bu)同(tong)上(shang)皮(pi)來源(yuan)的因(yin)子(zi)及(ji)環境(jing)信(xin)號，將影響(xiang)角(jiao)膜(mo)基(ji)質細胞的應答(da)反應，決(jue)定著(zhe)角(jiao)膜(mo)能否wan全(quan)被修(xiu)復(fu)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司實驗(yan)室分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)角膜(mo)基(ji)質采用膠原酶消化(hua)後組織(zhi)貼塊法制(zhi)備(bei)而(er)來，細胞總(zong)量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公司實驗(yan)室分離(li)的(de)大(da)鼠(shu)角膜(mo)基(ji)質經Vimentin免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公司所有產品僅供科學實驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的使用！

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長特(te)性 貼壁(bi)

細胞形態 梭(suo)形、多角形

傳代(dai)特性 可傳2-3代(dai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無(wu)菌的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌或其他合(he)適(shi)的(de)消毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制或購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有效期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根據實驗(yan)需求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物(wu)並(bing)進行(xing)相(xiang)應的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲取所(suo)需組織(zhi)；或從已有的組織(zhi)樣本庫中獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在無菌條件下，迅速(su)取出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡量減少對(dui)組織(zhi)的損傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多余(yu)的脂肪(fang)、結締組織(zhi)等(deng)非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取出(chu)的組織(zhi)用預冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數次，以(yi)去(qu)除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便後續(xu)消化(hua)。

細胞分離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入含(han)有適(shi)量(liang)消化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床或(huo)培養(yang)箱中消化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊大部(bu)分被消化(hua)成(cheng)單細胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小細胞團時，加(jia)入含(han)血清的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細胞篩過濾(lv)細胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未消化(hua)的(de)組織(zhi)碎片，然(ran)後將濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細胞沈(chen)澱。

細胞觀察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每天(tian)用倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞的形態、生(sheng)長狀態、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發(fa)現(xian)細胞汙染或(huo)異常(chang)，及時(shi)采取相(xiang)應措施(shi)。
2. 細胞計數與(yu)活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需要時(shi)，可采用臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞進行(xing)計數和(he)活力檢測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細胞的生(sheng)長情(qing)況和(he)健康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織(zhi)取材後需立即(ji)處理(li)，避免(mian)長時(shi)間暴露於(yu)室溫或(huo)非營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消化(hua)導致細胞損傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞解離(li)狀態。

二、培養(yang)條件優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或特(te)定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞需添加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減少細胞適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需要包被培(pei)養(yang)皿（如膠原蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時密度建議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺操作，使用壹(yi)次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期(qi)使用可能(neng)影響(xiang)細胞活性。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需及時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細胞形態、密度及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如細胞變(bian)圓、碎片增(zeng)多）可能(neng)提示(shi)汙染或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細胞分裂(lie)次數有限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議(yi)使用 DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。