【概(gai)要描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)乳腺成纖(xian)維(wei)細胞公(gong)司正在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SNU-761肝癌大(da)鼠(shu)毛(mao)囊角(jiao)質(zhi)細胞大(da)鼠(shu)骨髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細胞大(da)鼠(shu)脂(zhi)肪(fang)幹(gan)細胞大(da)鼠(shu)滑(hua)膜間充(chong)質(zhi)幹細胞大(da)鼠(shu)毛(mao)囊幹細胞大(da)鼠(shu)膈肌細胞大(da)鼠(shu)肌腱成(cheng)纖(xian)維細胞大(da)鼠(shu)皮下微血管(guan)內皮細胞大(da)鼠(shu)脂(zhi)肪(fang)細胞

大(da)鼠(shu)乳腺成纖(xian)維(wei)分(fen)離(li)自(zi)乳(ru)腺組織；乳(ru)腺(xian)位於皮下淺筋膜的(de)淺層(ceng)與深(shen)層(ceng)之(zhi)間，淺(qian)筋(jin)膜伸(shen)向乳腺組織內形(xing)成(cheng)條索(suo)狀的(de)小葉間隔(ge)，壹(yi)端連於胸肌筋膜，另(ling)壹(yi)端連於皮膚，將乳腺(xian)腺(xian)體固定(ding)在(zai)胸部(bu)的(de)皮下組織之(zhi)中(zhong)。乳腺(xian)是(shi)哺(bu)乳(ru)動(dong)物少數可(ke)以(yi)重(zhong)復經(jing)歷(li)生(sheng)長(chang)、功能(neng)分(fen)化(hua)和退(tui)化(hua)過程(cheng)的(de)器官(guan)之(zhi)壹(yi)。纖維結(jie)締組織伸(shen)入(ru)乳(ru)腺(xian)組(zu)織之(zhi)間，形(xing)成(cheng)許多(duo)間隔(ge)，這(zhe)些纖維(wei)結(jie)締組織對乳房起(qi)固(gu)定(ding)作(zuo)用(yong)，而(er)纖(xian)維(wei)結(jie)締組織是(shi)由(you)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞構(gou)成(cheng)的(de)。成纖(xian)維(wei)細胞（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結(jie)締組織的(de)主要細胞成(cheng)分(fen)，由(you)胚(pei)胎(tai)時期的(de)間充(chong)質(zhi)細胞分(fen)化(hua)而(er)來(lai)。成(cheng)纖(xian)維細胞較(jiao)大(da)，輪(lun)廓清楚(chu)，多為(wei)突(tu)起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或(huo)星形(xing)的(de)扁平狀(zhuang)結(jie)構，其細胞核(he)呈規則(ze)的(de)卵圓形(xing)，核(he)仁大(da)而(er)明(ming)顯(xian)。成纖(xian)維細胞功能(neng)活動(dong)旺盛，細胞質(zhi)嗜(shi)弱堿性(xing)，具(ju)明(ming)顯(xian)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)合(he)成和分(fen)泌(mi)活(huo)動(dong)，在(zai)壹定(ding)條(tiao)件(jian)下，它可(ke)以(yi)實現跟纖維(wei)細胞的(de)互相(xiang)轉化(hua)；成(cheng)纖維細胞對不同程度的(de)細胞變(bian)性、壞死和組(zu)織缺損(sun)的(de)修復(fu)有著(zhe)十分(fen)重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)。剛分(fen)離(li)的(de)乳腺(xian)成(cheng)纖(xian)維細胞呈(cheng)圓形(xing)、折光(guang)性良好，懸浮於培養(yang)基(ji)中(zhong)。30min細胞貼(tie)壁(bi)，其中(zhong)部(bu)分(fen)開(kai)始(shi)伸(shen)出(chu)偽(wei)足(zu)，表(biao)現為小的(de)突(tu)起(qi)；6h後(hou)細胞基(ji)本(ben)貼(tie)壁wan全，伸(shen)展(zhan)成梭形(xing)，胞核(he)清晰(xi)，分(fen)布(bu)較(jiao)均勻(yun)，散(san)在(zai)生長(chang)，不(bu)聚集成團(tuan)；細胞生(sheng)長(chang)迅速(su)，5-7天(tian)即呈融合(he)狀態，細胞排列(lie)緊密(mi)，有的(de)交叉(cha)重(zhong)疊(die)生(sheng)長(chang)，平坦(tan)、胞體較(jiao)大(da)，細胞質(zhi)透(tou)明(ming)，細胞核(he)較(jiao)大(da)，呈橢(tuo)圓形(xing)，顏色淡(dan)。細胞融合(he)，並彼(bi)此(ci)連接(jie)成網狀；細胞呈(cheng)突(tu)起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或(huo)星形(xing)的(de)扁平分(fen)布(bu)。
方(fang)法簡(jian)介：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠(shu)乳腺成纖(xian)維(wei)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原酶混合(he)消化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)制備而(er)來(lai)，細胞總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠(shu)乳腺成纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免疫熒(ying)光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵母(mu)和真菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅供科(ke)學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其他科(ke)學(xue)實驗(yan)外的(de)使用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率(lv) 每2-3天換液壹(yi)次(ci)

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態 成纖(xian)維細胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代左(zuo)右；3代(dai)以(yi)內狀(zhuang)態

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器(qi)械(xie)等，並進行高壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他合(he)適的(de)消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠原酶等）、胎(tai)牛血(xue)清、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其無菌且在(zai)有效期內。

3. 實驗(yan)動物或(huo)組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適的(de)動物並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從已(yi)有的(de)組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織。

取材與(yu)處理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下，迅速(su)取出目標(biao)組織，盡(jin)量(liang)減少對組織的(de)損(sun)傷(shang)，並去除多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等(deng)非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將取出的(de)組織用(yong)預(yu)冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去(qu)除血(xue)液和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後續(xu)消化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入(ru)含(han)有適量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化(hua)成(cheng)單細胞懸液或(huo)小細胞團(tuan)時(shi)，加入(ru)含(han)血(xue)清的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸液，去(qu)除未(wei)消化(hua)的(de)組織碎(sui)片，然(ran)後將濾液(ye)以(yi)適當的(de)轉速(su)離(li)心(xin)，收集細胞沈澱。

細胞觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察：每天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察細胞的(de)形態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記(ji)錄細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及時(shi)采(cai)取相(xiang)應(ying)措施。
2. 細胞計數與活(huo)力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等方(fang)法對細胞進行計數和活(huo)力(li)檢(jian)測，以(yi)了解細胞的(de)生長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織取材後(hou)需(xu)立(li)即處理(li)，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據組織類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免過度消化(hua)導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微鏡觀(guan)察細胞解離狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使用(yong)含血清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需(xu)添加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁(fan)更(geng)換培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減少細胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要包被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次(ci)性耗(hao)材(cai)，避免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及時(shi)丟棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀察

- 每天檢(jian)查細胞形(xing)態、密(mi)度及培(pei)養(yang)基(ji)顏色，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天換液壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形態（如(ru)細胞變(bian)圓、碎(sui)片增(zeng)多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數有限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度降溫(wen)後液氮(dan)保存(cun)。