【概(gai)要描述(shu)】大鼠(shu)胎盤(pan)絨(rong)毛(mao)膜滋(zi)養層細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品：HCCLM3 (STR)高(gao)轉移(yi)人肝癌(ai)細(xi)胞(bao)大(da)鼠雪旺(wang)細(xi)胞(bao)大(da)鼠星形膠質(zhi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠小膠(jiao)質細(xi)胞(bao)大(da)鼠少(shao)突膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠神(shen)經(jing)膠質細(xi)胞(bao)大(da)鼠腦(nao)動(dong)脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大(da)鼠神(shen)經(jing)幹細(xi)胞(bao)大(da)鼠腦(nao)血(xue)管成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)大(da)鼠DRG神(shen)經(jing)元細(xi)胞(bao)

大鼠胎(tai)盤(pan)絨(rong)毛(mao)膜滋(zi)養層分離(li)自胎盤(pan)組織(zhi)；胎盤(pan)（placenta）是(shi)哺(bu)乳動(dong)物妊娠(shen)期間(jian)由胚(pei)胎(tai)的(de)胚(pei)膜(mo)和(he)母體子宮內膜聯合長(chang)成(cheng)的母子間交換(huan)物質的(de)過(guo)渡(du)性(xing)器官，由羊膜、葉狀(zhuang)絨(rong)毛(mao)膜和(he)底(di)蛻(tui)膜(mo)構成(cheng)。胎兒(er)在子(zi)宮中(zhong)發育(yu)，依(yi)靠胎(tai)盤(pan)從(cong)母體取得營(ying)養(yang)，而雙方保(bao)持(chi)相當的(de)獨(du)立性(xing)。胎盤(pan)還(hai)產生多種(zhong)維持妊娠(shen)的(de)激(ji)素，是壹個(ge)重(zhong)要的(de)內分泌(mi)器官。有(you)些(xie)爬(pa)行類(lei)和(he)魚類(lei)也以胎(tai)生(sheng)方式繁(fan)殖(zhi)後(hou)代，胚(pei)胎(tai)生(sheng)長(chang)出壹些(xie)輔(fu)助結(jie)構如卵(luan)黃(huang)囊(nang)、鰓絲(si)等與(yu)母體組織(zhi)緊密(mi)結(jie)合，以達(da)到母子間物質的(de)交(jiao)換(huan)，這樣的(de)結(jie)構稱(cheng)假胎盤(pan)。絨(rong)毛(mao)膜是(shi)由滋(zi)養層和(he)胚(pei)外中(zhong)胚(pei)層的壁層構成(cheng)。胚(pei)泡(pao)植(zhi)入子宮內膜後，在(zai)胚(pei)泡(pao)表(biao)面(mian)形成(cheng)許多絨毛(mao)樣的(de)突起(qi)，以細(xi)胞(bao)滋(zi)養層為中(zhong)軸，外裹合體(ti)滋(zi)養層，稱(cheng)初(chu)級(ji)幹(gan)絨(rong)毛(mao)。胚(pei)外中(zhong)胚(pei)層長入初級(ji)幹(gan)絨(rong)毛(mao)的中(zhong)軸，使(shi)初(chu)級幹(gan)絨毛(mao)變成(cheng)了次(ci)級幹絨毛(mao)。當絨(rong)毛(mao)膜的(de)胚(pei)外中(zhong)胚(pei)層內形成(cheng)血管網(wang)和(he)結(jie)締組織(zhi)，並與(yu)胚(pei)體(ti)內的血管相(xiang)通(tong)時，次級(ji)幹(gan)絨毛(mao)改稱(cheng)三(san)級(ji)幹(gan)絨(rong)毛(mao)。三級(ji)幹(gan)絨(rong)毛(mao)末端的(de)細(xi)胞(bao)滋(zi)養層細(xi)胞(bao)形成(cheng)細(xi)胞(bao)滋(zi)養層殼(ke)。隨(sui)著(zhe)胚(pei)胎(tai)發(fa)育(yu)，叢(cong)密(mi)絨(rong)毛(mao)膜與(yu)基(ji)蛻(tui)膜(mo)共同構成(cheng)了胎(tai)盤(pan)，而平滑絨(rong)毛(mao)膜則(ze)和(he)包蛻(tui)膜(mo)壹起(qi)逐漸與(yu)壁(bi)蛻(tui)膜(mo)融(rong)合。
方法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分離(li)的大鼠(shu)胎盤(pan)絨(rong)毛(mao)膜滋(zi)養層采(cai)用yi蛋(dan)白酶(mei)-DNA酶(mei)聯合消化法(fa)結合密(mi)度梯度離心(xin)法制(zhi)備而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公司(si)實驗(yan)室分離(li)的大鼠(shu)胎盤(pan)絨(rong)毛(mao)膜滋(zi)養層經Cytokeratin-7免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定，純(chun)度可達(da)90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌等。

本公(gong)司(si)所有(you)產品僅供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不做其他(ta)科學(xue)實驗(yan)外的使(shi)用！

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細(xi)胞(bao)形態 梭(suo)形、多角(jiao)形

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可傳(chuan)1-2代

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養條件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的培(pei)養(yang)皿、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手術(shu)器械等，並進(jin)行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養基、消化酶(mei)（如、膠原(yuan)酶等）、胎牛血清(qing)、雙抗等試劑(ji)，確保(bao)其無菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需求，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並進(jin)行相應(ying)的(de)麻(ma)醉或處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已有的組織(zhi)樣本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條件下，迅(xun)速取出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷(shang)，並去除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結締組織(zhi)等非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出的組織(zhi)用預冷的(de)無菌PBS沖洗數次(ci)，以去除血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切(qie)：將組織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後續消化。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有適量(liang)消化酶(mei)的離心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中(zhong)消化壹(yi)段時間。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使(shi)消化更(geng)均勻。

2. 終止消化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清(qing)的培(pei)養基(ji)終止消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除未消化的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將濾液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉速離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢(jian)測

1. 日常觀察：每(mei)天用倒置顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的(de)形態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變化情況(kuang)，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常，及時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要時，可采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方法對細(xi)胞(bao)進(jin)行計數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測，以了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長情況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取材(cai)後(hou)需立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生(sheng)理鹽水沖洗組織(zhi)，去除血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消化酶(mei)，避免(mian)過(guo)度消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常 10-30 分鐘），可通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培養(yang)條件優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或特(te)定生(sheng)長因子(zi)的(de)培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被培養皿（如膠原(yuan)蛋白、多聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度建議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制和(he)分化。

三、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全程(cheng)在超凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹次性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀察

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度及培養基顏(yan)色(se)，及時更換(huan)培(pei)養基（通(tong)常每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常形態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片增多）可能提示(shi)汙(wu)染或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數有(you)限（壹般 5-10 代(dai)），需及時凍存(cun)早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用凍存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度降溫(wen)後(hou)液氮保(bao)存(cun)。