【概(gai)要(yao)描述(shu)】大(da)鼠呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)細胞(bao)公司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：HuH7.5肝(gan)癌(ai)人(ren)牙(ya)周膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)人(ren)牙(ya)周膜(mo)幹細胞(bao)人(ren)牙(ya)髓幹細胞(bao)人(ren)口(kou)腔(qiang)黏膜上皮(pi)細胞(bao)人(ren)牙(ya)齦(yin)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞(bao)人(ren)角(jiao)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)人(ren)晶狀體上(shang)皮(pi)細胞(bao)人(ren)脈絡(luo)膜(mo)微血管內(nei)皮(pi)細胞(bao)人(ren)角(jiao)膜(mo)內(nei)皮(pi)細胞(bao)

大(da)鼠呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)分(fen)離自(zi)呼(hu)吸道(dao)；呼(hu)吸道(dao)是肺呼(hu)吸時氣流所(suo)經過(guo)的(de)通道(dao)，有肺脊椎(zhui)動物(wu)的(de)呼(hu)吸道(dao)分(fen)上(shang)、下(xia)兩部(bu)：鼻(bi)、咽(yan)和(he)喉(hou)合(he)稱上呼(hu)吸道(dao)。氣管及(ji)其以(yi)後壹(yi)分(fen)再(zai)分(fen)的(de)管道(dao)，合(he)稱為下(xia)呼(hu)吸道(dao)，或稱為氣管樹。氣管樹是隨著(zhe)動物(wu)的(de)進化逐(zhu)漸(jian)復(fu)雜(za)化的(de)。整個呼(hu)吸道(dao)內表(biao)面(mian)都分(fen)布(bu)有(you)分(fen)泌(mi)液(ye)和(he)纖(xian)毛(mao)（鼻孔(kong)、咽(yan)後(hou)壁和(he)聲(sheng)帶黏膜除外），它(ta)能(neng)溫暖（或(huo)冷(leng)卻）、濕(shi)潤和凈化(hua)吸入的(de)空氣，對於(yu)呼(hu)吸器官(guan)和機(ji)體(ti)有(you)著(zhe)保(bao)護作(zuo)用。呼(hu)吸道(dao)以骨(gu)或(huo)軟骨做支(zhi)架(jia)，其內(nei)表(biao)面(mian)覆蓋著(zhe)黏膜，黏膜內分(fen)布(bu)著(zhe)豐(feng)富的(de)毛(mao)細血管。呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)細胞(bao)屬(shu)於(yu)假(jia)復(fu)層(ceng)纖(xian)毛(mao)柱狀上皮(pi)，分(fen)布(bu)於(yu)呼(hu)吸道(dao)的(de)內表(biao)面(mian)，主要(yao)由柱狀，杯(bei)形(xing)，梭形和錐(zhui)形(xing)等(deng)不同(tong)形狀細胞(bao)組(zu)成。看(kan)上去(qu)像(xiang)復(fu)層(ceng)上(shang)皮(pi)，但(dan)實際上所(suo)有(you)細胞(bao)底(di)部(bu)均(jun)附(fu)於(yu)基(ji)膜上(shang)，屬(shu)單層(ceng)上(shang)皮(pi)，故(gu)稱假(jia)復(fu)層(ceng)柱狀上皮(pi)，上(shang)皮(pi)表(biao)面(mian)有纖(xian)毛(mao)，杯(bei)狀(zhuang)細胞(bao)可(ke)分(fen)泌(mi)粘(zhan)液(ye)，包裹著(zhe)大(da)量細菌，借(jie)助(zhu)纖(xian)毛(mao)不斷擺動將(jiang)其慢(man)慢(man)移動至出消化道(dao)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大(da)鼠呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)采用(yong)鏈黴(mei)蛋(dan)白-膠原酶(mei)混合(he)消化法(fa)結(jie)合(he)差速貼(tie)壁法(fa)，並(bing)通過(guo)上(shang)皮(pi)細胞(bao)專用(yong)培(pei)養基(ji)培(pei)養篩選制備(bei)而來，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大(da)鼠呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)經pan-cytokeratin免疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純度可(ke)達90%以(yi)上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌、酵母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公司(si)所有(you)產(chan)品(pin)僅供(gong)科學實(shi)驗(yan)，不做其他(ta)科學實(shi)驗(yan)外的(de)使用(yong)！

包被(bei)條件(jian) 鼠(shu)尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長特性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 上(shang)皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可(ke)傳1-2代(dai)

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液(ye)管、離心(xin)管、手(shou)術(shu)器械等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其他(ta)合(he)適的(de)消毒處理。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購(gou)買合(he)適的(de)培(pei)養基(ji)、消化酶(mei)（如、膠原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其無菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動物(wu)或(huo)組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選擇合(he)適的(de)動物(wu)並(bing)進行相應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與處理

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組織(zhi)的(de)損傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等(deng)非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織(zhi)用預冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以去除血液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便(bian)後續消化。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入含有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的(de)離心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或培(pei)養箱(xiang)中消化壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃(huang)離心(xin)管，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消化：當組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小細胞(bao)團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液，去除未消化的(de)組織(zhi)碎片，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變化(hua)情(qing)況，如發(fa)現細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色等(deng)方(fang)法(fa)對細胞(bao)進行計數(shu)和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解細胞(bao)的(de)生(sheng)長情(qing)況和(he)健(jian)康狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後需(xu)立(li)即處理，避(bi)免長時間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類型(xing)選擇消化酶(mei)，避(bi)免過(guo)度消化導致(zhi)細胞(bao)損傷。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細胞(bao)解離狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選擇

- 使(shi)用含(han)血清或特(te)定(ding)生(sheng)長因子的(de)培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞(bao)需(xu)添加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培(pei)養基(ji)品(pin)牌或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代細胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿(min)（如膠原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密度建(jian)議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導致(zhi)接觸抑制和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中可(ke)添加雙抗(kang)，但長期使用可(ke)能(neng)影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及培(pei)養基(ji)顏色，及(ji)時更(geng)換培(pei)養基(ji)（通常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如細胞(bao)變圓、碎片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙(wu)染或(huo)營(ying)養不足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍存早(zao)期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用(yong)凍(dong)存培(pei)養基(ji)），梯度降(jiang)溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存。