【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大鼠(shu)腎足(zu)突細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的產品：NCI-H1703非小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌人(ren)結膜下(xia)囊成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)人(ren)胎盤(pan)微血管(guan)內皮細(xi)胞(bao)人(ren)羊膜上皮(pi)細胞(bao)人(ren)胎盤(pan)絨(rong)毛(mao)膜滋(zi)養(yang)層細(xi)胞(bao)人(ren)胎盤(pan)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)人(ren)臍靜(jing)脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)人(ren)臍動脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)人(ren)臍靜(jing)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)人(ren)臍動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)

大鼠(shu)腎足(zu)突分(fen)離(li)自腎(shen)組織；腎(shen)小(xiao)球(qiu)是腎元(yuan)中的用於將血液過濾(lv)生(sheng)成(cheng)原尿(niao)的壹(yi)團毛(mao)細血叢，被鮑氏(shi)囊所(suo)包裹，是尿(niao)液形(xing)成(cheng)的(de)重(zhong)要(yao)構造(zao)。血液經(jing)由入球(qiu)小動脈(mai)進入(ru)腎(shen)小球(qiu)。腎小(xiao)球(qiu)內的微(wei)血管(guan)不(bu)像其他微血管(guan)，匯流入(ru)靜(jing)脈(mai)，而(er)是流入(ru)出(chu)球(qiu)小動脈(mai)。在(zai)腎小(xiao)球(qiu)內，微血管(guan)受(shou)到高(gao)壓(ya)，而(er)加速(su)了(le)超濾(lv)作(zuo)用(yong)（hyperfiltration）的進行。微(wei)血管(guan)中的血液經(jing)由超濾(lv)作(zuo)用(yong)之(zhi)後(hou)，形成濾(lv)液(ye)，滲(shen)入(ru)鮑氏(shi)囊內。腎小(xiao)球(qiu)與鮑氏(shi)囊合(he)稱(cheng)為(wei)腎(shen)小(xiao)體(ti)，腎小(xiao)球(qiu)的過(guo)濾(lv)速(su)率便稱(cheng)為(wei)腎(shen)小(xiao)球(qiu)過濾(lv)率。足細胞(bao)（podocyte）即腎小(xiao)囊臟(zang)層上皮(pi)細胞(bao)，它(ta)附(fu)著(zhe)於(yu)腎小(xiao)球(qiu)基(ji)底膜(mo)（GBM）的(de)外(wai)側，連(lian)同GBM和毛(mao)細血管(guan)內皮壹(yi)起(qi)構成(cheng)了(le)腎小球(qiu)血液濾(lv)過(guo)屏(ping)障(zhang)。足(zu)細胞(bao)特(te)殊的(de)解(jie)剖(pou)位(wei)置(zhi)，使得其體內研究(jiu)較(jiao)為(wei)困難(nan)；又(you)由於正(zheng)常(chang)成(cheng)年機體的(de)腎(shen)臟(zang)足(zu)細(xi)胞(bao)是壹(yi)種終(zhong)末分(fen)化細胞(bao)，體(ti)外培(pei)養的(de)原代(dai)細(xi)胞(bao)不(bu)能增殖。足細胞(bao)呈(cheng)星型(xing)多突(tu)狀，胞(bao)體(ti)較(jiao)大，由胞(bao)體(ti)伸出(chu)許(xu)多(duo)突(tu)起(qi)，又(you)稱(cheng)足突(tu)（FP），呈(cheng)指狀交(jiao)叉復蓋於(yu)GBM外(wai)表(biao)面，並(bing)通過(guo)黏附(fu)分(fen)子(zi)和蛋(dan)白(bai)多糖(tang)分(fen)子(zi)與GBM相(xiang)連(lian)。足細胞(bao)在(zai)正(zheng)常(chang)情(qing)況(kuang)下(xia)可以(yi)分(fen)泌(mi)GBM的(de)主要(yao)組成成(cheng)分(fen)，IV型膠(jiao)原和(he)纖(xian)維連(lian)接(jie)蛋(dan)白(bai)（FN）；在促腎纖(xian)維化(hua)引(yin)資等刺(ci)激下(xia)還(hai)能分(fen)泌(mi)具有(you)降(jiang)解(jie)GBM作(zuo)用(yong)的(de)基(ji)質金(jin)屬蛋(dan)白(bai)酶（MMPs）和組織蛋(dan)白(bai)酶，從而(er)在GBM的(de)代(dai)謝(xie)平(ping)衡中發(fa)揮(hui)重要(yao)作用(yong)。足(zu)細(xi)胞(bao)之(zhi)間鄰近的足突(tu)相(xiang)互交(jiao)替，形(xing)成了(le)許多30-40nm的裂(lie)孔，孔上覆蓋壹(yi)層厚(hou)4-6nm的裂(lie)孔隔膜(mo)，即腎小(xiao)球(qiu)足突(tu)間裂(lie)孔隔膜(mo)。後(hou)者(zhe)是血漿蛋(dan)白(bai)通過(guo)脈(mai)管(guan)系(xi)統的最後(hou)屏(ping)障，對於(yu)維持(chi)腎(shen)小球(qiu)濾(lv)過(guo)屏(ping)障(zhang)結(jie)構與(yu)功(gong)能完(wan)整性(xing)發(fa)揮(hui)關(guan)鍵作用。
方法(fa)簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大鼠(shu)腎足(zu)突采(cai)用(yong)機械研磨過(guo)不(bu)同孔徑不(bu)銹鋼網(wang)篩(shai)結合(he)膠(jiao)原酶消化法(fa)制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大鼠(shu)腎足(zu)突經(jing)PCK免疫熒(ying)光鑒定，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使用！

包被條(tiao)件(jian) 鼠尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 上皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可傳1-2代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養(yang)條件(jian) 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準備：準備無菌(jun)的(de)培養(yang)皿、培養瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器械等，並(bing)進行高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他合適的消毒(du)處理。

2. 試劑(ji)準備：配制(zhi)或購(gou)買(mai)合適的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎牛(niu)血清、雙抗等試劑(ji)，確保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或(huo)組織來源(yuan)準備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇合適的動物並(bing)進行相(xiang)應(ying)的麻醉或(huo)處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組織；或(huo)從(cong)已有(you)的(de)組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取組織。

取材(cai)與處理

1. 取材(cai)：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去除多(duo)余的(de)脂肪(fang)、結(jie)締(di)組織等非目(mu)的組織。

2. 清洗：將取出(chu)的(de)組織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將組織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便後續(xu)消化。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎的(de)組織塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適量(liang)消化酶的離(li)心(xin)管(guan)中，在37℃恒(heng)溫搖床(chuang)或培養箱中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織塊大部(bu)分(fen)被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血清的培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除未(wei)消化的(de)組織碎片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)的(de)形態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變化情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與活(huo)力(li)檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色等方法(fa)對細(xi)胞(bao)進行計(ji)數和活(huo)力(li)檢測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作

- 組織取(qu)材(cai)後需(xu)立(li)即處理，避免長(chang)時間暴露於室(shi)溫或(huo)非營養環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組織，去除血液、雜質。

2. 消化酶選擇

- 根據(ju)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件(jian)優化

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用(yong)含(han)血清或特定生長(chang)因子(zi)的培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞(bao)需(xu)添(tian)加胰(yi)島素、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯合會(hui)導致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操作(zuo)，使用壹(yi)次性耗(hao)材(cai)，避免交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支原體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢測支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培(pei)養基(ji)顏色，及時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或(huo)營養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用凍(dong)存培養基(ji)），梯度降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存。