【概(gai)要描(miao)述】大鼠(shu)腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞(bao)公(gong)司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：NCI-H1581非(fei)小細(xi)胞(bao)肺(fei)癌人(ren)蛻膜成纖(xian)維細(xi)胞(bao)人(ren)卵(luan)巢成纖維(wei)細(xi)胞(bao)人(ren)陰道成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)人(ren)陰道平滑肌細(xi)胞(bao)人(ren)子宮(gong)微血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)子宮(gong)蛻膜基(ji)質(zhi)細(xi)胞(bao)人(ren)海綿(mian)體平滑肌細(xi)胞(bao)人(ren)子宮(gong)內膜異位癥間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)人(ren)角質(zhi)形(xing)成細(xi)胞(bao)

大鼠(shu)腎動(dong)脈平滑肌分離自腎動(dong)脈組織(zhi)；腎動(dong)脈的分支為(wei)葉(ye)間(jian)動(dong)脈，穿行(xing)於(yu)腎柱(zhu)內(nei)，上行(xing)至(zhi)皮(pi)質(zhi)與(yu)髓(sui)質交界處(chu)，形(xing)成與(yu)腎表(biao)面平行的弓(gong)狀(zhuang)動(dong)脈。小葉(ye)間(jian)動(dong)脈向被膜發出(chu)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)，並向周圍(wei)的(de)腎小體(ti)發出(chu)入(ru)球(qiu)小動(dong)脈，進入(ru)腎小囊(nang)後(hou)形(xing)成球(qiu)形(xing)的毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯集(ji)成(cheng)出(chu)球(qiu)小動(dong)脈，出(chu)腎小體(ti)。直(zhi)小動(dong)脈分支形(xing)成毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，再(zai)匯合(he)成(cheng)直(zhi)小靜脈，入(ru)弓(gong)狀(zhuang)靜脈、葉(ye)間(jian)靜脈，最(zui)後(hou)匯合(he)成(cheng)腎靜脈經(jing)腎門出(chu)腎，註入(ru)下(xia)腔靜脈。腎動(dong)脈既(ji)是(shi)腎的營(ying)養血管，又是(shi)腎的機能血(xue)管(guan)，與(yu)腎泌尿(niao)機(ji)能(neng)密切相(xiang)關。腎動(dong)脈在腎實質內形(xing)成兩(liang)個毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網：腎小球(qiu)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓較(jiao)高，利於血(xue)漿濾過(guo)形(xing)成原尿(niao)；球(qiu)後(hou)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)網，血(xue)壓較(jiao)低(di)，利於腎小管(guan)的(de)重(zhong)吸(xi)收。腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞(bao)是(shi)腎動(dong)脈的重(zhong)要(yao)結構(gou)細(xi)胞(bao)之(zhi)壹，在(zai)機(ji)體(ti)的(de)正常(chang)生理過程(cheng)中發揮著重(zhong)要(yao)作用。腎動(dong)脈平滑肌細(xi)胞(bao)原代分離培養(yang)3天(tian)後(hou)，可(ke)見(jian)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁伸(shen)展，細(xi)胞(bao)形(xing)態大小不壹，呈梭形(xing)、不規(gui)則形(xing)、三角(jiao)形(xing)或扇(shan)形(xing)，核卵(luan)圓(yuan)形(xing)、居中；2周後(hou)細(xi)胞(bao)匯合(he)，多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)伸(shen)展呈長梭形(xing)，胞漿豐富，有分枝(zhi)狀(zhuang)突起(qi)，細(xi)胞(bao)平行排列成(cheng)單(dan)層(ceng)或部(bu)分區域多(duo)層(ceng)重(zhong)疊(die)生長(chang)，高低起伏(fu)；細(xi)胞(bao)密度(du)低時，常交織成(cheng)網狀(zhuang)；密度(du)高時，則排列為(wei)旋渦狀(zhuang)或柵欄(lan)狀(zhuang)。傳(chuan)代(dai)後(hou)細(xi)胞(bao)生(sheng)長較(jiao)快(kuai)，4-6天即可(ke)匯合(he)，並保持(chi)上述(shu)形(xing)態學(xue)特(te)征(zheng)和(he)生(sheng)長(chang)特(te)點。
方(fang)法(fa)簡介：

公(gong)司實驗室分離的大鼠(shu)腎動(dong)脈平滑肌采(cai)用yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原酶聯(lian)合(he)消(xiao)化(hua)法(fa)結合(he)差(cha)速貼壁法制備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司實驗室分離的大鼠(shu)腎動(dong)脈平滑肌經(jing)α-SMA免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可(ke)達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公司所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做(zuo)其他科(ke)學(xue)實驗外的(de)使(shi)用！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右；3代以內(nei)狀(zhuang)態

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液管、離心管(guan)、手(shou)術器械等(deng)，並進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或其他合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制或購買合(he)適的(de)培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎牛(niu)血清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其無菌且(qie)在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動(dong)物或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據(ju)實驗需(xu)求，選(xuan)擇合(he)適的(de)動(dong)物並進行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉(zui)或處死(si)，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已有(you)的組(zu)織樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速取出(chu)目(mu)標組織，盡量減(jian)少對組織的(de)損(sun)傷(shang)，並去除多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等(deng)非目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用預(yu)冷的無菌PBS沖(chong)洗(xi)數次，以(yi)去除血(xue)液和雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離心管(guan)中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床或培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕搖晃離心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分被消(xiao)化(hua)成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小細(xi)胞(bao)團時，加入(ru)含血清的培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除未消(xiao)化(hua)的(de)組織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以適當(dang)的(de)轉速離心，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用倒置顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變化情(qing)況，如發現(xian)細(xi)胞(bao)汙染(ran)或異常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測：在需要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數和活(huo)力(li)檢(jian)測，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情(qing)況和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處(chu)理，避免長時間(jian)暴露(lu)於室溫或非營(ying)養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生理鹽水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根(gen)據(ju)組織類型(xing)選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避免過度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需(xu)嚴(yan)格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血清或特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻繁更(geng)換培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要包被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度(du)建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制和(he)分化。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制

1. 無菌操作

- 全程(cheng)在超凈臺操作，使用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期使用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支原體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢測支原體汙染(ran)（如 PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監(jian)控

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液壹次）。

- 異常形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙染(ran)或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍存早(zao)期(qi)代次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或專用凍存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存。