【概(gai)要描(miao)述】大(da)鼠小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品(pin)：LU65C非(fei)小細胞(bao)肺(fei)癌兔DRG神經(jing)元細(xi)胞兔下丘(qiu)腦(nao)神經(jing)元細(xi)胞兔背根(gen)神經(jing)節細胞兔(tu)三(san)叉(cha)神經(jing)星(xing)形膠質細(xi)胞(bao)兔脊(ji)髓(sui)星(xing)形膠質細(xi)胞(bao)兔室(shi)管膜細(xi)胞(bao)兔三(san)叉(cha)神經(jing)元細(xi)胞兔脊髓(sui)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞兔(tu)嗅鞘細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)分離(li)自小腸(chang)組(zu)織(zhi)；小(xiao)腸(chang)位(wei)於(yu)腹中(zhong)，上(shang)端接(jie)幽門與(yu)胃相(xiang)通，下端通過闌(lan)門與(yu)大腸(chang)相(xiang)連，是食(shi)物消化吸收的(de)主(zhu)要(yao)場(chang)所(suo)。小(xiao)腸(chang)盤(pan)曲於腹腔(qiang)內，上連胃(wei)幽門，下(xia)接(jie)盲腸(chang)，分為(wei)十(shi)二指(zhi)腸(chang)、空(kong)腸(chang)和(he)回(hui)腸(chang)三(san)部(bu)分。小(xiao)腸(chang)內消化(hua)是至(zhi)關重要(yao)的，因(yin)為(wei)食(shi)物經(jing)過小腸(chang)內胰(yi)液、膽(dan)汁(zhi)和(he)小腸(chang)液(ye)的(de)化(hua)學性消化及小(xiao)腸(chang)運(yun)動的(de)機(ji)械(xie)性消化後，基本(ben)上(shang)完成(cheng)了消(xiao)化(hua)過程，同(tong)時營(ying)養(yang)物質被小腸(chang)粘(zhan)膜(mo)吸(xi)收了(le)。小腸(chang)管壁由粘(zhan)膜(mo)、粘(zhan)膜(mo)下(xia)層(ceng)、肌(ji)層(ceng)和漿(jiang)膜(mo)構(gou)成(cheng)。其結(jie)構(gou)特(te)點(dian)是管壁有環(huan)形皺(zhou)襞(bi)，粘(zhan)膜(mo)有許多絨毛，絨毛(mao)根(gen)部(bu)的(de)上皮(pi)下(xia)陷(xian)至(zhi)固(gu)有層(ceng)，形成(cheng)管狀的腸(chang)腺(xian)，其(qi)開口(kou)位(wei)於(yu)絨(rong)毛(mao)根(gen)部(bu)之間。絨(rong)毛和腸(chang)腺(xian)與(yu)小腸(chang)的(de)消(xiao)化(hua)和吸收功(gong)能關(guan)系(xi)密切(qie)；構(gou)成(cheng)腸(chang)腺(xian)的(de)細(xi)胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細(xi)胞和(he)未(wei)分化(hua)細(xi)胞。柱(zhu)狀細胞和內分泌(mi)細(xi)胞與(yu)絨毛(mao)上皮(pi)相(xiang)似(si)，接(jie)近絨(rong)毛(mao)的柱狀細胞與(yu)吸收細(xi)胞相似(si)，絨(rong)毛(mao)深(shen)部(bu)的(de)柱狀細胞微絨(rong)毛少而(er)短(duan)，不形成(cheng)紋狀緣(yuan)。小(xiao)腸(chang)有三(san)種功(gong)能即(ji)消化(hua)、吸(xi)收和(he)分泌(mi)及運(yun)動功(gong)能，其(qi)中(zhong)以(yi)吸收和(he)分泌(mi)功(gong)能為(wei)主(zhu)。平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)的(de)收縮是負責腸(chang)蠕(ru)動的(de)動力(li)，促(cu)使(shi)食(shi)物向(xiang)下運(yun)動。小(xiao)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)原(yuan)代(dai)分離(li)培(pei)養(yang)3天(tian)後，可見(jian)細胞貼壁伸展，細(xi)胞形態(tai)大小不壹，呈梭形、不規則形、三(san)角(jiao)形或扇形，核卵(luan)圓(yuan)形、居中(zhong)；2周後細胞(bao)匯合(he)，多數細胞(bao)伸展呈長梭形，胞漿(jiang)豐(feng)富(fu)，有分枝狀突起，細胞(bao)平行(xing)排(pai)列成(cheng)單(dan)層(ceng)或部(bu)分區(qu)域(yu)多層(ceng)重疊生(sheng)長，高低(di)起(qi)伏；細胞(bao)密度(du)低時，常交織(zhi)成(cheng)網(wang)狀；密度(du)高時，則排列(lie)為(wei)旋渦(wo)狀或柵欄狀。傳(chuan)代(dai)後細胞(bao)生(sheng)長較(jiao)快，4-6天即(ji)可匯合(he)，並保(bao)持(chi)上(shang)述形態(tai)學特征(zheng)和(he)生(sheng)長特點(dian)。小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)肉(rou)瘤(liu)是起(qi)源(yuan)於小(xiao)腸(chang)壁肌(ji)層(ceng)、黏膜(mo)下(xia)肌(ji)層(ceng)和腸(chang)壁血管平滑肌(ji)的(de)惡(e)性(xing)腫瘤(liu)，是小(xiao)腸(chang)結(jie)締組織(zhi)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)中(zhong)最(zui)常見(jian)的壹種。因(yin)此(ci)，體(ti)外(wai)小(xiao)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)的(de)培(pei)養(yang)對研(yan)究小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)肉(rou)瘤(liu)提供(gong)了(le)基(ji)礎(chu)和前提。此(ci)外(wai)，體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，由(you)於(yu)影(ying)響(xiang)因(yin)素較(jiao)為(wei)單(dan)壹(yi)，是研(yan)究細胞(bao)功能以(yi)及相(xiang)應的(de)細胞(bao)信(xin)號(hao)轉(zhuan)導(dao)機(ji)制(zhi)的基礎。
方法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠(shu)小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)采用yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)聯(lian)合(he)消化(hua)法結(jie)合(he)差速(su)貼壁法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)大鼠(shu)小腸(chang)平(ping)滑肌(ji)經(jing)α-SMA免疫(yi)熒光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科學實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率 每2-3天換液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長特性(xing) 貼壁

細(xi)胞形態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞樣

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)5代左右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態(tai)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準備：準備無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液管、離心管、手術(shu)器(qi)械等，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑準備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛血清(qing)、雙抗等試劑(ji)，確(que)保其無菌(jun)且(qie)在(zai)有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組織來(lai)源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物並進(jin)行(xing)相(xiang)應的麻醉或處(chu)死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下，迅速取(qu)出目標組(zu)織(zhi)，盡量減少對組(zu)織的(de)損傷(shang)，並(bing)去除多余的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締組織(zhi)等非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的組(zu)織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗(xi)數次(ci)，以(yi)去除血(xue)液和雜質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後續消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊放(fang)入含(han)有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的離(li)心管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹段時間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖晃(huang)離(li)心管，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾(lv)細胞懸(xuan)液，去除未(wei)消化(hua)的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉速(su)離(li)心，收集(ji)細胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每天(tian)用倒置顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度(du)等，記錄細(xi)胞的變(bian)化情(qing)況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常，及時采取相(xiang)應措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采用臺(tai)盼藍染(ran)色(se)等(deng)方法對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計(ji)數和活(huo)力(li)檢測(ce)，以(yi)了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長情(qing)況和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取材(cai)後需(xu)立即(ji)處(chu)理，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫或非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去除血(xue)液、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型選(xuan)擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度(du)消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定生(sheng)長因(yin)子(zi)的培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養(yang)基品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要包被培(pei)養(yang)皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合(he)會導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制和分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長期使(shi)用(yong)可能影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀態(tai)監控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每天(tian)檢查細胞(bao)形態(tai)、密度(du)及培(pei)養(yang)基顏(yan)色(se)，及時更換培(pei)養(yang)基（通常每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可能提示(shi)汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞分裂次(ci)數有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及時凍(dong)存(cun)早期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後液氮保(bao)存。