【概要描(miao)述】大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細胞公司(si)正在出售的(de)產品(pin)：NCI-H1437非(fei)小(xiao)細胞肺癌人(ren)膀胱平滑(hua)肌細胞人膀胱成纖維細胞人前列(lie)腺上(shang)皮細胞人前列(lie)腺成纖維細胞人輸卵(luan)管成纖維細胞人腎(shen)成纖維細胞人腎(shen)間(jian)質成纖維細胞人膀胱癌相關(guan)成纖維細胞人甲狀腺上(shang)皮細胞

大(da)鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)分(fen)離(li)自(zi)腎(shen)小(xiao)球(qiu)組織(zhi)；腎(shen)小(xiao)球(qiu)是(shi)腎(shen)元(yuan)中(zhong)的(de)用於(yu)將(jiang)血(xue)液過(guo)濾生(sheng)成原尿(niao)的(de)壹(yi)團(tuan)毛細血(xue)叢，被(bei)鮑(bao)氏囊所(suo)包裹(guo)，是(shi)尿液形(xing)成的重要(yao)構造。血(xue)液經(jing)由入球(qiu)小動脈進入(ru)腎(shen)小(xiao)球(qiu)。腎(shen)小(xiao)球(qiu)內(nei)的微血(xue)管(guan)不(bu)像(xiang)其(qi)他(ta)微血(xue)管(guan)，匯流(liu)入(ru)靜脈，而是(shi)流(liu)入(ru)出球小動脈。在腎(shen)小(xiao)球(qiu)內(nei)，微血(xue)管(guan)受(shou)到(dao)高壓，而加(jia)速(su)了(le)超(chao)濾作(zuo)用（hyperfiltration）的進行(xing)。微血(xue)管(guan)中(zhong)的(de)血(xue)液經(jing)由超(chao)濾作(zuo)用之後(hou)，形(xing)成濾液，滲入(ru)鮑(bao)氏囊內。腎(shen)小(xiao)球(qiu)與(yu)鮑氏囊合稱為腎(shen)小(xiao)體(ti)，腎(shen)小(xiao)球(qiu)的(de)過濾速(su)率(lv)便(bian)稱為腎(shen)小(xiao)球(qiu)過(guo)濾率(lv)。腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)是(shi)位於(yu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)毛(mao)細血(xue)管(guan)袢(pan)之間(jian)的(de)壹種(zhong)特殊(shu)間(jian)充質，由系(xi)膜(mo)細胞和(he)系(xi)膜(mo)基質組成。腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細胞是(shi)腎(shen)小(xiao)球(qiu)內(nei)非(fei)常(chang)活(huo)躍(yue)的(de)細胞，具(ju)有(you)分(fen)泌(mi)細胞基質、產生(sheng)細胞因子(zi)、吞(tun)噬(shi)和(he)清(qing)除(chu)大(da)分(fen)子(zi)物質及(ji)類似(si)平滑肌細胞收(shou)縮的(de)功(gong)能。腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細胞增生和(he)基質的(de)過(guo)多產生(sheng)是(shi)多種(zhong)腎(shen)小(xiao)球(qiu)腎(shen)炎(yan)的(de)主(zhu)要病理表現。腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細胞的培養是(shi)研究系(xi)膜(mo)擴(kuo)張、瘢(ban)痕(hen)形成和(he)腎(shen)小(xiao)球(qiu)硬化(hua)的(de)理想方法(fa)。系(xi)膜(mo)細胞的主(zhu)要作(zuo)用(yong)可(ke)能有(you)：①收(shou)縮作(zuo)用(yong)，入(ru)球小動脈和(he)出(chu)球(qiu)動脈的收(shou)縮作(zuo)用(yong)受(shou)系(xi)膜(mo)細胞的調(tiao)節，以影響毛(mao)細血(xue)管(guan)袢(pan)的(de)內壓和(he)濾過(guo)率(lv)；②支持(chi)作用，它填充於(yu)毛細血(xue)管(guan)袢(pan)之間(jian)，支持(chi)毛細血(xue)管(guan)的位置；③吞(tun)噬作用(yong)，能吞(tun)噬(shi)被(bei)阻(zu)留(liu)在基膜(mo)內的(de)大(da)分(fen)子(zi)物質和(he)蛋(dan)白(bai)質；④分(fen)泌(mi)腎(shen)素，在腎(shen)缺血(xue)或免(mian)疫復(fu)合物沈(chen)積(ji)時(shi)，系(xi)膜(mo)細胞增生且(qie)分(fen)泌(mi)腎(shen)素。
方法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)采用(yong)機(ji)械研磨法(fa)結(jie)合(he)不(bu)同(tong)孔(kong)徑(jing)不(bu)銹鋼網篩(shai)過濾後(hou)使(shi)用(yong)膠原酶(mei)消化(hua)制(zhi)備而來(lai)，細胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大鼠(shu)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)經(jing)α-SMA免(mian)疫熒光鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公司(si)所(suo)有產品(pin)僅供科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實驗外(wai)的使(shi)用(yong)！

包被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換液壹(yi)次(ci)

生長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形態 成纖維細胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可(ke)傳(chuan)1-2代(dai)

消化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗(yan)器材準備：準備無菌(jun)的(de)培養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心(xin)管、手術器械等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合(he)適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準備：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試劑，確(que)保(bao)其無菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動物或組織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇合適的(de)動物並(bing)進行(xing)相應(ying)的(de)麻醉或處死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或從已(yi)有的(de)組織(zhi)樣(yang)本庫中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出(chu)目標組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組織(zhi)的(de)損傷，並(bing)去除多余的(de)脂肪(fang)、結締組織(zhi)等(deng)非(fei)目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數次(ci)，以(yi)去除血(xue)液和(he)雜質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有適量(liang)消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管，使消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消化(hua)成單細胞懸液或小細胞團(tuan)時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的培養基終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用細胞篩(shai)過濾細胞懸液，去除未(wei)消化(hua)的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細胞沈(chen)澱(dian)。

細胞觀察與檢測

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒置顯(xian)微鏡(jing)觀察細胞的形態、生長狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄細胞的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發現細胞汙(wu)染(ran)或異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計(ji)數與(yu)活(huo)力(li)檢測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色等(deng)方法(fa)對細胞進行(xing)計(ji)數和(he)活(huo)力(li)檢測，以了解細胞的生長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織(zhi)取材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避免(mian)長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或非(fei)營(ying)養環境。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生理(li)鹽水(shui)沖洗組織(zhi)，去除血(xue)液、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型選擇消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度(du)消化(hua)導致細胞損傷。

- 消化(hua)時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察細胞解離(li)狀態。

二(er)、培養條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基選擇

- 使用含(han)血(xue)清(qing)或特定生(sheng)長因子(zi)的(de)培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁(fan)更換培養基品(pin)牌或批次(ci)，減少細胞適應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合會導致接(jie)觸抑制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程在超(chao)凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材，避免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長期使(shi)用可(ke)能影響細胞活性。

2. 支原體(ti)檢測

- 定期(qi)檢測支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀態監控

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢查細胞形態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更換培養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細胞變(bian)圓、碎(sui)片增多）可(ke)能提示(shi)汙(wu)染(ran)或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原代(dai)細胞分(fen)裂次數有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍存液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專用凍存培養基），梯度(du)降溫後(hou)液氮(dan)保(bao)存。