【概(gai)要描(miao)述(shu)】大鼠支氣管上(shang)皮(pi)細胞公(gong)司正在出售的(de)產品：COR-L105非小(xiao)細胞肺(fei)癌大鼠三叉神(shen)經元細胞大鼠脊髓(sui)成纖維(wei)細胞大鼠嗅鞘細胞大鼠嗅球神(shen)經幹(gan)細胞大鼠海(hai)馬神(shen)經(jing)幹(gan)細胞大鼠杏仁(ren)核神經元細胞大鼠角膜上(shang)皮(pi)細胞大鼠角膜基(ji)質(zhi)細胞大鼠視網膜(mo)色上(shang)皮(pi)細胞

大鼠支氣管上(shang)皮(pi)分離(li)自(zi)支(zhi)氣(qi)管組織；支氣(qi)管（Bronchi），是(shi)指(zhi)由(you)氣(qi)管分出的(de)各(ge)級分(fen)枝，由(you)氣(qi)管分出的(de)壹(yi)級支(zhi)氣(qi)管，即左(zuo)、右(you)主支氣(qi)管。左(zuo)主(zhu)支氣管與右主支氣(qi)管相比較，前(qian)者較細長(chang)，走向傾斜；後(hou)者較粗(cu)短(duan)，走向較前(qian)者略(lve)直(zhi)，所(suo)以經氣管墮(duo)入(ru)的(de)異(yi)物(wu)多(duo)進(jin)入(ru)右(you)主(zhu)支(zhi)氣(qi)管。支氣管和氣(qi)管還有(you)以區別就(jiu)是(shi)，氣(qi)管是(shi)以“C"型的(de)氣(qi)管軟骨為支(zhi)架(jia)，而支氣(qi)管不是(shi)。支(zhi)氣管上(shang)皮(pi)是(shi)氣(qi)道(dao)與外(wai)界(jie)環境接觸的(de)道(dao)防線(xian)，不僅(jin)是(shi)各(ge)種病原體(ti)、炎癥(zheng)介質(zhi)作用的(de)靶(ba)細胞，還(hai)作為效(xiao)應(ying)細胞合成、釋放(fang)多(duo)種(zhong)炎(yan)性(xing)介(jie)質(zhi)和細胞因(yin)子(zi)，從(cong)而參(can)與(yu)氣道(dao)炎癥(zheng)及免疫(yi)反應(ying)。支氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞在(zai)哮(xiao)喘、慢(man)性(xing)阻(zu)塞性(xing)肺(fei)疾病、肺癌(ai)、肺(fei)囊性(xing)纖(xian)維(wei)化(hua)以及壹(yi)些(xie)感染(ran)性(xing)呼(hu)吸(xi)道(dao)疾病的(de)發(fa)病機制(zhi)中均(jun)起著(zhe)重要(yao)的(de)作(zuo)用。體(ti)外(wai)培養(yang)的(de)原代(dai)支氣(qi)管上(shang)皮(pi)細胞因(yin)與體(ti)內組織在形(xing)態結(jie)構(gou)和功能(neng)活動上(shang)存在很大的(de)相(xiang)似(si)性(xing)，因(yin)此(ci)，在(zai)基(ji)礎(chu)及臨床(chuang)研(yan)究中(zhong)極(ji)為重要(yao)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大鼠支氣管上(shang)皮(pi)采用鏈(lian)黴(mei)蛋白-中性(xing)蛋白混合消(xiao)化(hua)法結(jie)合機(ji)械(xie)刮刷(shua)並通(tong)過上(shang)皮(pi)細胞專用培養(yang)基(ji)培養(yang)篩選(xuan)制(zhi)備而來，細胞總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大鼠支氣管上(shang)皮(pi)經PCK免疫(yi)熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌、酵母(mu)和真(zhen)菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司所有(you)產品僅(jin)供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用！

包被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態 上(shang)皮(pi)細胞樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可傳1-2代(dai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培養(yang)條件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗(yan)器材準備：準備無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心(xin)管、手術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他合適的(de)消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且在有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或(huo)組織來源準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇合適的(de)動物(wu)並進(jin)行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取所需(xu)組織；或(huo)從已(yi)有(you)的(de)組織樣本(ben)庫中獲取組織。

取材與(yu)處(chu)理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅(xun)速取出目標(biao)組織，盡量(liang)減少(shao)對組織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結(jie)締(di)組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎的(de)組織塊放入(ru)含(han)有(you)適量(liang)消化酶的(de)離(li)心(xin)管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管，使消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消(xiao)化(hua)：當組織塊大部分(fen)被(bei)消(xiao)化成單細胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消化(hua)的(de)組織碎片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以適當的(de)轉(zhuan)速離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞沈(chen)澱。

細胞觀察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天用倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細胞的(de)變化(hua)情況，如發(fa)現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常，及時采(cai)取相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數與活力(li)檢測(ce)：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞進(jin)行(xing)計數和活力(li)檢測(ce)，以了解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情況和健康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組織取材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非營養(yang)環境。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選擇

- 根(gen)據(ju)組織類型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶，避免過度消化導致(zhi)細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微(wei)鏡觀察細胞解(jie)離狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用含血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需(xu)添(tian)加胰(yi)島素、EGF 等。

- 避免頻繁更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)品牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可能(neng)影響細胞活性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄細胞。

四、狀(zhuang)態監(jian)控

1. 日(ri)常觀察

- 每(mei)天檢查(zha)細胞形(xing)態、密(mi)度及培養(yang)基(ji)顏色，及時更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常形態（如細胞變圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原代(dai)細胞分(fen)裂次(ci)數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍存早(zao)期代(dai)次細胞。

- 凍存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用凍存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保存。