【概要(yao)描述】大(da)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)細(xi)胞公司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的產品(pin)：COR-L23非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺癌(ai)大(da)鼠(shu)視網(wang)膜(mo)微(wei)血管內(nei)皮細(xi)胞大(da)鼠(shu)牙(ya)周(zhou)膜(mo)成纖維細(xi)胞大(da)鼠(shu)牙(ya)周(zhou)膜(mo)幹細(xi)胞大(da)鼠(shu)牙(ya)髓幹細(xi)胞大(da)鼠(shu)口(kou)腔(qiang)黏膜(mo)上皮細(xi)胞大(da)鼠(shu)舌(she)表(biao)皮(pi)細(xi)胞大(da)鼠(shu)鼓(gu)膜(mo)上皮幹細(xi)胞大(da)鼠(shu)角(jiao)膜(mo)內(nei)皮細(xi)胞大(da)鼠(shu)鞏(gong)膜(mo)上皮細(xi)胞

大(da)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)分(fen)離自支(zhi)氣(qi)管組織；支(zhi)氣(qi)管（Bronchi），是指(zhi)由(you)氣(qi)管分出(chu)的(de)各(ge)級(ji)分(fen)枝，由(you)氣(qi)管分出(chu)的(de)壹(yi)級(ji)支(zhi)氣(qi)管，即左(zuo)、右主(zhu)支(zhi)氣(qi)管。左(zuo)主支(zhi)氣(qi)管與(yu)右主(zhu)支(zhi)氣(qi)管相比(bi)較(jiao)，前(qian)者(zhe)較(jiao)細(xi)長(chang)，走向(xiang)傾(qing)斜(xie)；後(hou)者(zhe)較(jiao)粗短，走(zou)向(xiang)較(jiao)前(qian)者(zhe)略直(zhi)，所(suo)以(yi)經氣(qi)管墮入(ru)的異物(wu)多進(jin)入(ru)右主(zhu)支(zhi)氣(qi)管。支(zhi)氣(qi)管和氣(qi)管還有(you)以(yi)區別(bie)就是(shi)，氣(qi)管是以(yi)“C"型的氣(qi)管軟骨為(wei)支(zhi)架(jia)，而(er)支(zhi)氣(qi)管不是(shi)。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞（Fibroblast）是疏(shu)松(song)結締(di)組織的(de)主(zhu)要(yao)細(xi)胞成分(fen)，由(you)胚(pei)胎時(shi)期(qi)的(de)間(jian)充質(zhi)細(xi)胞分化(hua)而(er)來。成纖維細(xi)胞較(jiao)大(da)，輪廓(kuo)清楚(chu)，多為(wei)突(tu)起(qi)的紡錘形或(huo)星形的扁(bian)平(ping)狀結構(gou)，其(qi)細(xi)胞核(he)呈規則(ze)的卵(luan)圓形，核(he)仁大(da)而(er)明顯。成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞功能(neng)活動(dong)旺(wang)盛，細(xi)胞質(zhi)嗜(shi)弱堿性，具明顯的(de)蛋(dan)白質(zhi)合(he)成和分(fen)泌(mi)活動(dong)，在(zai)壹(yi)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)，它可以(yi)實現(xian)跟(gen)纖(xian)維細(xi)胞的互(hu)相轉(zhuan)化(hua)；成纖(xian)維細(xi)胞對不(bu)同(tong)程度的細(xi)胞變性、壞死和組織缺(que)損(sun)的修(xiu)復(fu)有著十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作(zuo)用(yong)。剛分(fen)離的(de)支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)細(xi)胞呈圓(yuan)形、折光性(xing)良好(hao)，懸浮(fu)於培養(yang)基中(zhong)。30min細(xi)胞貼壁(bi)，其(qi)中(zhong)部分(fen)開(kai)始(shi)伸(shen)出(chu)偽(wei)足(zu)，表(biao)現(xian)為(wei)小(xiao)的突(tu)起(qi)；6h後(hou)細(xi)胞基本貼(tie)壁wan全(quan)，伸(shen)展(zhan)成梭形，胞核(he)清晰(xi)，分布(bu)較(jiao)均勻(yun)，散(san)在(zai)生長(chang)，不聚集成(cheng)團(tuan)；細(xi)胞生長(chang)迅速(su)，5-7天(tian)即呈(cheng)融(rong)合(he)狀態(tai)，細(xi)胞排列緊(jin)密(mi)，有(you)的(de)交(jiao)叉(cha)重(zhong)疊(die)生長(chang)，平坦、胞體較(jiao)大(da)，細(xi)胞質(zhi)透明，細(xi)胞核(he)較(jiao)大(da)，呈(cheng)橢圓形，顏色(se)淡。細(xi)胞融(rong)合(he)，並彼(bi)此(ci)連接(jie)成網(wang)狀；細(xi)胞呈突(tu)起(qi)的紡錘形或(huo)星形的扁(bian)平(ping)分布。支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)細(xi)胞在(zai)生理條件(jian)下(xia)的(de)主(zhu)要(yao)功能(neng)包(bao)括：構造和維(wei)持(chi)組織的(de)正(zheng)常(chang)形態，合(he)成和釋(shi)放細(xi)胞外(wai)基質(zhi)以(yi)及組織損(sun)傷(shang)後(hou)及(ji)時大(da)量聚(ju)集(ji)修(xiu)復(fu)損傷組織。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的大(da)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)采(cai)用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)-聯(lian)合(he)消化(hua)法(fa)結合(he)差速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)制備(bei)而(er)來，細(xi)胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的大(da)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成纖(xian)維(wei)經Vimentin免疫熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵母(mu)和真(zhen)菌(jun)等。

本公司(si)所有(you)產品(pin)僅(jin)供科(ke)學實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

培養(yang)基 含FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼壁

細(xi)胞形態 成纖維(wei)細(xi)胞樣

傳代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右；3代(dai)以(yi)內(nei)狀態(tai)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管、手術器械等，並進(jin)行(xing)高壓滅菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試劑準(zhun)備：配制或(huo)購買(mai)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等）、胎牛血清、雙(shuang)抗等試劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組織來源準(zhun)備：根據實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死，獲取(qu)所(suo)需組織；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組織，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織的(de)損(sun)傷，並去(qu)除多余的脂肪、結締(di)組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的(de)組織用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎的(de)組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕搖晃離心(xin)管，使(shi)消化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成單細(xi)胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含血清的(de)培養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未(wei)消化(hua)的組織碎片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉速(su)離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與(yu)檢測

1. 日常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞的形態、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等，記錄(lu)細(xi)胞的變化(hua)情況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異常(chang)，及(ji)時采取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞計數(shu)與(yu)活力(li)檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時，可采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色(se)等方法(fa)對細(xi)胞進(jin)行(xing)計數(shu)和活(huo)力(li)檢測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞的生長(chang)情況和健(jian)康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根據組織類(lei)型選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過(guo)度消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞損傷(shang)。

- 消化(hua)時間(jian)需嚴格(ge)控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過顯微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞解(jie)離(li)狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清或(huo)特定(ding)生長(chang)因子的培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需添(tian)加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁(fan)更(geng)換培養(yang)基品(pin)牌或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建(jian)議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合(he)會導致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全程在(zai)超(chao)凈臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響細(xi)胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定(ding)期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態、密(mi)度及培養(yang)基顏色(se)，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞變圓、碎片增多）可能(neng)提示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分裂(lie)次數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培養(yang)基），梯度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮(dan)保存(cun)。