【概要描(miao)述(shu)】大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)細(xi)胞(bao)公司正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：Calu-3非小細(xi)胞(bao)肺癌(ai)大鼠(shu)真皮(pi)毛(mao)乳頭細(xi)胞(bao)大鼠(shu)外根(gen)鞘細(xi)胞(bao)大鼠(shu)毛(mao)囊(nang)角質細(xi)胞(bao)大鼠(shu)骨髓間(jian)充(chong)質幹細(xi)胞(bao)大鼠(shu)脂肪(fang)幹細(xi)胞(bao)大鼠(shu)滑(hua)膜(mo)間充(chong)質幹細(xi)胞(bao)大鼠(shu)毛(mao)囊(nang)幹細(xi)胞(bao)大鼠(shu)膈肌細(xi)胞(bao)大鼠(shu)肌腱(jian)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)

大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)分(fen)離自肺組(zu)織；肺泡(pao)由(you)單層(ceng)上皮(pi)細(xi)胞(bao)構成(cheng)的半(ban)球(qiu)狀囊泡(pao)。肺中的支(zhi)氣(qi)管經(jing)多(duo)次(ci)反復(fu)分(fen)枝成(cheng)無(wu)數細(xi)支(zhi)氣(qi)管，它(ta)們的末(mo)端(duan)膨大成(cheng)囊，囊(nang)的(de)四周(zhou)有很(hen)多(duo)突出的小囊泡(pao)，即為肺泡(pao)。小肺泡(pao)細(xi)胞(bao)，又稱I型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)，厚約0.1微米(mi)，基(ji)底(di)部是基(ji)底(di)膜(mo)，無(wu)增殖(zhi)能力(li)。大肺泡(pao)細(xi)胞(bao)，又稱Ⅱ型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)，分泌表面(mian)活性物(wu)質（二棕櫚酰(xian)卵(luan)磷），以降(jiang)低肺泡(pao)表面(mian)張(zhang)力(li)。Ⅱ型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)位於Ⅰ型(xing)肺泡(pao)細(xi)胞(bao)之(zhi)間，數(shu)量較Ⅰ型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)多(duo)，但覆(fu)蓋(gai)面(mian)積比Ⅰ型(xing)肺泡(pao)細(xi)胞(bao)小。細(xi)胞(bao)立方形(xing)或(huo)圓(yuan)形(xing),頂端(duan)突入(ru)肺泡(pao)腔(qiang)。細(xi)胞(bao)核圓(yuan)形(xing)，胞(bao)質著(zhe)色(se)淺、呈(cheng)泡(pao)沫(mo)狀(zhuang)。電(dian)鏡下(xia)，細(xi)胞(bao)遊離而有少(shao)量微絨毛(mao)，胞(bao)質內富(fu)含線粒體和(he)溶(rong)酶體，有較發達的粗(cu)面(mian)內質網(wang)和(he)高(gao)爾基(ji)復(fu)合(he)體。核上方有較多(duo)的分(fen)泌(mi)顆粒，電(dian)子(zi)密度高(gao)、大小不等，直徑(jing)約0.1-1.0μm顆粒內含有平(ping)行排(pai)列的板層狀(zhuang)結(jie)構(gou)，稱為嗜餓性板層小體。小體內的(de)主要成(cheng)分為(wei)磷脂，以(yi)二棕櫚酰(xian)卵(luan)磷為主，此(ci)外(wai)還有糖(tang)胺(an)多(duo)糖(tang)及蛋白質等。顆粒內物(wu)質釋(shi)放(fang)出來後(hou)，在(zai)肺泡(pao)表面(mian)形(xing)成(cheng)壹層(ceng)粘液(ye)層，稱為表面(mian)活性物(wu)質（surfactant）。表面(mian)活性物(wu)質有降(jiang)低肺泡(pao)表面(mian)張(zhang)力(li)、穩定(ding)肺泡(pao)大小的作(zuo)用。呼(hu)氣(qi)時(shi)肺泡(pao)縮(suo)小，表面(mian)活性物(wu)質密度增加(jia)，表面(mian)張(zhang)力(li)降(jiang)低，防(fang)止(zhi)肺泡(pao)過(guo)度塌陷；吸氣(qi)時(shi)肺泡(pao)擴(kuo)張(zhang)，表面(mian)活性物(wu)質密度減小，肺泡(pao)回(hui)縮(suo)力(li)加(jia)大，可(ke)防(fang)止(zhi)肺泡(pao)過(guo)度膨脹。表面(mian)活性物(wu)質的缺乏或(huo)變性(xing)均(jun)可(ke)引(yin)起(qi)肺不張(zhang)，過(guo)度通氣(qi)可(ke)造(zao)成(cheng)表面(mian)活性物(wu)質缺乏；吸入(ru)毒氣(qi)可(ke)直(zhi)接(jie)破壞表面(mian)活性物(wu)質。Ⅱ型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)有分(fen)裂、增殖(zhi)並(bing)分化為Ⅰ型肺泡(pao)細(xi)胞(bao)的潛能，故具有修復(fu)受(shou)損(sun)傷(shang)上皮(pi)的(de)作(zuo)用。
方法(fa)簡介(jie)：

公司實驗(yan)室分離的大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)采(cai)用彈(dan)性(xing)蛋白酶灌註(zhu)消(xiao)化法(fa)結(jie)合(he)差速(su)貼(tie)壁法，並(bing)通過(guo)上皮(pi)細(xi)胞(bao)專用培養基(ji)培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備而來，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測(ce)：

公司實驗(yan)室分離的大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)經(jing)SP-C免(mian)疫(yi)熒光鑒定(ding)，純度可(ke)達90%以上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司所有產(chan)品(pin)僅(jin)供科學實驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他科學實驗(yan)外的使用！

包被條(tiao)件 鼠(shu)尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率 每2-3天換(huan)液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 上皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

傳代(dai)特性(xing) 可(ke)傳(chuan)1-2代

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適的(de)消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如、膠原酶等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有效(xiao)期內。

3. 實驗(yan)動物或組(zu)織來源準備(bei)：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進行相應(ying)的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組(zu)織；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織樣本庫(ku)中獲(huo)取組(zu)織。

取材與處理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目標組(zu)織，盡(jin)量減少對組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去除多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組(zu)織等(deng)非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出的組(zu)織用預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次(ci)，以去(qu)除血液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入含有適(shi)量消(xiao)化酶的離心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖(yao)晃離心管，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的(de)培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離心：用細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去除(chu)未消(xiao)化的(de)組(zu)織碎(sui)片，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每天用倒置顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變化(hua)情(qing)況，如發(fa)現細(xi)胞(bao)汙染(ran)或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力(li)檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進行計數和(he)活力(li)檢測(ce)，以了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材與分離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織取材後(hou)需(xu)立即處理(li)，避免長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於室(shi)溫或非營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜質。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織類(lei)型(xing)選擇(ze)消(xiao)化酶，避免過(guo)度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件優化

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使用含血清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌或(huo)批次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與傳代

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包被培養皿（如膠原蛋白、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使用壹次(ci)性耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期使用可(ke)能影(ying)響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每天檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度及培養(yang)基(ji)顏色(se)，及(ji)時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮保存(cun)。