【概要(yao)描(miao)述】兔尿道平滑(hua)肌細(xi)胞的(de)相(xiang)關(guan)產品(pin)：hela/gfp (STR)人宮頸(jing)癌細(xi)胞人原(yuan)代(dai)少突(tu)膠(jiao)質細(xi)胞人原(yuan)代(dai)肥(fei)胖(pang)脂(zhi)肪(fang)幹(gan)細(xi)胞人原(yuan)代(dai)臍動(dong)脈內(nei)皮細(xi)胞大(da)鼠原(yuan)代(dai)腦血管(guan)成纖維細(xi)胞兔(tu)原(yuan)代(dai)下丘腦神經(jing)元細(xi)胞大(da)鼠原(yuan)代(dai)內(nei)括約(yue)肌平(ping)滑肌細(xi)胞小鼠原(yuan)代(dai)角膜(mo)內(nei)皮細(xi)胞兔(tu)原(yuan)代(dai)鼻腔(qiang)粘膜(mo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞人腦血管(guan)外膜(mo)成纖維細(xi)胞

兔尿道平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞

培養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天換液壹(yi)次(ci)；

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼壁

細(xi)胞形(xing)態(tai) 成纖維細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可傳3-5代(dai)左右

消化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

兔尿道平(ping)滑(hua)肌(ji)分離(li)自(zi)尿(niao)道(dao)管組織(zhi)；尿(niao)道是(shi)從(cong)膀胱(guang)通向(xiang)體(ti)外的(de)管(guan)道(dao)。起自(zi)膀(pang)胱(guang)的(de)尿(niao)道(dao)內(nei)口(kou)，止於尿道外口(kou)，行程中(zhong)通過(guo)前列(lie)腺部、膜(mo)部和(he)陰莖海綿體(ti)部，尿(niao)道(dao)在尿道(dao)膜部有(you)壹(yi)環(huan)橫(heng)行(xing)紋肌(ji)構(gou)成的(de)括(kuo)約(yue)肌，稱為尿(niao)道(dao)外括(kuo)約肌，由(you)意(yi)識控(kong)制(zhi)。尿(niao)道(dao)有三個解(jie)剖(pou)上(shang)的(de)較(jiao)狹部和(he)膨大(da)部，前(qian)者(zhe)分別位於外口(kou)、膜部和(he)內(nei)口(kou)，後者位於舟(zhou)狀窩(wo)、球部和(he)前(qian)列腺部。尿(niao)道(dao)壁為粘(zhan)膜(mo)層、粘膜(mo)下(xia)層和(he)肌(ji)肉層所(suo)組(zu)成(cheng)。在前尿(niao)道的(de)外面(mian)，還(hai)包(bao)有(you)豐(feng)富的(de)彈力(li)纖維和(he)平(ping)滑肌纖維的(de)尿(niao)道(dao)海綿體(ti)。尿(niao)道粘膜上(shang)皮(pi)在前列(lie)腺部為移行(xing)上(shang)皮(pi)(近(jin)膀(pang)胱(guang)部)，壹(yi)部分為多(duo)列(lie)或復層柱(zhu)狀上(shang)皮(pi)，在有尿(niao)道海綿體(ti)的(de)壹(yi)部分尿道，主要(yao)為復層柱(zhu)狀上(shang)皮(pi)，在皺襞上(shang)也有(you)單(dan)層柱(zhu)狀上(shang)皮(pi)。特(te)別(bie)在舟狀(zhuang)窩內(nei)有許(xu)多環(huan)狀細(xi)胞，舟(zhou)狀(zhuang)窩的(de)遠(yuan)端(duan)部開(kai)始(shi)有(you)未(wei)角(jiao)化(hua)的(de)復層鱗(lin)狀上(shang)皮(pi)。粘(zhan)膜(mo)下層血液供(gong)應豐(feng)富，主(zhu)要(yao)為結(jie)締組(zu)織(zhi)。肌(ji)肉層有縱行(xing)肌和(he)外環(huan)形肌(ji)。
方法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實驗室(shi)分離(li)的(de)兔(tu)尿(niao)道平(ping)滑(hua)肌(ji)采(cai)用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混(hun)合消化(hua)法(fa)結(jie)合差(cha)速貼壁法(fa)，並(bing)通(tong)過(guo)平(ping)滑肌細(xi)胞專(zhuan)用(yong)培養基(ji)培養篩(shai)選(xuan)制備而來(lai)，細(xi)胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測(ce)：

公司(si)實驗室(shi)分離(li)的(de)兔(tu)尿(niao)道平(ping)滑(hua)肌(ji)經(jing)α-SMA免疫熒光鑒(jian)定，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等(deng)。

壹(yi)、細(xi)胞培養

1取材 在無菌(jun)環(huan)境下(xia)從(cong)機體(ti)取(qu)出(chu)某(mou)種組織(zhi)細(xi)胞（視(shi)實驗目(mu)的(de)而定(ding)），經(jing)過(guo)壹(yi)定(ding)的(de)處(chu)理(li)（如消化(hua)分散(san)細(xi)胞、分離(li)等(deng)）後(hou)接(jie)入(ru)培養器血中(zhong)，這壹(yi)過(guo)程稱為取(qu)材(cai)。如是(shi)細(xi)胞株(zhu)的(de)擴(kuo)大(da)培養則無取(qu)材這(zhe)壹(yi)過(guo)程。機體(ti)取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)細(xi)胞的(de)培養稱為原(yuan)代(dai)培養。2培養 將取得(de)的(de)組(zu)織(zhi)細(xi)胞接(jie)入(ru)培養瓶或培養板中(zhong)的(de)過(guo)程稱為培養。3凍存及(ji)復蘇(su)（可參(can)閱(yue)後(hou)面(mian)有(you)關(guan)章(zhang)節(jie)）為了(le)保(bao)存細(xi)胞，特(te)別(bie)是(shi)不(bu)易(yi)獲得(de)的(de)突(tu)變(bian)型(xing)細(xi)胞或(huo)細(xi)胞株(zhu)，要(yao)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)。凍存(cun)的(de)溫(wen)度(du)壹(yi)般(ban)用(yong)液氮的(de)溫(wen)度(du)－196℃，將細(xi)胞收集至凍存(cun)管中(zhong)加入(ru)含(han)保(bao)護劑(ji)（壹(yi)般(ban)為二甲亞碸或甘(gan)油(you)）的(de)培養基(ji)，以(yi)壹(yi)定(ding)的(de)冷(leng)卻速(su)度凍(dong)存(cun)，最(zui)終保存於液氮中(zhong)。在極低(di)的(de)溫(wen)度(du)下，細(xi)胞保(bao)存(cun)的(de)時間(jian)幾(ji)乎(hu)是(shi)無限的(de)。復蘇(su)壹(yi)般(ban)采用(yong)快融(rong)方(fang)法(fa)，即從(cong)液氮中(zhong)取出(chu)凍存(cun)管後，立即放(fang)入37℃水中(zhong)，使之(zhi)在壹(yi)分鐘(zhong)內(nei)迅(xun)速融(rong)解(jie)。然(ran)後(hou)將(jiang)細(xi)胞轉(zhuan)入培養器皿中(zhong)進行(xing)培養。

二、原(yuan)代(dai)細(xi)胞分離(li)

凡是(shi)來源於胚(pei)胎、組(zu)織(zhi)器(qi)官及(ji)外周(zhou)血，經特(te)殊(shu)分離(li)方(fang)法(fa)制(zhi)備而來(lai)的(de)原(yuan)初(chu)培養的(de)細(xi)胞稱之(zhi)為原(yuan)代(dai)細(xi)胞。1懸浮細(xi)胞的(de)分離(li)方(fang)法(fa)組(zu)織(zhi)材(cai)料(liao)若來自(zi)血液、羊水、胸水或(huo)腹水的(de)懸液材料(liao)，的(de)方(fang)法(fa)是(shi)采用(yong)1000r/min的(de)低(di)速(su)離(li)心(xin)10分鐘(zhong)。經離(li)心(xin)後(hou)由(you)於各種細(xi)胞的(de)比(bi)重(zhong)不(bu)同(tong)可在分層液中(zhong)形成(cheng)不(bu)同(tong)層，這樣(yang)可根(gen)據需(xu)要(yao)收獲目(mu)的(de)細(xi)胞。2實體組(zu)織(zhi)材(cai)料(liao)的(de)分離(li)方(fang)法(fa)對(dui)於(yu)實體組(zu)織(zhi)材(cai)料(liao)，由於(yu)細(xi)胞間(jian)結(jie)合緊密，為了(le)使組織(zhi)中(zhong)的(de)細(xi)胞充(chong)分分散(san)，形(xing)成細(xi)胞懸液，可采(cai)用(yong)機(ji)械(xie)分散(san)法(fa)（物(wu)理(li)裂(lie)解(jie)）和(he)消化(hua)分離(li)法(fa)。

三、細(xi)胞增(zeng)殖(zhi)檢測(ce)技(ji)術(shu)

目(mu)前主要(yao)有兩(liang)種用(yong)於(yu)檢測(ce)細(xi)胞增(zeng)殖(zhi)能力(li)的(de)方(fang)法(fa)。壹(yi)種是(shi)直接(jie)的(de)方(fang)法(fa)，通(tong)過(guo)直接(jie)測(ce)定進行分裂

的(de)細(xi)胞數(shu)來(lai)評價(jia)細(xi)胞的(de)增(zeng)殖(zhi)能力(li)。另壹(yi)種是(shi)間接(jie)的(de)方(fang)法(fa)，即細(xi)胞活(huo)力(li)（cell viability）檢測(ce)方(fang)法(fa)，通(tong)過(guo)檢測(ce)樣(yang)品(pin)中(zhong)健康(kang)細(xi)胞的(de)數(shu)目(mu)來評價(jia)細(xi)胞的(de)增(zeng)殖(zhi)能力(li)。顯然(ran)，細(xi)胞活(huo)力(li)檢測(ce)法(fa)並(bing)不(bu)能(neng)最(zui)終證明(ming)檢測(ce)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)細(xi)胞是(shi)否(fou)在增殖(zhi)。如細(xi)胞在某(mou)壹(yi)培養條(tiao)件(jian)下會自(zi)發啟(qi)動雕(diao)亡程序，但藥物(wu)的(de)幹(gan)擾(rao)可抑(yi)制雕(diao)亡的(de)發生(sheng)；這(zhe)時若采用(yong)細(xi)胞活(huo)力(li)檢測(ce)法(fa)，顯然(ran)可以(yi)區(qu)分兩(liang)種條(tiao)件(jian)下的(de)細(xi)胞數(shu)量，但我們並(bing)不(bu)能(neng)從(cong)藥物(wu)幹(gan)擾(rao)組細(xi)胞數(shu)大(da)於對(dui)照(zhao)組的(de)事(shi)實說明(ming)藥(yao)物(wu)可促進(jin)細(xi)胞增(zeng)殖(zhi)的(de)結(jie)論(lun)。所(suo)以(yi)最直接(jie)的(de)證(zheng)據(ju)應該(gai)采用(yong)方(fang)法(fa)壹(yi)。

取材：首(shou)先，用(yong)培養液濕潤(run)所(suo)取(qu)的(de)組(zu)織(zhi)材(cai)料(liao)，並用(yong)鋒(feng)利(li)的(de)眼(yan)科剪(jian)去(qu)除(chu)附(fu)在其上(shang)的(de)脂(zhi)肪(fang)和(he)結(jie)締組(zu)織(zhi)。接(jie)著(zhe)用(yong)平(ping)衡(heng)液（如PBS或(huo)Hanks液）漂洗，再(zai)用(yong)眼(yan)科彎剪(jian)將(jiang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)剪(jian)成(cheng)小塊(kuai)。多(duo)次(ci)用(yong)PBS或(huo)Hanks液漂洗，直到(dao)液體清(qing)亮、無油(you)滴為止(zhi)。

接(jie)種：用(yong)濕(shi)潤(run)的(de)吸(xi)管(guan)吸取(qu)切碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)，輕(qing)輕(qing)吹到(dao)培養瓶皿中(zhong)，並按(an)壹(yi)定(ding)間距(ju)均勻放(fang)在培養瓶底壁上(shang)。註意(yi)不(bu)要(yao)過多(duo)，確保(bao)組織(zhi)塊(kuai)切面(mian)貼(tie)在培養瓶底壁上(shang)。

培養：將培養瓶翻轉(zhuan)，使瓶底朝(chao)上(shang)，在種植(zhi)了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)壹(yi)側(ce)的(de)對(dui)側(ce)面(mian)加(jia)足(zu)培養液，避(bi)免組(zu)織(zhi)塊(kuai)與(yu)培養液接(jie)觸(chu)，然(ran)後(hou)塞(sai)緊瓶塞(sai)。將種植(zhi)了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)的(de)壹(yi)側(ce)朝上(shang)，靜(jing)置(zhi)於(yu)37℃培養箱中(zhong)。待組(zu)織(zhi)塊(kuai)貼壁1到(dao)3小時後(hou)翻(fan)瓶，使貼壁的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)浸(jin)沒(mei)在培養液中(zhong)，繼續靜置(zhi)。換液：每(mei)隔(ge)2到(dao)3天(tian)更(geng)換(huan)壹(yi)次(ci)培養液，或者(zhe)根(gen)據(ju)培養瓶種顏色的(de)變(bian)化(hua)確定(ding)換(huan)液時間(jian)。

壹(yi)、原(yuan)代(dai)細(xi)胞計(ji)數(shu)

將血球計數(shu)板及(ji)蓋片用(yong)擦(ca)試幹(gan)凈(jing)，並將蓋片蓋在計數(shu)板上(shang)。

將細(xi)胞懸液吸出(chu)少(shao)許(xu)，滴加在蓋片邊(bian)緣，使懸液充(chong)滿(man)蓋片和(he)計(ji)數(shu)板之(zhi)間。

靜置3分鐘(zhong)。

鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，計(ji)算計數(shu)板四大(da)格細(xi)胞總數(shu)，壓(ya)線細(xi)胞只(zhi)計(ji)左側(ce)和(he)上(shang)方(fang)的(de)。然(ran)後(hou)按(an)下式(shi)計算：

細(xi)胞數(shu)/ml＝4大(da)格細(xi)胞總數(shu)/ 4×10000

註意(yi)：鏡(jing)下(xia)偶見(jian)由(you)兩(liang)個(ge)以(yi)上(shang)細(xi)胞組(zu)成(cheng)的(de)細(xi)胞團，應按(an)單(dan)個細(xi)胞計(ji)算，若細(xi)胞團占(zhan)10%以(yi)上(shang)，說(shuo)明(ming)分散(san)不(bu)好(hao)，需(xu)重(zhong)新(xin)制備細(xi)胞懸液。

二、原(yuan)代(dai)細(xi)胞活(huo)力(li)

將細(xi)胞懸液以(yi)0.5ml加入試(shi)管中(zhong)。

加入0.5ml 0.4%臺盼(pan)蘭(lan)染液，染色2壹(yi)3分鐘(zhong)。

吸取少許(xu)懸液塗於載玻片上(shang)，加(jia)上(shang)蓋片。

鏡(jing)下(xia)取幾(ji)個任意(yi)視野分別計死細(xi)胞和(he)活(huo)細(xi)胞數(shu)，計(ji)細(xi)胞活(huo)力(li)。

死細(xi)胞能(neng)被(bei)臺盼(pan)蘭(lan)染上(shang)色，鏡(jing)下(xia)可見(jian)深蘭色的(de)細(xi)胞，活(huo)細(xi)胞不(bu)被(bei)染色，鏡(jing)下(xia)呈無色透(tou)明(ming)狀(zhuang)。

活力測定(ding)可以(yi)和(he)細(xi)胞計(ji)數(shu)合起來(lai)進(jin)行，但要(yao)考(kao)慮(lv)到(dao)染液對(dui)原(yuan)細(xi)胞懸液的(de)加(jia)倍(bei)稀(xi)釋作(zuo)用(yong)。