【概(gai)要描(miao)述】兔前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)的(de)相關產品(pin)：A549/Tax人肺腺(xian)癌耐(nai)藥性細胞(bao)大(da)鼠原(yuan)代(dai)主動(dong)脈(mai)外膜(mo)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)人原(yuan)代(dai)胰腺(xian)星狀(zhuang)細胞(bao)大(da)鼠原(yuan)代(dai)嗅鞘細胞(bao)小鼠原(yuan)代(dai)雪旺(wang)細胞(bao)人原(yuan)代(dai)牙髓(sui)幹(gan)細胞(bao)大(da)鼠原(yuan)代(dai)DRG神經元(yuan)細胞(bao)人原(yuan)代(dai)結直(zhi)腸(chang)癌相關成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)大(da)鼠原(yuan)代(dai)肝(gan)內膽(dan)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)人原(yuan)代(dai)B淋巴細胞(bao)

兔前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特性 可(ke)傳5代(dai)左(zuo)右；3代以(yi)內狀(zhuang)態

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔前(qian)脂肪(fang)分離(li)自脂肪(fang)組(zu)織；脂肪(fang)組(zu)織主(zhu)要由大量(liang)群(qun)集(ji)的脂肪(fang)細胞(bao)構(gou)成(cheng)，聚集(ji)成(cheng)團的(de)脂肪(fang)細胞(bao)由薄層(ceng)疏(shu)松(song)結(jie)締組(zu)織分隔(ge)成(cheng)小葉；貯(zhu)存(cun)的脂肪(fang)，在(zai)需要時(shi)可迅(xun)速(su)分解(jie)成(cheng)甘油(you)和(he)脂肪(fang)酸(suan)，經(jing)血(xue)液輸送到(dao)各組(zu)織以(yi)供利用。它們(men)影(ying)響(xiang)胰島(dao)素敏(min)感性、血(xue)壓(ya)水(shui)平、內(nei)皮功能、纖溶(rong)活動(dong)及(ji)炎(yan)癥(zheng)反(fan)應，參與多種(zhong)重要(yao)病(bing)理(li)生(sheng)理(li)過(guo)程；脂肪(fang)組(zu)織已(yi)由過去單純作為能量(liang)儲(chu)存(cun)的器官(guan)而(er)成(cheng)為壹(yi)個極其重(zhong)要(yao)的(de)內分泌(mi)系(xi)統。脂肪(fang)組(zu)織在(zai)體內(nei)含有兩種(zhong)主要(yao)的細胞(bao)：壹(yi)種(zhong)是在(zai)胞(bao)漿(jiang)內積(ji)聚脂滴的成(cheng)熟脂肪(fang)細胞(bao)；另(ling)壹(yi)種(zhong)是雖(sui)未在(zai)胞(bao)漿(jiang)內積(ji)聚脂滴但有這種(zhong)潛(qian)能的前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)。前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)呈梭形，有分裂(lie)和(he)增(zeng)殖的(de)能力(li)；成(cheng)熟的脂肪(fang)細胞(bao)呈圓(yuan)形，已(yi)經失去了(le)分裂(lie)及(ji)增(zeng)殖的(de)能力(li)。由於前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)是(shi)壹類具(ju)有(you)增(zeng)殖和(he)向脂肪(fang)細胞(bao)分化(hua)能力(li)的特(te)異(yi)化(hua)前(qian)體細胞(bao)，與肥(fei)胖有著(zhe)非常密切的關系(xi)。前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)是(shi)壹種(zhong)類成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)，在(zai)演變的過程中不斷吸(xi)收(shou)脂質(zhi)，最(zui)終(zhong)成(cheng)為成(cheng)熟的脂肪(fang)細胞(bao)。前(qian)脂肪(fang)細胞(bao)對(dui)外界機械損傷(shang)的(de)抵(di)抗力(li)較強，可望成(cheng)為軟(ruan)組(zu)織缺損的有益填充物(wu)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司實(shi)驗室分離(li)的(de)兔前(qian)脂肪(fang)采用膠原(yuan)酶(mei)消(xiao)化(hua)法制(zhi)備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗室分離(li)的(de)兔前(qian)脂肪(fang)經油(you)紅O染(ran)色(se)檢測(ce)，純度(du)可達90%以(yi)上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵母和(he)真菌等。

壹(yi)、細胞(bao)培(pei)養(yang)

1取材 在(zai)無(wu)菌環(huan)境下(xia)從機體取出某種(zhong)組(zu)織細胞(bao)（視實(shi)驗目(mu)的(de)而(er)定(ding)），經過(guo)壹定(ding)的處(chu)理(li)（如(ru)消化(hua)分散(san)細胞(bao)、分離(li)等）後(hou)接(jie)入培(pei)養(yang)器血(xue)中，這壹過(guo)程稱為(wei)取材。如(ru)是細胞(bao)株的擴大培(pei)養(yang)則無(wu)取材這壹過(guo)程。機體取出的組(zu)織細胞(bao)的(de)培(pei)養(yang)稱為(wei)原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)。2培(pei)養(yang) 將(jiang)取得(de)的組(zu)織細胞(bao)接(jie)入培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)板中的過(guo)程稱為(wei)培(pei)養(yang)。3凍(dong)存(cun)及(ji)復蘇（可(ke)參閱(yue)後(hou)面有關章節）為(wei)了(le)保(bao)存(cun)細胞(bao)，特(te)別是不(bu)易(yi)獲(huo)得(de)的突變(bian)型細胞(bao)或細胞(bao)株，要將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。凍(dong)存(cun)的溫(wen)度(du)壹般用液(ye)氮(dan)的(de)溫(wen)度(du)－196℃，將(jiang)細胞(bao)收(shou)集(ji)至凍(dong)存(cun)管中加(jia)入(ru)含保護劑（壹般(ban)為二甲亞碸(feng)或甘油(you)）的培(pei)養(yang)基(ji)，以(yi)壹定(ding)的冷(leng)卻速(su)度(du)凍(dong)存(cun)，最(zui)終(zhong)保存(cun)於液氮(dan)中。在(zai)極低(di)的溫(wen)度(du)下(xia)，細胞(bao)保(bao)存(cun)的時(shi)間(jian)幾乎(hu)是(shi)無(wu)限的。復蘇壹(yi)般(ban)采(cai)用快融(rong)方法(fa)，即從液氮(dan)中取出凍(dong)存(cun)管後(hou)，立即放入37℃水中，使之(zhi)在(zai)壹分鐘(zhong)內(nei)迅(xun)速(su)融(rong)解。然後(hou)將(jiang)細胞(bao)轉入(ru)培(pei)養(yang)器皿(min)中進(jin)行培(pei)養(yang)。

二、原(yuan)代(dai)細胞(bao)分離(li)

凡(fan)是(shi)來源(yuan)於胚胎(tai)、組(zu)織器官(guan)及(ji)外周血(xue)，經特殊分離(li)方(fang)法(fa)制(zhi)備而(er)來的原(yuan)初(chu)培(pei)養(yang)的細胞(bao)稱(cheng)之為原(yuan)代(dai)細胞(bao)。1懸浮細胞(bao)的(de)分離(li)方(fang)法(fa)組(zu)織材料若來自血(xue)液、羊(yang)水(shui)、胸水或腹水的懸液(ye)材料，的方(fang)法(fa)是采用1000r/min的(de)低(di)速離(li)心(xin)10分鐘(zhong)。經(jing)離(li)心(xin)後(hou)由於各種(zhong)細胞(bao)的(de)比(bi)重(zhong)不同可在(zai)分層(ceng)液(ye)中形成(cheng)不同(tong)層(ceng)，這樣(yang)可根據需要收(shou)獲(huo)目的細胞(bao)。2實(shi)體組(zu)織材料的分離(li)方(fang)法(fa)對(dui)於實體組(zu)織材料，由於細胞(bao)間(jian)結合(he)緊(jin)密，為(wei)了(le)使(shi)組(zu)織中的細胞(bao)充(chong)分分散(san)，形(xing)成(cheng)細胞(bao)懸液(ye)，可采(cai)用機械分散(san)法(fa)（物(wu)理(li)裂(lie)解）和(he)消化(hua)分離(li)法(fa)。

三、細胞(bao)增(zeng)殖檢(jian)測(ce)技術(shu)

目(mu)前(qian)主要(yao)有兩種(zhong)用於檢測(ce)細胞(bao)增(zeng)殖能力(li)的方(fang)法(fa)。壹(yi)種(zhong)是直(zhi)接(jie)的方(fang)法(fa)，通(tong)過直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)進(jin)行分裂(lie)

的(de)細胞(bao)數(shu)來評(ping)價(jia)細胞(bao)的(de)增(zeng)殖能力(li)。另(ling)壹(yi)種(zhong)是間(jian)接(jie)的方(fang)法(fa)，即(ji)細胞(bao)活力(li)（cell viability）檢測(ce)方法(fa)，通過(guo)檢測(ce)樣(yang)品(pin)中健(jian)康細胞(bao)的(de)數(shu)目來評(ping)價(jia)細胞(bao)的(de)增(zeng)殖能力(li)。顯然，細胞(bao)活力(li)檢測(ce)法並不能最(zui)終(zhong)證(zheng)明檢測(ce)樣(yang)品(pin)中的細胞(bao)是(shi)否在(zai)增(zeng)殖。如(ru)細胞(bao)在(zai)某壹培(pei)養(yang)條件下(xia)會自發啟動(dong)雕(diao)亡(wang)程序，但(dan)藥物(wu)的(de)幹(gan)擾可抑(yi)制(zhi)雕(diao)亡(wang)的(de)發生(sheng)；這時(shi)若采用細胞(bao)活力(li)檢測(ce)法，顯(xian)然可以(yi)區分兩種(zhong)條件下(xia)的細胞(bao)數(shu)量(liang)，但(dan)我(wo)們(men)並不能從藥物(wu)幹(gan)擾組(zu)細胞(bao)數(shu)大於對照組(zu)的事實(shi)說(shuo)明藥物(wu)可(ke)促(cu)進(jin)細胞(bao)增(zeng)殖的(de)結(jie)論(lun)。所(suo)以(yi)最(zui)直(zhi)接(jie)的證(zheng)據應該(gai)采用方(fang)法(fa)壹。

取材：首(shou)先，用培(pei)養(yang)液濕(shi)潤(run)所(suo)取的(de)組(zu)織材料，並用鋒(feng)利的眼(yan)科(ke)剪(jian)去除(chu)附(fu)在(zai)其上的脂肪(fang)和(he)結締組(zu)織。接(jie)著用平衡(heng)液（如PBS或Hanks液）漂洗，再用眼(yan)科(ke)彎(wan)剪(jian)將(jiang)組(zu)織塊剪(jian)成(cheng)小塊。多次用PBS或Hanks液漂洗，直(zhi)到液體清(qing)亮、無(wu)油(you)滴為止。

接(jie)種(zhong)：用濕(shi)潤(run)的(de)吸(xi)管吸(xi)取切(qie)碎的組(zu)織塊，輕(qing)輕(qing)吹到(dao)培(pei)養(yang)瓶(ping)皿(min)中，並按壹定(ding)間(jian)距(ju)均(jun)勻放(fang)在(zai)培(pei)養(yang)瓶(ping)底(di)壁上(shang)。註(zhu)意不要過(guo)多，確保(bao)組(zu)織塊切(qie)面(mian)貼(tie)在(zai)培(pei)養(yang)瓶(ping)底(di)壁上(shang)。

培(pei)養(yang)：將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)翻轉，使(shi)瓶(ping)底(di)朝上(shang)，在(zai)種(zhong)植了(le)組(zu)織塊壹(yi)側(ce)的對(dui)側(ce)面加(jia)足培(pei)養(yang)液，避(bi)免組(zu)織塊與培(pei)養(yang)液接(jie)觸，然後(hou)塞(sai)緊(jin)瓶(ping)塞(sai)。將(jiang)種(zhong)植了(le)組(zu)織塊的(de)壹(yi)側(ce)朝上(shang)，靜(jing)置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中。待(dai)組(zu)織塊貼(tie)壁1到(dao)3小時(shi)後(hou)翻瓶(ping)，使貼(tie)壁的(de)組(zu)織塊浸沒在(zai)培(pei)養(yang)液中，繼(ji)續(xu)靜(jing)置。換(huan)液(ye)：每(mei)隔(ge)2到(dao)3天(tian)更(geng)換壹次培(pei)養(yang)液，或者根據培(pei)養(yang)瓶(ping)種(zhong)顏(yan)色(se)的變(bian)化(hua)確定(ding)換液(ye)時(shi)間(jian)。

壹(yi)、原(yuan)代(dai)細胞(bao)計(ji)數(shu)

將(jiang)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)板及(ji)蓋(gai)片(pian)用擦(ca)試(shi)幹(gan)凈(jing)，並將(jiang)蓋(gai)片(pian)蓋(gai)在(zai)計數(shu)板上(shang)。

將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)吸(xi)出少許(xu)，滴加(jia)在(zai)蓋(gai)片(pian)邊(bian)緣(yuan)，使懸液(ye)充滿(man)蓋(gai)片(pian)和(he)計數(shu)板之(zhi)間(jian)。

靜(jing)置3分鐘(zhong)。

鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，計(ji)算(suan)計(ji)數(shu)板四(si)大格細胞(bao)總(zong)數(shu)，壓(ya)線(xian)細胞(bao)只(zhi)計左(zuo)側(ce)和(he)上方的(de)。然後(hou)按下(xia)式(shi)計(ji)算(suan)：

細胞(bao)數(shu)/ml＝4大格細胞(bao)總(zong)數(shu)/ 4×10000

註(zhu)意：鏡(jing)下(xia)偶(ou)見由兩個(ge)以(yi)上細胞(bao)組(zu)成(cheng)的細胞(bao)團(tuan)，應按單(dan)個(ge)細胞(bao)計(ji)算(suan)，若細胞(bao)團(tuan)占10%以(yi)上，說(shuo)明分散(san)不(bu)好，需重(zhong)新制備(bei)細胞(bao)懸液(ye)。

二、原(yuan)代(dai)細胞(bao)活力(li)

將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)以(yi)0.5ml加(jia)入(ru)試(shi)管(guan)中。

加(jia)入(ru)0.5ml 0.4%臺盼蘭染液(ye)，染(ran)色(se)2壹3分鐘(zhong)。

吸(xi)取少(shao)許(xu)懸液(ye)塗於載玻片(pian)上(shang)，加(jia)上(shang)蓋(gai)片(pian)。

鏡(jing)下(xia)取幾(ji)個任(ren)意視野分別(bie)計(ji)死(si)細胞(bao)和(he)活細胞(bao)數(shu)，計細胞(bao)活力(li)。

死(si)細胞(bao)能被臺(tai)盼蘭染上(shang)色(se)，鏡(jing)下(xia)可見深(shen)蘭色(se)的細胞(bao)，活細胞(bao)不(bu)被染色(se)，鏡(jing)下(xia)呈無(wu)色(se)透明狀。

活力(li)測(ce)定(ding)可以(yi)和(he)細胞(bao)計(ji)數(shu)合(he)起來進(jin)行，但要考慮(lv)到(dao)染(ran)液(ye)對原(yuan)細胞(bao)懸液(ye)的加(jia)倍(bei)稀釋(shi)作用。