【概要(yao)描(miao)述】小鼠(shu)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品：OV-90卵(luan)巢(chao)癌SK-N-BE(2)人(ren)神經母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-N-MC人神(shen)經上(shang)皮瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-NEP-1人腎(shen)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-NO-1人急(ji)性(xing)髓(sui)系(xi)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao)SK-N-SH人神(shen)經母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)SK-OV-3人卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞(bao)SK-OV-3+LUC人卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞(bao)熒光(guang)酶(mei)標(biao)記smmc-7721人肝(gan)癌細(xi)胞(bao)SNB-19人腦(nao)膠質瘤(liu)

小鼠(shu)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)分離(li)自腦(nao)組織(zhi)；腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)是(shi)血(xue)腦(nao)屏(ping)障(zhang)的(de)主(zhu)要(yao)組成(cheng)成(cheng)分(fen)，它(ta)是(shi)組成(cheng)腦(nao)微血(xue)管(guan)腔面(mian)單層扁平(ping)上皮(pi)樣細(xi)胞(bao)，能夠(gou)限(xian)制可(ke)溶(rong)性(xing)物質和細(xi)胞(bao)等從血(xue)液(ye)進(jin)入大(da)腦(nao)，大(da)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)與外(wai)周內(nei)皮細(xi)胞(bao)相比具有壹(yi)些相(xiang)同特性。它(ta)所產生和分(fen)泌的生(sheng)物活(huo)性物質對維持血(xue)管(guan)張力(li)、調(tiao)節血(xue)壓(ya)、抗血(xue)栓(shuan)形成(cheng)等有重要作用(yong)，在(zai)腦(nao)血(xue)管(guan)疾(ji)病的(de)發病機(ji)制中有重要病理生理學(xue)意義(yi)。與外(wai)周內皮細(xi)胞(bao)相同，大(da)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)表(biao)達(da)細(xi)胞(bao)粘附(fu)分(fen)子(zi)，調(tiao)控白(bai)細(xi)胞(bao)進(jin)入大(da)腦(nao)。由於(yu)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)的器官特異(yi)性(xing)，內皮(pi)細(xi)胞(bao)通常(chang)取(qu)源於(yu)疾(ji)病研究的(de)相(xiang)關(guan)組織(zhi)。其(qi)主要特征如(ru)下(xia)：①腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)存在(zai)許多細(xi)胞(bao)間緊(jin)密(mi)連接(jie)，產生很高(gao)的跨(kua)內皮(pi)阻抗，延(yan)遲細(xi)胞(bao)旁的通(tong)量；②腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)缺乏(fa)內皮(pi)細(xi)胞(bao)的窗(chuang)孔結(jie)構(gou)，其(qi)液相物質胞(bao)飲(yin)水(shui)平(ping)較低；③腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞(bao)具有不(bu)對(dui)稱(cheng)定位(wei)酶(mei)和載(zai)體(ti)介(jie)導轉(zhuan)運(yun)系(xi)統(tong)，從(cong)而(er)產生“兩極(ji)分(fen)化(hua)"的(de)表(biao)現(xian)型。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)小鼠(shu)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)采用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶-中性dan白酶混(hun)合消(xiao)化法(fa)結(jie)合密(mi)度(du)梯(ti)度(du)離(li)心(xin)法(fa)、最後通過(guo)內皮(pi)細(xi)胞(bao)專用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩選(xuan)制備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公司(si)實(shi)驗(yan)室分離的(de)小鼠(shu)腦(nao)微血(xue)管(guan)內皮(pi)經CD31免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有產品僅(jin)供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

包被條件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生長特性 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態 內皮細(xi)胞(bao)樣

傳代(dai)特性 可傳2-3代(dai)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器械等，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合適的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑準備：配制或購(gou)買(mai)合適的(de)培養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有效期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合適的(de)動物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲取(qu)所需(xu)組織(zhi)；或從(cong)已有的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下(xia)，迅速取(qu)出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡量減少(shao)對組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多(duo)余的脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的無(wu)菌PBS沖洗(xi)數次，以去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有適量消(xiao)化酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過(guo)濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾液以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢(jian)測

1. 日常觀察：每天用(yong)倒(dao)置顯微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需要(yao)時，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染色等方法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計數和活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長情況和健(jian)康(kang)狀態。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後需立即處理，避免(mian)長(chang)時間暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理鹽水(shui)沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組織(zhi)類型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察細(xi)胞(bao)解離(li)狀態。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定生(sheng)長因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要包(bao)被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會導致接(jie)觸抑制和分(fen)化(hua)。

三、汙染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超凈(jing)臺(tai)操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中可添加雙抗，但長期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙染後需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常觀察

- 每天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片增多）可(ke)能提示汙染或營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍存早期代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液氮保(bao)存。