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使(shi)用(yong)方(fang)法(fa):
壹、樣品(pin) RNA 的制(zhi)備
、用(yong)自選方(fang)法(fa)抽提(ti)病毒(du)樣品(pin) RNA。註(zhu)意(yi):可(ke)以選用(yong)本公司的壹管式病毒(du) RNAout
2、或(huo)柱式病毒(du) RNAout。
二:RT(逆(ni)轉(zhuan)錄(lu))反應(ying)合成 cDNA
. 按(an)下表(biao)配(pei)制(zhi) RT 反應體(ti)系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分(fen)鐘變性(xing)模板後(hou)立(li)即冰(bing)浴。
3. 嚴格(ge)按(an)順序(xu)加(jia)入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(含 RI),
反(fan)應終(zhong)體(ti)積(ji)為(wei) 20μL。
4. 42℃保溫 60 分(fen)鐘。此(ci)步為 RT 反(fan)應。
5. 70℃保溫 0 分(fen)鐘以(yi)終(zhong)止(zhi)反(fan)應,然(ran)後(hou)放置在冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。合成的 cDNA 可(ke)以直(zhi)接作為(wei) PCR 模板使(shi)用(yong),丌需(xu)要(yao)純(chun)化。
產品(pin)名(ming)稱(cheng):無(wu)綠藻通(tong)用(yong)PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒價格(ge)
英文(wen)名(ming)稱(cheng):Prototheca spp.PCR
規(gui)格(ge):詳(xiang)見說(shuo)明(ming)書(shu)
類別(bie):PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒
運(yun)輸(shu):低(di)溫、避(bi)光、快遞(di)免(mian)費送貨上(shang)門。
用(yong)途:生(sheng)化實驗(yan),合成實驗(yan)等試(shi)驗(yan)。
運(yun)輸(shu)及(ji)保存:低(di)溫運(yun)輸(shu),-20℃保存, 保存期(qi)限(xian)為(wei) 6 個月。
自(zi)備試(shi)劑(ji):樣品(pin) RNA。
性能(neng)指(zhi)標:點擊(ji)了(le)解(jie)更(geng)多PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒。
.試(shi)劑(ji)盒檢測(ce)特異(yi)性(xing)為00%
2. 檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒重現(xian)性(xing)為00%
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)達(da)到(dao)03/ml
4. 有效期(qi)為6個月
註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang):
①加(jia)入試(shi)劑(ji)的順序(xu)應(ying)*,以(yi)保證(zheng)所(suo)有反應(ying)板孔溫育的時(shi)間(jian)壹樣。
②使(shi)用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑料(liao)容器(qi)配(pei)置洗滌液。
③按(an)照雞血紅(hong)蛋白(HB)ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)中標明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液的量及順序(xu)進(jin)行溫育操(cao)作。
④底(di)物A應(ying)揮發(fa),避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底(di)物B對(dui)光敏(min)感(gan),避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露於光(guang)下。避(bi)免(mian)用(yong)手(shou)接觸,有毒。實驗(yan)完(wan)成後(hou)應立(li)即讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
⑤洗滌酶標板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分(fen)拍(pai)幹(gan),不(bu)要(yao)將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直(zhi)接放入酶標反(fan)應孔中吸水(shui)。
⑥使(shi)用(yong)壹次(ci)性的吸頭以(yi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran),吸取(qu)終(zhong)止液和底(di)物A、B液時(shi),避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)帶金屬(shu)部(bu)分(fen)的加(jia)樣器(qi) 。
⑦實驗(yan)中不用(yong)的板條應立(li)即放回包裝(zhuang)袋(dai)中,密封保存,以(yi)免(mian)變質(zhi)。
⑧試(shi)劑(ji)應按(an)標簽說明(ming)書(shu)儲存(cun),使(shi)用(yong)前(qian)恢(hui)復到室溫。稀稀過後(hou)的標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄,不(bu)可(ke)保存。
⑨不(bu)用(yong)的其它試(shi)劑(ji)應包裝(zhuang)好(hao)或蓋(gai)好(hao)。不同(tong)批(pi)號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混(hun)用(yong)。保質前(qian)使用(yong)。
反應(ying)五要(yao)素(su):
參(can)加(jia)PCR反應(ying)的物質(zhi)主(zhu)要(yao)有五種(zhong)即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引(yin)物:引(yin)物是(shi)PCR特(te)異性(xing)反應的關鍵,PCR 產物的特異性取(qu)決於引(yin)物與(yu)模板DNA互(hu)補的程度(du)。理(li)論上(shang),只要(yao)知(zhi)道(dao)任何(he)壹(yi)段(duan)模板DNA序(xu)列(lie), 就能(neng)按(an)其設計互(hu)補的寡(gua)核苷酸鏈做引物,利用(yong)PCR就可(ke)將(jiang)模板DNA在體外(wai)大(da)量擴(kuo)增。設計引物應(ying)遵循以(yi)下原(yuan)則:
①引物長度: 5-30bp,常(chang)用(yong)為20bp左右(you)。
②引物擴(kuo)增跨度(du): 以200-500bp為(wei)宜,特(te)定(ding)條件下可(ke)擴(kuo)增長至(zhi)0kb的片段。
③引物堿(jian)基(ji):G+C含量以40-60%為宜(yi),G+C太少(shao)擴(kuo)增效果不佳,G+C過多易出(chu)現(xian)非(fei)特(te)異條帶。ATGC隨(sui)機分(fen)布(bu),避(bi)免(mian)5個以上(shang)的嘌呤或嘧(mi)啶(ding)核(he)苷酸的成串排(pai)列(lie)。
④避(bi)免(mian)引(yin)物內(nei)部出(chu)現(xian)二級結(jie)構,避(bi)免(mian)兩(liang)條引物間(jian)互(hu)補,特(te)別是3'端的互(hu)補,否(fou)則會形(xing)成引(yin)物二聚體,產生(sheng)非(fei)特(te)異的擴(kuo)增條帶。
⑤引物3'端(duan)的堿(jian)基(ji),特別是末(mo)及(ji)倒數第二個堿(jian)基(ji),應嚴格(ge)要(yao)求(qiu)配(pei)對(dui),以避(bi)免(mian)因(yin)末(mo)端(duan)堿(jian)基(ji)不配對(dui)而導(dao)致(zhi)PCR失(shi)敗(bai)。
⑥引物中有或能(neng)加(jia)上(shang)合適的酶切(qie)位點, 被(bei)擴(kuo)增的靶序(xu)列(lie)有適宜的酶切(qie)位點, 這(zhe)對(dui)酶切(qie)分(fen)析(xi)或(huo)分(fen)子(zi)克隆很有好(hao)處。
⑦引(yin)物的特異性:引(yin)物應(ying)與(yu)核酸序(xu)列(lie)數據(ju)庫(ku)的其它序(xu)列(lie)無(wu)明(ming)顯(xian)同源性(xing)。
引物量:每(mei)條引物的濃度(du)0.~umol或(huo)0~00pmol,以(yi)低(di)引(yin)物量產生(sheng)所需(xu)要(yao)的結(jie)果為(wei)好(hao),引物濃度(du)偏(pian)高(gao)會(hui)引(yin)起(qi)錯配(pei)和非(fei)特(te)異性擴(kuo)增,且可(ke)增加(jia)引物之(zhi)間(jian)形成二聚體的機會。
抗幹(gan)擾(rao)TaqDNA 聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Dimethyl phthalate,≥99%CAS No.:3--3規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Long-Taq DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Diethy phthalate,≥99%CAS No.:84-66-2規格(ge)(SP):00ML類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Tth DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Butyltriphenylphosphonium bromide,99%CAS No.:779-5-7規格(ge)(SP):25G類別(bie)(Key):表(biao)面活(huo)性劑(ji)
Red-Tth DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Dibutyl phthalate,99%CAS No.:84-74-2規格(ge)(SP):00ML類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
熱啟(qi)動(dong)Tth DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyltriphenylphosphonium bromide,99%CAS No.:530-32-規格(ge)(SP):25G類別(bie)(Key):表(biao)面活(huo)性劑(ji)
Pfu DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyltriphenylphosphonium iodide,≥95%CAS No.:4736-60-規格(ge)(SP):25G類別(bie)(Key):表(biao)面活(huo)性劑(ji)
Red-Pfu DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyl phenylacetate,≥99%CAS No.:0-97-3規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Phusion DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Methyl hexanoate,≥99%CAS No.:06-70-7規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
KOD DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyl hexanoate,≥98%CAS No.:23-66-0規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Red-KOD DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Triethyl phosphate,≥99.8%CAS No.:78-40-0規格(ge)(SP):00ML類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Tfl DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyl heptanoate,≥98%CAS No.:06-30-9規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
E.coli DNA聚合酶 Ι英文(wen)名(ming)(EN):Ethyl octanoate,≥98%CAS No.:06-32-規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)英(ying)文(wen)名(ming)(EN):Ethyl lactate,≥98%CAS No.:97-64-3規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Klenow 片段英(ying)文(wen)名(ming)(EN):Methyl salicylate,≥98%CAS No.:9-36-8規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
φ29 DNA聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Ethyl palmitate,≥95%CAS No.:628-97-7規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
T4 DNA 聚合酶 英文(wen)名(ming)(EN):Trimethyl phosphonoacetate,98%CAS No.:5927-8-4規格(ge)(SP):25G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
T7 DNA 聚合酶(未(wei)修(xiu)飾(shi))英(ying)文(wen)名(ming)(EN):Tetraethyl orthosilicate,98%CAS No.:28767規格(ge)(SP):00ML類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
Vent DNA 聚合酶英文(wen)名(ming)(EN):Propyl acetate,≥98%CAS No.:09-60-4規格(ge)(SP):00G類別(bie)(Key):通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)
無綠藻通(tong)用(yong)PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒價格(ge)肉毒(du)桿菌(jun)(A/B型)核酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒光(guang)探針法(fa))0.ml美(mei)國(guo)Jackson公司分(fen)裝(zhuang)
肉毒(du)桿菌(jun)(E/F型)核酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒光(guang)探針法(fa))0.ml美(mei)國(guo)Jackson公司分(fen)裝(zhuang)
產氣莢(jia)膜(mo)梭(suo)狀(zhuang)芽孢桿菌(jun)(CP)核(he)酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒光(guang)探針法(fa))0.ml美(mei)國(guo)Jackson公司分(fen)裝(zhuang)
超(chao)級細菌(jun)NDM-基因(yin)核酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒光(guang)探針法(fa))0.ml美(mei)國(guo)Jackson公司分(fen)裝(zhuang)
溶藻弧菌(jun)(VA)核酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒光(guang)探針法(fa))
企業(ye)信息(xi)
ENTERPRISE INFORMATION上(shang)海谷(gu)研(yan)實業(ye)有限(xian)公司
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