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小反(fan)芻獸(shou)疫(yi)病毒PCR檢測(ce)試劑(ji)盒品牌(pai)使(shi)用(yong)方法(fa):
壹、樣品 RNA 的(de)制備(bei)
、用(yong)自選(xuan)方(fang)法(fa)抽(chou)提(ti)病毒樣(yang)品 RNA。註意:可以(yi)選(xuan)用(yong)本公司的(de)壹管式(shi)病毒 RNAout
2、或(huo)柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuan)錄(lu))反(fan)應(ying)合成 cDNA
. 按下表配制(zhi) RT 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)(20 μL 體(ti)系(xi))
2. 70℃保(bao)溫 5 分鐘(zhong)變性模(mo)板後(hou)立即(ji)冰(bing)浴。
3. 嚴(yan)格按順序加(jia)入(ru) 6μL RT Buffer(含 dNTP)和(he) 2μL MMLV 逆轉錄(lu)酶(含 RI),
反(fan)應(ying)終(zhong)體(ti)積為(wei) 20μL。
4. 42℃保(bao)溫 60 分鐘(zhong)。此步為(wei) RT 反(fan)應(ying)。
5. 70℃保(bao)溫 0 分鐘(zhong)以(yi)終(zhong)止反(fan)應(ying),然後(hou)放置(zhi)在冰(bing)上待(dai)用(yong)。合成的(de) cDNA 可以(yi)直(zhi)接(jie)作(zuo)為(wei) PCR 模(mo)板使用(yong),丌(ji)需要(yao)純化(hua)。
產品名(ming)稱(cheng):小反(fan)芻獸(shou)疫(yi)病毒PCR檢測(ce)試劑(ji)盒品牌(pai)
英(ying)文(wen)名稱(cheng):Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)RTPCR
規格:詳見(jian)說(shuo)明書(shu)
類別:PCR檢測(ce)試劑(ji)盒
運(yun)輸:低溫、避光(guang)、快(kuai)遞免費(fei)送(song)貨(huo)上門。
用(yong)途(tu):生(sheng)化(hua)實驗(yan),合成實驗(yan)等試驗。
運(yun)輸及保(bao)存(cun):低(di)溫運輸,-20℃保(bao)存(cun), 保(bao)存(cun)期限為(wei) 6 個(ge)月(yue)。
自備試劑(ji):樣品 RNA。

性能指(zhi)標(biao):點(dian)擊了解(jie)更多PCR檢測(ce)試劑(ji)盒。
.小反(fan)芻獸(shou)疫(yi)病毒PCR檢測(ce)試劑(ji)盒品牌(pai)試劑(ji)盒檢測(ce)特(te)異(yi)性為(wei)00%
2. 檢測(ce)試劑(ji)盒重(zhong)現(xian)性為(wei)00%
3. 靈敏(min)度可達到(dao)03/ml
4. 有(you)效期為(wei)6個(ge)月(yue)
註意事(shi)項(xiang):
①加(jia)入(ru)試劑(ji)的(de)順序應(ying)*,以(yi)保(bao)證所(suo)有(you)反(fan)應(ying)板孔(kong)溫(wen)育(yu)的(de)時間(jian)壹樣。
②使(shi)用(yong)幹凈(jing)的(de)塑(su)料容(rong)器配置(zhi)洗滌(di)液。
③按照(zhao)雞(ji)血(xue)紅蛋白(HB)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)中標(biao)明的(de)時間(jian)、加(jia)液的(de)量及順序進行(xing)溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)。
④底(di)物A應(ying)揮發,避免長(chang)時間(jian)打開(kai)蓋(gai)子。底(di)物B對(dui)光(guang)敏(min)感(gan),避免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於光(guang)下。避(bi)免用(yong)手接(jie)觸(chu),有(you)毒。實(shi)驗(yan)完成後(hou)應(ying)立即(ji)讀(du)取OD值。
⑤洗滌(di)酶標(biao)板時應(ying)充分(fen)拍(pai)幹,不要(yao)將(jiang)吸(xi)水紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶標(biao)反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸(xi)水(shui)。
⑥使用(yong)壹次性的(de)吸頭以(yi)免交叉汙(wu)染(ran),吸(xi)取(qu)終(zhong)止液和(he)底(di)物A、B液(ye)時,避(bi)免使(shi)用(yong)帶金(jin)屬(shu)部分的(de)加(jia)樣器 。
⑦實驗中(zhong)不用(yong)的(de)板條應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)包裝袋中(zhong),密(mi)封保(bao)存(cun),以(yi)免變質(zhi)。
⑧試劑(ji)應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲(chu)存(cun),使(shi)用(yong)前恢復(fu)到(dao)室(shi)溫(wen)。稀稀過後(hou)的(de)標準(zhun)品應(ying)丟(diu)棄,不可(ke)保(bao)存(cun)。
⑨不用(yong)的(de)其它(ta)試劑(ji)應(ying)包裝好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不同批(pi)號的(de)試劑(ji)不要(yao)混用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使用(yong)。
反(fan)應(ying)五要素:
小反(fan)芻獸(shou)疫(yi)病毒PCR檢測(ce)試劑(ji)盒品牌(pai)參(can)加(jia)PCR反(fan)應(ying)的(de)物質(zhi)主(zhu)要有(you)五種即引物、酶(mei)、dNTP、模(mo)板和Mg2+
引物:引物是(shi)PCR特(te)異(yi)性反(fan)應(ying)的(de)關鍵(jian),PCR 產物的(de)特異(yi)性取決於引物與(yu)模(mo)板DNA互(hu)補的(de)程(cheng)度。理(li)論上,只(zhi)要知道任(ren)何壹段模(mo)板DNA序列(lie), 就能按其(qi)設(she)計(ji)互(hu)補的(de)寡核(he)苷酸(suan)鏈(lian)做(zuo)引物,利(li)用(yong)PCR就可將(jiang)模(mo)板DNA在體(ti)外(wai)大(da)量擴(kuo)增(zeng)。設計(ji)引物應(ying)遵循(xun)以(yi)下原(yuan)則(ze):
①引物長(chang)度: 5-30bp,常用(yong)為(wei)20bp左右。
②引物擴(kuo)增(zeng)跨(kua)度: 以(yi)200-500bp為(wei)宜(yi),特定條件下可(ke)擴(kuo)增(zeng)長至(zhi)0kb的(de)片段(duan)。
③引物堿(jian)基(ji):G+C含量(liang)以(yi)40-60%為(wei)宜(yi),G+C太少擴增(zeng)效果不佳(jia),G+C過多易(yi)出現(xian)非特(te)異條帶。ATGC隨機分布(bu),避免5個(ge)以(yi)上的(de)嘌呤(ling)或(huo)嘧啶核苷酸(suan)的(de)成串(chuan)排列(lie)。
④避免引物內部出現(xian)二級結構(gou),避(bi)免兩(liang)條引物間(jian)互(hu)補,特別是(shi)3'端的(de)互(hu)補,否則(ze)會(hui)形成引物二聚體(ti),產(chan)生(sheng)非特(te)異的(de)擴增(zeng)條帶。
⑤引物3'端的(de)堿基(ji),特別是(shi)末(mo)及倒數第二個堿(jian)基,應(ying)嚴格要求(qiu)配(pei)對(dui),以(yi)避(bi)免因末(mo)端堿基不配(pei)對(dui)而導(dao)致PCR失敗(bai)。
⑥引物中(zhong)有(you)或(huo)能加(jia)上合適(shi)的(de)酶切(qie)位點(dian), 被(bei)擴增(zeng)的(de)靶(ba)序(xu)列(lie)有(you)適(shi)宜(yi)的(de)酶切(qie)位點(dian), 這(zhe)對(dui)酶(mei)切(qie)分析或(huo)分子克(ke)隆很(hen)有(you)好(hao)處(chu)。
⑦引物的(de)特異(yi)性:引物應(ying)與核(he)酸(suan)序(xu)列數(shu)據庫(ku)的(de)其它(ta)序列無明顯同源性。
引物量(liang):每(mei)條引物的(de)濃(nong)度0.~umol或(huo)0~00pmol,以(yi)低(di)引物量(liang)產(chan)生所(suo)需要(yao)的(de)結果(guo)為(wei)好(hao),引物濃(nong)度偏高會引起錯配(pei)和非特(te)異性擴增(zeng),且可(ke)增(zeng)加(jia)引物之(zhi)間(jian)形成二聚體(ti)的(de)機會。
即用(yong)型封堵(du)液(ye)(NC) 英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium sulfate anhydrousCAS No.:7487-88-9規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
即用(yong)型封堵(du)液(ye)(Nylon)英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium nitrate hexahydrateCAS No.:3446-8-9規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
硝酸(suan)纖維素膜,3×20 cm(Tiandz)英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium stearateCAS No.:557-04-0規(gui)格(SP):250G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
硝酸(suan)纖維素膜,3×20 cm(Amersham)英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium hydroxide, ≥ 95.0 %CAS No.:309-42-8規(gui)格(SP):250G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
尼(ni)龍膜(mo),3×20 cm英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium chloride hexahydrateCAS No.:779-8-6規(gui)格(SP):250G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
天凈(jing)沙非同位素探(tan)針(zhen)雜(za)交試劑(ji)盒(適(shi)用(yong)常規DNA/RNA探(tan)針(zhen))英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium fluorideCAS No.:7783-40-6規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
天凈(jing)沙非同位素探(tan)針(zhen)雜(za)交試劑(ji)盒(適(shi)用(yong)Oligo探(tan)針(zhen))英(ying)文(wen)名(EN):Magnesium trisilicateCAS No.:4987-04-3規(gui)格(SP):250G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
BCIP-NBT法(fa)雜(za)交檢測(ce)試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Copper nitrate hydrateCAS No.:3778-3-9規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
DAB法(fa)雜(za)交試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Copper(II) chloride , ≥98.0%CAS No.:7447-39-4規(gui)格(SP):50G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
TMB法(fa)雜(za)交試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Copper(II) trifluoromethanesulfonate,...CAS No.:34946-82-2規(gui)格(SP):5G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
DAB法(fa)雜(za)交試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Cupric Acetate Anhydrous,≥99.0%CAS No.:42-7-2規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
TMB法(fa)雜(za)交試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Cupric oxide wireCAS No.:37-38-0規(gui)格(SP):00G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
ECL法(fa)雜(za)交檢測(ce)試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Cuprous cyanide, ≥ 99.0CAS No.:544-92-3規(gui)格(SP):00G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
ECL法(fa)雜(za)交檢測(ce)試劑(ji)盒英(ying)文(wen)名(EN):Copper thiocyanateCAS No.:-67-7規(gui)格(SP):00G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
AP標記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)體(ti)英(ying)文(wen)名(EN):CopperCAS No.:7440-50-8規(gui)格(SP):00G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
AP標記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)體(ti)英(ying)文(wen)名(EN):Cupric sulfide,≥99.99%CAS No.:37-40-4規(gui)格(SP):5G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
HRP標記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)體(ti)英(ying)文(wen)名(EN):Cupric hydroxideCAS No.:20427-59-2規(gui)格(SP):500G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
HRP標記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)體(ti)英(ying)文(wen)名(EN):Cupric bromideCAS No.:7789-45-9規(gui)格(SP):25G類別(Key):通用(yong)試劑(ji)
小反(fan)芻獸(shou)疫(yi)病毒PCR檢測(ce)試劑(ji)盒品牌(pai)隨機引物DNA探(tan)針(zhen)同位素([α32P]dCTP)聚合酶(mei)標(biao)記(ji)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
3’末(mo)端DNA探(tan)針(zhen)同位素([α32P]dATP)聚合酶(mei)標(biao)記(ji)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
3’末(mo)端DNA探(tan)針(zhen)同位素([α32P]dCTP)聚合酶(mei)標(biao)記(ji)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
3’末(mo)端DNA探(tan)針(zhen)同位素([α32P]dATP)轉移(yi)酶(mei)標記(ji)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
DNA末(mo)端平滑(hua)補(bu)缺(que)同位素([35S]dATP)聚合酶(mei)標(biao)記(ji)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
三(san)聯(lian)重復(fu)子(zi)延展(zhan)度同位素([γ32P]ATP)激(ji)酶標記(ji)法(fa)檢測(ce)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:0次
同位素[α32P]dCTP聚合酶(mei)標(biao)記(ji)微(wei)衛(wei)星擴(kuo)增(zeng)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
同位素[γ32P]ATP激(ji)酶標記(ji)微(wei)衛(wei)星擴(kuo)增(zeng)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
同位素標記(ji)放射活性TCA檢測(ce)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
隨機引物DNA探(tan)針(zhen)同位素標記(ji)產物*雙(shuang)鏈(lian)制(zhi)備(bei)試劑(ji)盒 進口/國產 規格:20次
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