【概(gai)要(yao)描述(shu)】大(da)鼠(shu)陰莖白膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：RabbitK3家兔(tu)腎(shen)上(shang)皮(pi)細胞pc-9人(ren)肺癌(ai)細胞PLC/PRF/5人(ren)肝癌細胞ProPakA.6人(ren)胚腎(shen)細胞QSG-7701人(ren)正常(chang)肝細胞Raji人(ren)淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞RAMOS RA1人(ren)B淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞RBE人(ren)肝膽管(guan)癌細胞RD人(ren)橫紋(wen)肌(ji)肉瘤細胞REH人(ren)急性(xing)非B非T淋(lin)巴(ba)細胞白血病細胞

大(da)鼠(shu)陰莖白膜(mo)成纖(xian)維(wei)分離自陰莖白膜(mo)組織(zhi)；海(hai)綿體，又(you)稱(cheng)海綿體肌，是最硬(ying)的(de)平(ping)滑肌(ji)和(he)結締組織(zhi)。海(hai)綿體是壹(yi)種(zhong)勃(bo)起(qi)組織(zhi)，外(wai)面(mian)包有堅厚(hou)的白膜(mo)，內部(bu)由結締組織(zhi)和(he)平(ping)滑肌(ji)組成(cheng)海(hai)綿狀支(zhi)架(jia)，其(qi)腔隙與(yu)血(xue)管(guan)相通(tong)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞（Fibroblast）是疏(shu)松結締組織(zhi)的(de)主要(yao)細胞成分，由(you)胚胎時期(qi)的(de)間充質細胞分化(hua)而(er)來(lai)。成纖(xian)維(wei)細胞較(jiao)大(da)，輪廓(kuo)清楚，多為突起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁平(ping)狀結構，其(qi)細胞核呈規(gui)則的(de)卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核仁大(da)而(er)明顯。成纖(xian)維(wei)細胞功能活動旺盛(sheng)，細胞質嗜弱堿(jian)性，具(ju)明(ming)顯的蛋白質合(he)成和(he)分泌活動，在壹定條件(jian)下，它(ta)可(ke)以實現(xian)跟(gen)纖(xian)維(wei)細胞的互相轉化；成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞對不(bu)同(tong)程度(du)的細胞變(bian)性(xing)、壞(huai)死(si)和(he)組織(zhi)缺損的修(xiu)復有著十(shi)分重(zhong)要(yao)的作(zuo)用(yong)。剛分離的陰莖白膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞呈圓(yuan)形(xing)、折光性(xing)良好，懸(xuan)浮(fu)於培養基中。30min細胞貼(tie)壁(bi)，其(qi)中部(bu)分開始伸(shen)出(chu)偽(wei)足，表(biao)現(xian)為小(xiao)的突(tu)起(qi)；6h後(hou)細胞基本(ben)貼(tie)壁(bi)wan全(quan)，伸(shen)展(zhan)成(cheng)梭形(xing)，胞核清晰(xi)，分布較(jiao)均勻(yun)，散在生長，不(bu)聚(ju)集(ji)成團；細胞生長迅速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈融合(he)狀態(tai)，細胞排(pai)列(lie)緊(jin)密，有的交叉重疊(die)生長，平(ping)坦(tan)、胞體較(jiao)大(da)，細胞質透(tou)明(ming)，細胞核較(jiao)大(da)，呈橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色淡(dan)。細胞融合(he)，並彼此(ci)連(lian)接(jie)成(cheng)網狀；細胞呈突起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁平(ping)分布。陰莖白膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞（PLFs）作(zuo)為(wei)牙(ya)周膜(mo)的主(zhu)體細胞，是牙(ya)周膜(mo)主要(yao)的間質細胞，它(ta)不(bu)僅(jin)具(ju)有合(he)成膠原(yuan)、基質、彈(dan)力纖(xian)維(wei)和(he)糖蛋(dan)白的功能，還有吸收膠原(yuan)吞(tun)噬異(yi)物的(de)能力，還參(can)與了牙(ya)周組織(zhi)的(de)病變(bian)、修(xiu)復(fu)及(ji)再(zai)生過程。現(xian)在，利用牙(ya)周膜(mo)細胞建立(li)體(ti)外(wai)模型，已經(jing)成(cheng)為有關員(yuan)研究牙(ya)周組織(zhi)疾(ji)病的(de)重要(yao)手(shou)段。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做其(qi)他科(ke)學(xue)實驗外(wai)的使用！

DMEM[H]、FBS、成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞生長添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌的(de)培養皿、培養瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器械(xie)等，並進行高(gao)壓滅菌或其(qi)他合(he)適的(de)消毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培養基、消化酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎牛血(xue)清、雙抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確保其(qi)無菌且(qie)在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動物或組織(zhi)來(lai)源準備(bei)：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適的(de)動物並進行相應的麻(ma)醉或處死(si)，獲取所需(xu)組織(zhi)；或從已有的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取組織(zhi)。

取材與處理(li)

1. 取材：在無菌條件(jian)下，迅速(su)取出(chu)目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損傷，並去除多(duo)余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締組織(zhi)等非目(mu)的組織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出(chu)的(de)組織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去除血液(ye)和(he)雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊，以便(bian)後(hou)續消化。

細胞分離

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊(kuai)放入含(han)有適量消化酶(mei)的離心(xin)管(guan)中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養箱中消化壹(yi)段時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消化更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞懸(xuan)液(ye)或小細胞團時(shi)，加入含(han)血清的(de)培養基終止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用(yong)細胞篩過濾(lv)細胞懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消化的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當(dang)的轉速離心(xin)，收集(ji)細胞沈澱。

細胞觀察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡觀察(cha)細胞的形(xing)態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等，記(ji)錄細胞的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如(ru)發現(xian)細胞汙染(ran)或異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取相應措(cuo)施。
2. 細胞計數與(yu)活力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染(ran)色等方(fang)法對(dui)細胞進行計(ji)數和(he)活力檢(jian)測，以了解細胞的生長情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材與分離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組織(zhi)取材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理(li)，避免(mian)長時(shi)間暴露於室溫(wen)或非營(ying)養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗組織(zhi)，去(qu)除血液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶(mei)，避免過度(du)消化導(dao)致細胞損傷。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微鏡觀察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二、培養條件(jian)優化

1. 培養基選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或特定生長因(yin)子(zi)的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞需(xu)添(tian)加胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培養基品(pin)牌或批次(ci)，減少(shao)細胞適應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱，可能需(xu)要(yao)包被(bei)培養皿（如膠原(yuan)蛋白、多聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度(du)建議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接觸(chu)抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操作(zuo)

- 全(quan)程在超凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次(ci)性耗材，避免交叉汙染(ran)。

- 培養基中可(ke)添(tian)加雙抗(kang)，但(dan)長期(qi)使(shi)用可(ke)能影(ying)響細胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查(zha)細胞形(xing)態(tai)、密度(du)及(ji)培養基顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換培養基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可能提示汙染(ran)或營(ying)養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存

- 原(yuan)代(dai)細胞分裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用凍存(cun)培養基），梯度(du)降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保(bao)存。