【概(gai)要(yao)描(miao)述】大(da)鼠(shu)骨骼(ge)肌衛(wei)星細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產品(pin)：Hs 852.T黑瘤兔(tu)三叉神(shen)經(jing)元細胞兔(tu)脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)兔(tu)嗅(xiu)鞘(qiao)細(xi)胞(bao)兔(tu)嗅(xiu)球(qiu)神(shen)經(jing)幹細胞兔(tu)海馬神(shen)經(jing)幹細胞兔(tu)杏(xing)仁(ren)核(he)神(shen)經(jing)元細胞兔(tu)角(jiao)膜上(shang)皮細(xi)胞兔(tu)角(jiao)膜基(ji)質細(xi)胞(bao)兔(tu)視(shi)網膜色(se)上(shang)皮細(xi)胞

大(da)鼠(shu)骨骼(ge)肌衛(wei)星分(fen)離(li)自四(si)肢(zhi)肌肉組(zu)織(zhi)；骨骼肌又稱(cheng)橫(heng)紋肌，肌肉中(zhong)的壹(yi)種，約(yue)占全身(shen)重(zhong)量的40%。骨(gu)骼肌纖維(wei)為(wei)長(chang)柱(zhu)形(xing)的多(duo)核(he)細胞(bao)，肌膜的外面(mian)有(you)基(ji)膜緊密貼附(fu)。屬(shu)於橫紋肌，橫紋肌還包括心(xin)肌與內(nei)臟橫(heng)紋肌，其中(zhong)骨骼(ge)肌主要(yao)分(fen)布於四(si)肢(zhi)。每塊(kuai)肌肉都是具有壹(yi)定形(xing)態(tai)、結(jie)構(gou)和(he)功能(neng)的器(qi)官，有豐富(fu)的血(xue)管(guan)、淋(lin)巴(ba)分(fen)布，在軀體神(shen)經(jing)支(zhi)配下(xia)收縮或舒張，進行(xing)隨意(yi)運動。肌肉可(ke)根據共(gong)形狀(zhuang)、大小(xiao)、位置、起(qi)止點、纖(xian)維(wei)方(fang)向(xiang)和作(zuo)用(yong)等(deng)命名(ming)。依形(xing)態(tai)命名(ming)的如(ru)斜(xie)方肌、菱形(xing)肌、三角(jiao)肌、梨狀(zhuang)肌等。骨(gu)骼(ge)肌細胞(bao)呈纖維(wei)狀(zhuang)，不分(fen)支(zhi)，有明(ming)顯(xian)橫紋，核(he)很多(duo)，且(qie)都位於細胞(bao)膜下(xia)方。肌細胞(bao)內(nei)有許多(duo)沿(yan)細(xi)胞(bao)長(chang)軸平行(xing)排(pai)列的細(xi)絲(si)狀(zhuang)肌原(yuan)纖(xian)維(wei)。每(mei)壹(yi)肌原(yuan)纖(xian)維(wei)都有相(xiang)間(jian)排(pai)列的明(ming)帶(dai)（Ⅰ帶(dai)）及暗(an)帶(dai)（A帶(dai)）。明帶(dai)染色(se)較淺，而(er)暗(an)帶(dai)染色(se)較深(shen)。暗帶(dai)中間(jian)有壹(yi)條較(jiao)明亮(liang)的線(xian)稱(cheng)H線(xian)。H線的中(zhong)部有壹(yi)M線。明(ming)帶(dai)中間(jian)，有壹(yi)條較(jiao)暗的線(xian)稱(cheng)為(wei)Z線。兩個Z線之間的區段(duan)，叫(jiao)做(zuo)壹(yi)個肌節。肌衛(wei)星細胞(bao)指骨(gu)骼肌中除(chu)骨(gu)骼肌纖維(wei)（肌細胞(bao)）外的壹(yi)種扁(bian)平(ping)、有(you)突(tu)起(qi)的細(xi)胞(bao)。著(zhe)於肌纖維(wei)（肌細胞(bao)）表(biao)面；當(dang)肌纖維(wei)（肌細胞(bao)）受(shou)損後(hou)，肌衛(wei)星細胞(bao)可(ke)增殖分(fen)化，參(can)與肌纖維(wei)（肌細胞(bao)）的修(xiu)復，因此(ci)具有幹細胞(bao)性(xing)質。
方法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)骨骼(ge)肌衛(wei)星采用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠原(yuan)酶(mei)混(hun)合消(xiao)化法(fa)結合多(duo)次(ci)差(cha)速貼壁(bi)法(fa)制備(bei)而(er)來，細(xi)胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)骨骼(ge)肌衛(wei)星經Desmin免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒定，純度(du)可(ke)達90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科學實驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科學實驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

包(bao)被條件 PLL（0.1mg/ml）

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形態(tai) 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳3-5代(dai)左右(you)；3代(dai)以(yi)內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養(yang)條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶(ping)、移液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手(shou)術器(qi)械等，並(bing)進行(xing)高壓滅菌或其他(ta)合適(shi)的消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制或購(gou)買(mai)合適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙抗等試(shi)劑，確(que)保其無(wu)菌且(qie)在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動物(wu)並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的麻醉或處(chu)死，獲取(qu)所需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有(you)的組(zu)織(zhi)樣本庫(ku)中獲取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條件下，迅(xun)速取(qu)出目標組(zu)織(zhi)，盡量減(jian)少對(dui)組織(zhi)的損傷，並(bing)去除(chu)多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪、結締組織(zhi)等非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數次，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切：將組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後(hou)續消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含有(you)適(shi)量消(xiao)化酶的離(li)心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細胞懸液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞懸(xuan)液(ye)，去除未(wei)消(xiao)化的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細胞觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日常觀(guan)察：每(mei)天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變化情況，如(ru)發現細胞(bao)汙染(ran)或異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞計數與活力(li)檢(jian)測：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色(se)等方法(fa)對細(xi)胞進行(xing)計數和活力檢(jian)測，以了解細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快速操(cao)作

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處(chu)理，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室溫或非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽水沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜質。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化導致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血(xue)清(qing)或特(te)定(ding)生長(chang)因子(zi)的培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞需添加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻繁更換培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批次，減少細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合會導致(zhi)接觸(chu)抑制和(he)分(fen)化。

三、汙染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全程在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定期檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日常觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換培(pei)養(yang)基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙染(ran)或營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分(fen)裂次數有限（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培(pei)養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存。