【概要描(miao)述】大(da)鼠胰腺(xian)腺(xian)泡細(xi)胞公(gong)司(si)正在(zai)出(chu)售的產(chan)品：COLO 741黑(hei)瘤(liu)兔(tu)輸(shu)尿(niao)管(guan)平滑(hua)肌細(xi)胞兔膀胱上(shang)皮細(xi)胞兔膀胱平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞兔膀胱基質成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞兔前(qian)列腺上皮細(xi)胞兔前(qian)列腺成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞兔腎周(zhou)細(xi)胞兔前(qian)列腺基底細(xi)胞兔腎間(jian)質成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞

大(da)鼠胰腺(xian)腺(xian)泡分(fen)離(li)自胰腺(xian)組織；胰腺(xian)分(fen)為外(wai)分(fen)泌(mi)腺(xian)和(he)內(nei)分泌(mi)腺兩(liang)部(bu)分。外(wai)分(fen)泌(mi)腺(xian)由腺泡和(he)腺管(guan)組成(cheng)，腺泡(pao)分泌(mi)胰液(ye)，腺(xian)管(guan)是胰液(ye)排(pai)出(chu)的通道。胰液(ye)中(zhong)含有(you)碳(tan)suan氫(qing)鈉、yi蛋(dan)白酶原、脂(zhi)肪(fang)酶、澱粉mei等。胰液(ye)通過(guo)胰腺(xian)管(guan)排入十(shi)二指(zhi)腸(chang)，有(you)消(xiao)化蛋(dan)白質、脂(zhi)肪(fang)和(he)糖的作(zuo)用(yong)。內(nei)分泌(mi)腺由(you)大(da)小(xiao)不(bu)同的細(xi)胞團(tuan)──胰島所組成(cheng)，胰島主(zhu)要(yao)由4種細(xi)胞組成(cheng)：α細(xi)胞、β細(xi)胞、γ細(xi)胞及PP細(xi)胞。α細(xi)胞分泌胰高血糖素(su)，升高血糖；β細(xi)胞分泌胰島素(su)，降低(di)血糖；γ細(xi)胞分泌生(sheng)長抑su，以旁分泌(mi)的方(fang)式(shi)抑制α、β細(xi)胞的分(fen)泌(mi)；PP細(xi)胞分泌胰多(duo)肽，抑制胃(wei)腸(chang)運(yun)動(dong)、胰液(ye)分(fen)泌和(he)膽(dan)囊收縮(suo)。胰腺(xian)泡(pao)主(zhu)要(yao)由錐體形(xing)的腺(xian)泡(pao)細(xi)胞組成(cheng)，與閏(run)管(guan)相連(lian)，外(wai)有(you)基膜，為(wei)典型(xing)的蛋(dan)白質分泌細(xi)胞。胰腺(xian)泡(pao)可分(fen)泌多種消(xiao)化酶，如yi蛋(dan)白酶原、胰糜蛋(dan)白原、胰澱粉mei、胰脂(zhi)肪(fang)酶、DNA 酶和(he)RNA 酶等(deng)，分別(bie)消(xiao)化食(shi)物中的營(ying)養成(cheng)分 ；胰腺(xian)泡(pao)也(ye)分泌yi蛋(dan)白酶抑制因子，防止兩(liang)種蛋(dan)白酶原被激活(huo)，腺泡(pao)腔(qiang)內(nei)有(you)泡(pao)心細(xi)胞，扁(bian)平(ping)或(huo)立(li)方形，色淺，是閏(run)管(guan)起始部(bu)的上(shang)皮細(xi)胞，為胰腺(xian)腺(xian)泡的特(te)點(dian)。
方法簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的大(da)鼠胰腺(xian)腺(xian)泡采(cai)用膠原酶消(xiao)化法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的大(da)鼠胰腺(xian)腺(xian)泡經(jing)亞(ya)甲基藍(lan)染(ran)色檢測(ce)，純(chun)度可(ke)達(da)90%以上，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵母(mu)和(he)真菌等(deng)。

本公(gong)司(si)所有(you)產(chan)品僅供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做其他(ta)科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

培(pei)養基 含FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長特性 懸(xuan)浮

細(xi)胞形態 圓(yuan)形

傳(chuan)代(dai)特(te)性 不(bu)增殖(zhi)；不(bu)傳代(dai)

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實驗(yan)器材準備：準備無(wu)菌的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手術(shu)器械等，並進行(xing)高壓(ya)滅菌或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑準備：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養基、消(xiao)化酶（如、膠原酶等(deng)）、胎牛血清、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌且在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組織來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求，選(xuan)擇合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進行(xing)相應(ying)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的組織樣(yang)本庫(ku)中獲取組織。

取材與處理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下，迅(xun)速(su)取出(chu)目(mu)標組織，盡量減(jian)少對(dui)組織的損(sun)傷(shang)，並去除(chu)多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締組織等非(fei)目(mu)的組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的組織用預(yu)冷的無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除(chu)血液和(he)雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後續消(xiao)化。

細(xi)胞分離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的組織塊放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化酶的離(li)心管(guan)中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床或(huo)培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均勻。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組織塊大(da)部(bu)分被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含(han)血清的培(pei)養基終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用細(xi)胞篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的組織碎片(pian)，然後將(jiang)濾液(ye)以適當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集(ji)細(xi)胞沈澱。

細(xi)胞觀察與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞的形(xing)態、生(sheng)長狀態、密(mi)度等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細(xi)胞汙染或異(yi)常，及(ji)時采(cai)取相(xiang)應(ying)措施。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色等方(fang)法對(dui)細(xi)胞進行計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞的生(sheng)長情(qing)況和(he)健康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組織取材後需立(li)即處理(li)，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血液、雜質。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇

- 根據組織類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過(guo)度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基選擇

- 使(shi)用(yong)含血清或特定(ding)生(sheng)長因子的培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞需添(tian)加(jia)胰島素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基品牌或批次，減(jian)少細(xi)胞適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原代細(xi)胞貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被培(pei)養皿(min)（如膠原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無菌操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培(pei)養基中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長期(qi)使(shi)用(yong)可能影(ying)響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及(ji)時丟棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每天檢查細(xi)胞形態、密(mi)度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色，及時更(geng)換(huan)培(pei)養基（通常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異(yi)常形態（如細(xi)胞變圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙染或營(ying)養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞分裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍存(cun)液建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯度降(jiang)溫(wen)後液氮(dan)保(bao)存(cun)。